液相色谱-串联四级杆质谱联用法检测中药降压制剂中掺入的尼群地平

魏 莉，张西如，高燕霞

（1.河北省食品药品监督管理局注册中心，河北 石家庄 050091； 2.河北省药品检验所，河北 石家庄 050011）

尼群地平（nitrendipine）为选择性作用于血管平滑肌的钙离子拮抗剂，能降低心肌耗氧量，对缺血性心肌有保护作用，可降低总外周阻力，使血压下降，适用于冠状动脉粥样硬化性心脏病和高血压病的治疗。近年来市场上出现在中药降压制剂中非法添加尼群地平的情况，患者在不知情的情况下长期、大量服用此类所谓的纯中药制剂极易造成生命危险，因此有必要建立灵敏、可靠的分析方法对此进行鉴定。笔者采用液相色谱及直接电喷雾串联四级杆质谱联用法，可以快速、准确地对中药降压制剂中是否非法掺有尼群地平作出判断。

1 仪器与试药

LC-20AD型液相色谱仪（日本岛津）；API 3200型质谱仪（美国AB公司）；BP 211D型电子天平。尼群地平对照品（中国药品生物制品检定所，批号为100585-200602）；标有“纯中药制剂”的降压样品（河北省药品检验所市场抽样品）；乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 液相色谱条件

色谱柱：Venusil MP C18柱（150 mm ×4.6 mm，5 μm）；流动相：0.01 mol/L醋酸铵 -乙腈（45∶55）；检测波长：200～400 nm；柱温：35 ℃；流速：1.0 mL/min；进样量：10 μL。

2.2 质谱、质谱-质谱条件

液相色谱条件：流动相为乙腈-水（60∶40）；流速为0.5mL/min；进样量为 5 μL。

质谱条件：电喷雾离子化正离子检测方式（ESI+）；质荷比范围为100～600；离子源电压为5 000 V；雾化气和加热辅助气均为10 L/min的高纯氮气；气帘气为10 L/min的压缩空气；离子源温度为400℃。

质谱-质谱条件：锥孔电压为10 V；去簇电压为65 V；碰撞能量为25 V；检测方式为全扫描一级质谱、选择离子二级全扫描质谱。

2.3 溶液制备

精密称取尼群地平对照品10 mg，置50 mL量瓶中，加流动相适量，振摇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得贮备液；精密量取3 mL，置10 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。取样品20粒，精密称定，将内容物倾出，混匀，精密称取2粒的量置10 mL量瓶中，加流动相适量，超声溶解10 min，放至室温，加流动相至刻度，用0.45 μm的滤膜滤过，精密量取滤液3.0 mL，置10 mL量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，即得供试品溶液。

2.4 尼群地平对照品的色谱、光谱及质谱行为

采用正离子检测方式对尼群地平对照品溶液进行高效液相色谱、质谱和质谱-质谱分析，结果保留时间为7.8 min，准分子离子[M+H]+峰即 m/z为 361；对 m/z为361的峰进行二级全扫描质谱分析，产生的主要碎片离子有 m/z 315.2，329.2，推测其质谱裂解途径如图1所示。

2.5 供试品的定性检测

图1 尼群地平的电喷雾四级杆质谱结构式裂解图

在相同的色谱及质谱条件下，对样品的乙醇提取液进行高效液相色谱、质谱和质谱-质谱分析。结果在样品中检测到尼群地平的准分子离子，即 m/z为361；对 m/z为361的峰进行二级全扫描质谱，产生与尼群地平对照品完全一致的碎片离子，且紫外光谱、保留时间均与尼群地平对照品相同，色谱见图2-4。结合紫外光谱、液相色谱保留时间、准分子离子和二级质谱裂解碎片4方面的信息，可以判定所测中药降压制剂中非法添加了尼群地平。

图2 紫外光谱图

图3 高效液相色谱图

图4 二级质谱图

3 讨论

中药降压制剂通常含多味中药，每味中药又含有多种化学成分，因此在含量测定时对分析方法的选择提出了更高的要求。笔者所采用的串联四级杆质谱法，可以通过对质荷比的筛选获得复杂基质中单一组分的色谱图，不需要实现其与干扰组分间完全的色谱分离；同时，通过二级质谱分析，还可以对待测物进行结果确证，以保证药物定性分析结果的准确、可靠，操作更为简便、快速。将液相色谱的高分离技术和质谱的高选择性相结合，大大提高了检测方法的专属性和灵敏度，这对于控制中药降压制剂的质量、保证临床用药的安全性具有现实意义。

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