高效液相色谱法测定康糖胶囊中丹酚酸B含量

黄胜春，葛朝霞

（湖南省邵阳市药品检验所，湖南 邵阳 422001）

康糖胶囊是由生地黄、丹参、三七、葛根和黄连等中药组成的医院制剂，具有滋阴补肾、清热消渴的功效，可降低血糖和尿糖，用于治疗消渴症引起的多食、多饮多尿、四肢无力等症[1]。但其质量标准中没有定量指标，不能很好地控制产品质量。笔者用高效液相色谱（HPLC）法测定其臣药丹参的有效成分丹酚酸B的含量，结果满意，现报道如下。

1 仪器与试药

LC-20 A型高效液相色谱仪（岛津）；AG 135型电子天平（梅特勒-托利多仪器＜上海＞有限公司）。丹酚酸B对照品（中国药品生物制品检定所，批号为111562-200605）；康糖胶囊（湖南省邵阳市第二人民医院）；甲醇为色谱纯，水为重蒸水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：UltimateMXB-C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇 -乙腈 -冰醋酸 -水（30∶10∶1∶59）；检测波长：286 nm；柱温：35 ℃；流速：1.0 mL/min；进样量：10 μL。

2.2 溶液制备

精密称取在五氧化二磷中干燥12 h的丹酚酸B对照品0.010 63 g，置100 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液（106.3 μg/mL）。取康糖胶囊10粒的内容物，研细混匀，取约4.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75%甲醇25 mL，称定质量，加热回流1 h，取出，放冷，再称定质量，用75%甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液[2]。取除丹参外的处方量药材，按所确定的制备工艺制备缺丹参的阴性样品，照供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

阴性干扰试验：分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各10μL，注入色谱仪，色谱图见图1。可见，供试品溶液色谱中丹酚酸B峰与杂质峰完全分离，阴性对照品溶液色谱中在与丹酚酸B对照品峰相应位置上无色谱峰出现，说明阴性样品对测定无干扰。

线性关系考察：精密吸取对照品溶液（106.3 μg/mL）2，4，6，8，10，12 μL，依法进样测定，以丹酚酸B的进样量（μg）为横坐标（X）、峰面积积分值（Y）为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程 Y=7.26 ×105X-3.01 ×104，r=0.999 9（n=6）。结果表明，丹酚酸 B 进样量在0.212 6～1.275 6 μg范围内与峰面积积分值线性关系良好。

精密度试验：精密吸取同一对照品溶液10 μL，重复进样5次，测定峰面积积分值。结果的 RSD=0.95%（n=5）。

图1 高效液相色谱图

稳定性试验：分别精密吸取同一供试品溶液 10 μL，于 0，1，2，4，8，16，24 h进样，测定丹酚酸B峰面积积分值。结果的 RSD=1.17%（n=7），表明供试品溶液在24 h内基本稳定。

重现性试验：取同一批样品约4.0 g，共5份，依法测定其丹酚酸B含量。结果平均含量为0.29 mg/g，RSD=1.03%（n=5）。

加样回收试验：取已知含量的样品（0.29 mg/g）约2.0 g，精密称定，共6份，置具塞锥形瓶中，分别精密加入丹酚酸B对照品溶液（106.3 μg/mL）4.0，5.0，6.0 mL，依法制备供试品溶液并测定含量，结果见表1。

表1 丹酚酸B加样回收试验结果（n=6）

2.4 样品含量测定

取3批样品，依法制备供试品溶液并测定峰面积，按外标法计算含量。结果见表2。

3 讨论

曾试用HPLC法测定方中君药生地黄中梓醇的含量，但因影响因素较多、其他成分干扰较明显、峰分离不完全而放弃，改测臣药丹参的有效成分丹酚酸B含量，获得了满意效果。

表2 样品中丹酚酸B含量测定结果

曾分别考察用超声法和加热回流法[3-5]提取丹酚酸B，结果含量分别为0.26 mg/g和0.29 mg/g，表明用加热回流法提取样品，丹酚酸B含量较高。曾用甲醇-乙腈-甲酸-水（30∶10∶1∶59）为流动相测定丹酚酸B的含量，结果峰形宽、拖尾现象严重，将甲酸改为冰醋酸，能获得良好的色谱行为。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京:化学工业出版社，2005：52.

[2]游勇基，陈铭辉.高效液相色谱法测定丹参中丹酚酸B等3种有效成分[J]. 中国药学杂志，2003，38（12）:950-952.

[3]杨广德，贺浪冲，李永茂.丹参有效部位指纹图谱定性和有效成分定量分析方法研究[J]. 药物分析杂志，2003，23（6）:409-413.

[4]康阿龙，汤迎天，王 天，等.RP-HPLC测定乙肝病毒清颗粒中丹酚酸B 的含量[J].中成药，2006，28（12）：1 860-1 861.

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