冠脉通颗粒质量标准研究

吴金伟， 何宇新*， 陈慧娟

（1.西华大学生物工程学院，四川成都610039；2.四川省中医药研究院中医研究所，四川成都 610031）

冠脉通颗粒质量标准研究

吴金伟1， 何宇新1*， 陈慧娟2

（1.西华大学生物工程学院，四川成都610039；2.四川省中医药研究院中医研究所，四川成都 610031）

质量标准；薄层色谱；高效液相色谱；淫羊藿苷

目的：建立冠脉通颗粒的质量标准。方法：用薄层色谱法对处方中的丹参、黄芪、红花、五味子、赤芍进行定性鉴别。用高效液相法测定制剂中淫羊藿苷的含量。结果：在薄层色谱中能检出丹参、黄芪甲苷、红花、五味子、赤芍，淫羊藿苷在

冠脉通颗粒为四川省中医药研究院中医研究所主持研发的第六类新药，由淫羊藿、丹参、黄芪、红花、五味子、赤芍、太子参、当归、川芎、桂枝等十味中药提取加工而成，具有活血化瘀、补血通经、清热凉血等功效，能明显抑制心肌收缩力，降低心肌耗氧量，降低外周阻力，降低心脏负荷，主要用于治疗冠心病。本试验对制剂中的丹参、黄芪、红花、五味子、赤芍进行了薄层色谱鉴别，并对太子参、当归、川芎、桂枝的鉴别作了考察，发现阴性样品有干扰。含量测定研究用HPLC法测定制剂中淫羊藿苷的含量，为该制剂的质量标准制定提供实验依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器 岛津LC-20型高效液相色谱仪，主要组成部分为LC-20AB型泵、SIL-20AC自动进样器、SPD-M20A紫外检测器；VARIAN-100型紫外可见分光光度计；2F-2型三用紫外仪（上海市安亭电子仪器厂）；BT 423S型电子天平（Sartorius）；HH-S数显恒温水浴锅（江苏省金坛市医疗仪器厂）；Milli-Q Academic超纯水仪（密理博中国有限公司）。

1.2 材料 冠脉通颗粒样品由四川省中医药研究院中医研究所提供；对照药材和对照品均购自中国药品生物制品检定所，五味子对照药材（120922-200606）；丹参对照药材（120923-200509）；赤芍（芍药）对照药材（121093-200402）；红花对照药材（120907-200609）；黄芪甲苷化学对照品（110781-200613）；淫羊藿苷化学对照品（110737-200414）；乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

2 鉴别

2.1 丹参的鉴别［1］取本品5 g，加0.2%盐酸溶液60 mL，水浴回流4 h，放冷，过滤，取滤液30 mL，加NaCl 6 g，振摇使溶解，然后用乙酸乙酯萃取3次，第1次30 mL，第2次和第3次20 mL，合并乙酸乙酯，水浴挥干，残渣加乙醇1 mL溶解，作为供试品溶液。另取丹参对照药材1 g和丹参阴性样品5 g，同法制成丹参对照药材溶液和丹参阴性溶液。吸取上述3种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-丙酮-甲酸（10∶4∶1.5）展开，取出晾干，先用氨蒸汽熏10 min，再喷以2%三氯化铁乙醇溶液，100℃烘干，待显色清晰。

2.2 黄芪的鉴别［2］取本品16 g，加甲醇40 mL，超声处理20 min，过滤，滤液加于中性氧化铝柱（100～200目，16 g，内径10～15 mm）上，用40%甲醇100 mL洗脱，收集洗脱液，水浴浓缩至30 mL，用水饱和正丁醇振摇萃取2次，第1次30 mL，第2次20 mL，合并正丁醇液，水浴挥干，残渣加甲醇0.5 mL溶解，作为供试品溶液。另取黄芪阴性样品16 g，同法制成阴性供试品溶液。取黄芪甲苷对照品，加甲醇配置成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述3种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（65∶35∶10）下层液展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至显色清晰。

2.3 红花的鉴别［3］取本品3 g，加80%丙酮20 mL，超声处理10 min，静置，取上清液，作为供试品溶液。另取红花对照药材1 g和红花阴性样品3 g，同法制成对照药材溶液和红花阴性溶液。吸取上述3种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶H薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水（7∶0.4∶2∶3）展开，取出晾干，在紫外灯（365 nm）下检视。

2.4 五味子的鉴别［4］取本品20 g，加甲醇40 mL，超声处理30 min，过滤，水浴挥干，残渣加水30 mL溶解，置分液漏斗中，用乙酸乙酯萃取2次，第1次30 mL，第2次20 mL，合并乙酸乙酯，水浴浓缩至1 mL，作为供试品溶液。另取五味子对照药材1 g和五味子阴性样品20 g，同法制成对照药材溶液和五味子阴性溶液。吸取上述3种溶液各4 μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（20∶2∶2∶0.5）展开，展距18 cm，取出晾干，置紫外灯（254 nm）下检视。

2.5 赤芍的鉴别［5］取本品16 g，加无水乙醇50 mL，浸泡15 min后，超声处理10 min，过滤，滤液挥干，残渣加乙醇1 mL溶解，作为供试品溶液。另取赤芍对照药材1 g和赤芍阴性样品16 g，同法制成赤芍对照药材溶液和赤芍阴性溶液。吸取上述3种溶液各12 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇（5∶1）展开，取出晾干，喷5%硫酸香草醛溶液，105℃加热至显色清晰。

3 含量测定

3.1 色谱条件和系统适应性试验 色谱柱：Agilent TC-C18（4.6 mm ×250 mm，5 μm）；流动相：乙腈-水（31 ∶69）；流速：1 mL/min；柱温：35℃；检测波长：270 nm。结果表明，该色谱条件下，样品色谱峰中，淫羊藿苷峰形对称，淫羊藿苷与其它组分基线分离较好，分离度大于1.5；理论塔板数（N）按淫羊藿苷峰计算，大于2 000，且淫羊藿阴性样品无干扰。见图1～3。

图1 淫羊藿苷对照品

3.2 测定波长的确定 将淫羊藿苷对照品甲醇溶液在200～800 nm波长进行扫描，结果发现在270 nm处有最大吸收，故确定270 nm作为测定波长。

图2 供试品溶液

图3 淫羊藿阴性对照溶液

3.3 供试品溶液的制备 取本品0.5 g，精密称定，加甲醇20 mL，水浴回流1 h，过滤，用适量甲醇洗涤滤渣，合并滤液，水浴挥干。残渣加水30 mL溶解，移入分液漏斗中，用10 mL水饱和正丁醇洗涤蒸发皿，并一起倒入分液漏斗。用水饱和正丁醇振摇萃取3次，每次20 mL，合并水饱和正丁醇，水浴挥干，残渣用甲醇分3次洗涤，最后定容至25 mL，即得供试品溶液。

3.4 对照品溶液的制备 取淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加甲醇配制成0.021 6 mg/mL即可。

3.5 阴性对照溶液的制备 取淫羊藿阴性样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。

3.6 线性范围 取对照品溶液，分别进样1、2、4、8、16 μL，测定其峰面积。以峰面积值（A）对进样量（C）进行回归，得标准曲线方程为：Y=2 312 554.70X－2 711.13；r=0.999 9。结果表明在0.021 6 μg～0.345 6 μg范围内，淫羊藿苷进样量与峰面积线性关系良好。

3.7 进样精密度 取对照品溶液，每次进样5 μL，连续进样5次，测得淫羊藿苷峰面积的相对标准偏差（RSD）为0.24%，结果表明，该仪器精密度良好。

3.8 稳定性试验 取同一对照品溶液（0.021 6 mg/mL）和供试品溶液，分别在 0、6、12、24、48 h 进样 5 μL，测定淫羊藿苷的峰面积。对照品溶液峰面积RSD值为1.20%，供试品溶液中淫羊藿苷峰面积RSD值为1.55%。结果表明，对照品溶液和供试品溶液在48 h内基本稳定。

3.9 重复性试验 取同一样品（090507），按供试品溶液的制备方法，制备5份供试品溶液，分别进样5 μL，测定其中淫羊藿苷的峰面积，淫羊藿苷平均含量为1.027 mg/g，RSD值为0.82%。结果表明，采用该方法提取和检测，重复性良好。

3.10 加样回收试验 取已知含量（0.987 mg/g）的同一批样品6份，按《中国药典》2005版附录项下测定加样回收率，平均回收率99.82%，RSD值为0.70%，见表1。结果表明，供试品溶液的制备及测定方法专属性好，合理可行。

表1 加样回收率试验

3.11 样品的含量测定 取不同批号的3批样品，按拟定的方法进行测定，结果测得3批样品中淫羊藿苷含量分别为0.987 mg/g、1.013 mg/g、1.045 mg/g。

表2 样品的含量测定（n=3）

4 讨论

由于处方较复杂，各种药材所含的成分相同或相似，故在定性鉴别中没有制定太子参、当归、川芎、桂枝的鉴别方法，但试验过程中对其进行了考察，发现阴性溶液有干扰。

含量测定中，分别对流动相的比例、提取方法、提取时间、进行了考察。在提取时间为1 h超声提取时，测得淫羊藿苷含量为0.906 mg/g，回流提取时，测得淫羊藿苷含量为0.986 mg/g。分别在0.5、1.0、1.5 h回流提取时，测得淫羊藿苷含量为0.896、0.986、0.980 mg/g。流动相比例参照《中国药典》2005版淫羊藿苷含量测定方法，作了微小调整。试验过程中发现，样品中水溶性成分含量较高，造成基线不能回零，故对样品进行了纯化处理，其中主要是对萃取溶剂的选择。萃取溶剂的选择，考察了乙醚、乙酸乙酯、三氯甲烷、水饱和正丁醇等溶剂，其中采用三氯甲烷、乙醚时提取率非常低，采用乙酸乙酯的提取率仅为水饱和正丁醇的59%，故最终选择水饱和正丁醇为萃取剂。

［1］梁其冰，黄守良.丹七滴丸的质量标准研究［J］.中国热带医学，2008，8（5）：837-840.

［2］中国药典［S］.一部.2005：103.

［3］崔东焕，崔龙哲.康骨胶囊中红花、三七的薄层色谱鉴别［J］.中国药业，2008，17（10）：39.

［4］李玉赜，刘永先.养心丸中红参、当归、丹参、五味子的薄层色谱鉴别［J］.辽宁中医学院学报，2004，6（3）：226.

［5］韩军涛，夏华玲，何广宏.羌归膝舒丸的质量标准研究［J］.中医正骨，2005，17（10）：77.

R927.2

B

1001-1528（2010）08-1446-03

2009-08-24

西华大学人才引进项目（R0620512）

吴金伟（1984－），男，硕士研究生，研究方向：中药制剂。

*通讯作者：何宇新（1976－），男，副教授，硕士研究生导师，博士，主要从事中药新制剂新剂型研究。Tel：（028）87720552 0.021 6 μg～0.345 6 μg范围内，线性关系良好，r=0.999 9，平均回收率为99.82%，RSD值为0.70%。结论：本试验建立的方法可以用作冠脉通颗粒质量标准的制定。