穿心莲内酯微乳的制备及含量测定

刘 意， 龙晓英， 何 琳， 曾桂先， 林 雁， 李 婷， 胡宗科

（广东药学院，广东 广州 510006）

穿心莲内酯微乳的制备及含量测定

刘 意， 龙晓英*， 何 琳， 曾桂先， 林 雁， 李 婷， 胡宗科

（广东药学院，广东 广州 510006）

穿心莲内酯；微乳；HPLC；含量测定

目的：制备穿心莲内酯微乳并建立其含量的测定方法。方法：采用正交设计法及伪三元相图结果制备穿心莲内酯微乳，含量测定采用HPLC法，以C18柱为色谱柱，以甲醇-水（55∶45）为流动相，穿心莲内酯检测波长为225 nm。结果：穿心莲内酯微乳粒径为160 nm，穿心莲内酯在10.46～83.68 μg/mL范围内线性关系良好（r=0.999 7），平均回收率为99.6%，RSD为1.6%。结论：穿心莲内酯微乳处方组成和制备工艺简单，HPLC测定穿心莲内酯微乳方法简便，可用于穿心莲内酯微乳的含量测定。

穿心莲内酯为爵床科植物穿心莲的主要有效成分，具有祛热解毒，消炎止痛之功效，对细菌性与病毒性上呼吸道感染及痢疾有特殊疗效。穿心莲内酯化学结构为二萜类内酯化合物，难溶于水，通常仅能口服给药。若制成微乳制剂可提高溶解度，促进药物在体内的吸收，目前尚未见穿心莲内酯微乳制备的相关文献。本研究以正交设计法结合伪三元相图结果优化处方，并建立HPLC法测定穿心莲内酯微乳含量，根据药物与空白微乳的溶解特性，采用甲醇为破乳溶剂，直接以流动相稀释进样，方法简便。

1 仪器与试剂、试药

大连依利特P230型液相色谱仪，P230+型紫外检测器，色谱工作站，激光散射粒度分析仪（Mastersizer 2000，英国Malvern公司）。

穿心莲内酯对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110797-200307）；空白微乳（自制，批号20080722）；穿心莲内酯微乳（自制，规格 40 mg/0.5 g，批号 20080722，20080723，20080724）。

单亚油酸甘油酯，椰子油甘油酯，GTCC，Cremophor-RH40（德国 BASF），Transcutor P，吐温 － 20、OP-10、PEG400进口分装。

2 方法与结果

2.1 处方研究

按表1选择不同的油相（A）、乳化剂（B）及助乳化剂（C），比例分别为（1∶1∶1），按正交试验表进行试验，试验设计及观察指标见表2。观察指标的选择中，根据参考文献［1］设计评价考察指标，分别以药物及其油、乳化剂、助乳化剂在体系中的互溶状况、乳化速度、乳化程度（透光率）、乳化后液面是否有漂浮油层、静置超过24 h后是否有药物析出及程度作为五个评价指标。将五个指标进行综合评分，分数越高微乳质量越好，满分为100分。药物与油、乳化剂、助乳化剂的互溶解状态占25分完全互溶25分，分层10分；透光率占30分：透光率100% ～95%，30～28分；94% ～80%，27～25分；79% ～50%，25～20分，其余斟情打分。乳化速度占15分：透光率达平衡的时间<1 min，15分；1～2 min，12分；2～3 min，8分，其余5分。乳化结束后液面出现漂浮油层占15分：没有油层15分，有油层－10分。静置>24 h后稳定情况占15分：没有油水分层和药物沉淀15分，有分层或药物沉淀－10分。表2结果看出，8号处方总分最高，其组成为单亚油酸甘油酯、吐温－20与Transcutor P。极差结果表明，3种因素中油相的影响最大，助乳化剂次之，乳化剂最小。最佳的微乳组成为A3B1（B2）C1，即油相为单亚油酸甘油酯，助乳化剂为Transcutor P，而乳化剂则有两种选择：Cremophor-RH40和吐温 －20。A3B2C1为试验号 8，而A3B1C1不在9个正交试验中，遂进行试验验证。其总分为98.5，与试验号8相接近，而且吐温－20原料方便易购，故选择A3B2C1进行以下实验。

表1 因素水平表

表2 穿心莲微乳正交表试验设计及试验结果

2.2 伪三元相图法确定微乳处方

根据正交设计的结果，以油相（单亚油酸甘油酯）、乳化剂（吐温20）和助乳化剂（Transcutor P）各为一相，各成分选择不同的比例（其中乳化剂：助乳化剂的比例分别为Km=1∶9～9∶1）充分混合，加入穿心莲内酯（40 mg/0.5 g），超声溶解，静置24 h。将形成均一、透明不分层的处方，在37℃、120 r/min搅拌下滴加到100 mL蒸馏水中，观察是否形成澄清透明溶液，在相图中标出可以形成微乳的区域。如图1阴影部分都可形成微乳，选择乳化剂用量较低得为最佳处方，其组成为：穿心莲内酯（药物）、单亚油酸甘油酯、吐温20、Transcutor P质量比为0.4∶3∶0.8∶0.2，单剂量总重量为0.50 g。

图1 伪三元相图

2.3 微乳的制备

根据正交设计及伪三元相图筛选出的处方制备微乳，以药物-油-乳化剂-助乳化剂=0.4∶3∶0.8∶0.2（质量比）称取，搅拌混匀超声溶解，静置24 h，即可得到穿心莲内酯微乳，同法制得不含穿心莲内酯药物的空白微乳。

2.4 粒度测定

将最佳处方按照“2.3”项下操作，乳化完全后采用激光粒度仪测定粒径，其粒径分布图见图2。平均粒径160 nm，粒度分布范围窄，粒径均匀。

图2 穿心莲内酯微乳粒径分布图

2.5 微乳的含量测定

2.5.1 溶液的制备 对照品溶液：精密称取穿心莲内酯对照品10.46 mg，加甲醇溶解定容，制得的对照品贮备液104.6 μg/mL。

供试品溶液：将穿心莲内酯微乳用甲醇溶解至100 mL量瓶中，超声破乳，再用甲醇定容。精密移取上述溶液1 mL至10 mL量瓶中，加流动相定容。

空白溶液：将不含穿心莲内酯的空白微乳用甲醇溶解至10 mL量瓶中，超声破乳，再用甲醇定容。精密量取上述溶液1 mL至10 mL量瓶中，加流动相定容。

2.5.2 色谱条件［2］色谱柱C18柱（4.6 mm×50 mm）；流动相：甲醇-水（55∶45）；检测波长为225 nm；柱温为室温；流速为1.0 mL/min。

2.5.3 线性试验 精密移取对照品贮备液 1，2，3，4，5，6，8 mL至10 mL量瓶中，用流动相稀释，定容，摇匀制得的一系列标准溶液，进样，记录色谱峰面积。穿心莲内酯在10.46～83.68 μg/mL范围内线性关系良好，以峰面积（A）对进样量（C）进行回归，得回归方程 A=42.692C－180.28，r=0.999 7。

2.5.4 专属性试验 分别取穿心莲内酯微乳及空白微乳，照“2.5.6”项下方法操作后进样测定，考察辅料对穿心莲内酯含量测定的干扰。结果表明空白微乳对测定无干扰（图3A、B、C）。

2.5.5 精密度、重复性和稳定性试验 取41.84 μg/mL的对照品溶液，按上述色谱条件测定，连续进样5次，记录穿心莲内酯的峰面积，计算得RSD为2.0%。取同一批穿心莲内酯微乳（批号20080722），按上述供试品溶液制备方法制备6份溶液，在上述色谱条件下测定穿心莲内酯含量，计算得穿心莲内酯含量RSD为1.4%。取同一批穿心莲内酯微乳（批号 20080722）分别在0、2、4、6、8 和 12 h 进样，测定穿心莲内酯含量，计算得穿心莲内酯含量RSD为2.4%。

图3 穿心莲内酯对照品、穿心莲内酯微乳、空白微乳HPLC色谱图

2.5.6 回收率试验 分别精密移取穿心莲对照品贮备液2，4，6 mL，至10 mL量瓶中，加入处方量的空白微乳，在上述色谱条件下，进行含量测定，平均回收率为99.6%，RSD为1.6%（n=9）结果见表3。

表3 样品回收率

2.5.7 样品的测定 按上述色谱条件对3批样品进行含量测定（n=3），结果见表4。

表4 穿心莲微乳含量测定结果

3 讨论

本实验研制自微乳给药系统，目的在于增加穿心莲内酯的溶解度，从而提高药物的生物利用度。以正交设计来筛选油相，乳化剂，助乳化剂方法简便快速。从伪三元相图可看到，可形成微乳区有9个，其中选择乳化剂用量较低得为最佳处方，其组成穿心莲内酯、单亚油酸甘油酯、吐温20、Transcutor P质量比为0.4∶3∶0.8∶0.2，单剂量总重量为0.50 g。

本实验采用高效液相色谱法测定穿心莲内酯，回收率符合分析方法要求，用其作为穿心莲内酯自微乳制剂定量控制是可行的。

［1］丁沐淦，龙晓英，林丹荣.莪术油自微乳化给药系统处方设计和体外评价［J］.广东药学院学报，2007，23（6）：610-614.

［2］张 艺，孟宪丽，赖光荣，等.RP-HPLC测定穿心莲片中穿心莲内酯含量［J］.中草药，1995，26（4）：191-192.

R944

B

1001-1528（2010）08-1424-03

2009-12-16

刘 意（1973－），男，博士生，讲师，主要从事高分子化学领域微乳液聚合研究。Tel：13533243599 E-mail：liuyi915@126.com

*通讯作者：龙晓英（1960－），女，博士，教授，硕士生导师，主要从事药物新剂型与新技术研究。Tel：020-39352559 E-mail：longxy3156@163.com