食管鳞癌组织中 h MLH1 mRNA的表达变化及意义

叶骉飞,李惠武,庞作良,李 卉,田 勍,郭文佳,王洪江*

(1新疆医科大学附属肿瘤医院,乌鲁木齐 830011；2新疆医科大学基础医学院科研中心)

目前,食管癌的发病机制尚不清楚。DNA损伤修复基因可使受损的 DNA分子恢复正常,得以保持细胞的遗传稳定性和正常功能,其在食管癌发生、发展中的作用备受关注。2008年 1月 ～2009年 5月,我们采用 RT-PCR法检测了 60例食管鳞癌组织与癌旁组织中错配修复基因 hMLH1 mRNA的表达变化,并探讨其在食管鳞癌发生发展中的作用。

1 资料与方法

1.1 临床资料 食管鳞癌患者 60例,其中男 43例、女 17例,年龄 36～75岁；UICC病理分期(1997年)Ⅰ期 2例,Ⅱa期 18例,Ⅱb期 19例,Ⅲ期 21例；分化程度为高分化 16例,中分化 36例,低分化8例；有淋巴结转移 35例,无转移 25例；术前均未行放疗、化疗；均留取患者手术切除的癌组织及癌旁正常组织标本,-70℃冰箱保存。

1.2 hMLH1 mRNA检测方法 采用 RT-PCR法。取 0.1 g组织,加入 1 ml预冷的 Trizol提取液,充分匀浆。严格按 Trizol-RNA提取试剂盒说明书进行,用紫外分光光度计检测总 RNA的含量及纯度。所得总 RNA溶解于 50μl DRPC处理水中,经逆转录后再以 cDNA为模板扩增。取 6μl扩增产物,于 20 g/L琼脂糖中进行凝胶电泳,在凝胶成像仪上照相,计算目的基因 hMLH1与 GAPDH产物灰度值比值,以此作为 hMLH1 mRNA的相对表达量。

1.3 统计学方法 采用 SPSS13.0统计软件。对计量资料两样本比较采用 t检验,计数资料采用 χ2检验及 Fisher精确概率法。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

食管鳞癌组织中 hMLH1 mRNA的相对表达量(0.761 7±0.035 7)明显低于癌旁正常组织(1.025 2±0.047 4),P＜0.05；hMLH1 mRNA的相对表达量与食管癌临床病理参数的关系见表1。由表可见,hMLH1 mRNA的相对表达量与食管癌分化程度、肿瘤浸润深度和淋巴结转移无关(P均 ＞0.05),与病理分期有关(P＜0.05)。

表1 hMLH1 mRNA的相对表达量与食管鳞癌临床病理参数的关系

3 讨论

在细胞增殖过程中,DNA损伤是一种比较普遍的现象。遗传信息得以完整稳定的代代相传,依赖于生物进化过程中形成的 DNA损伤修复系统。至今,已经发现 9种与人类活动有关的 DNA错配修复(MMR)基因。hMLH1是 MMR基因系统中的重要成员[1],位于人类染色体 3p21.3～3p23,全长 2 484 bp,含有 19个外显子,编码长度为 2 268 bp的开读框,表达产物是 756个氨基酸组成的蛋白质。hMLH1基因突变或启动子甲基化产生无功能截短蛋白或翻译沉默,无法识别错配位点,从而不能启动修复,错配的 DNA不能被修复,突变基因进一步积累,引起基因组的不稳定,导致肿瘤发生。

DNA错配修复能力低下与癌症风险增高相关。在散发性大肠癌、胃癌、肝癌、肺癌等肿瘤中,均存在MMR系统的异常[2],常表现为 hMLH1基因表达上调或下调[3]。本研究结果显示,食管鳞癌组织中hMLH1 mRNA相对表达量低于癌旁组织(P＜0.05),与贾瑞等[4]的研究结果一致。也有研究结果显示,hMLH1表达在食管不典型增生组织和肿瘤组织中均低于食管正常组织(P均 ＜0.05)[5]。本研究中 hMLH1在癌旁组织中表达水平虽然很高,但仍有少部分未表达,提示癌旁正常组织中 hMLH1也可能存在缺失、突变或其他方式的失表达,这说明 hMLH1表达缺失或突变是食管鳞癌发生发展过程中的早期分子事件之一,即早期就参与了食管鳞癌的发生或发展。有研究显示,hMLH1 mRNA表达从正常食管组织、食管非典型增生组织、原位癌到食管癌组织的过程中呈明显递减趋势[6]。这表明 hMLH1可能是癌前病变发展到原位癌期的事件,提示在食管癌癌前病变中检测hMLH1指标具有重要意义。本研究还发现,在食管鳞癌组织中,hMLH1 mRNA在不同浸润深度、不同分化程度和是否有淋巴结转移中的相对表达量无显著性差异(P均 ＞0.05),也说明 hMLH1是食管癌发生的早期事件。hMLH1 mRNA表达水平与临床分期有关,分期越晚,表达水平越低,说明 hMLH1低表达预示食管鳞癌的晚期,预后较差。

[1]Ellison AR,Lofing J,Bitter GA.Human mutl homolog(MLH1)Function in DNAmismatch repair:A prospective screen for misssense mutation in the ATPasedomain[J].Nucleic Acids Res,2004,32(18):5321-5338.

[2]Wang H,Douglas W,Lia M,et al.DNA mismatch repair deficiency accelerates endometrial tumorigenesis in Pten heterozygousmice[J].Am J Pathol,2002,160(4):1481-1485.

[3]Uehara H,Miyamoto M,Kato K,et al.Deficiencyof hMLH 1 and hMSH 2 expression is a poor prognostic factor in esophageal squamous cell carcinoma[J].J Surg Oncol,2005,92(2):109-115.

[4]贾瑞,陈志涛,王丹云,等.hMLH1蛋白在食管鳞状细胞癌和不典型增生组织中的表达[J].中国肿瘤生物治疗杂志,2007,14(2):169-172.

[5]吕全新,李惠翔,高冬玲,等.食管鳞状细胞癌及不典型增生组织中hMLH1基因道白表达的研究[J].胃肠病学和肝病学杂志,2005,14(4):377-379.

[6]焦云娟,苏蔚,王芳,等.食管黏膜上皮癌变过程中 hMLH 1的表达及意义[J].新乡医学院学报,2009,26(2):116-118.