盐酸瑞芬太尼细菌内毒素检查法的建立

付 蓉 李莉娥 覃 琨 程延军

(1.武汉大学药学院,武汉 430072;2.宜昌人福药业有限责任公司,湖北 宜昌 443005)

盐酸瑞芬太尼为芬太尼族中的最新成员,是纯粹的μ受体激动药.临床上其效价与芬太尼相似,为阿芬太尼的15～30倍.与阿芬太尼相比,起效更快,半衰期和作用时间更短、恢复迅速、无蓄积作用、镇痛效价更强及副作用更轻,被誉为21世纪的阿片类药[1].瑞芬太尼的镇痛作用及其副作用呈剂量依赖性,与催眠药、吸入性麻醉药和苯二氮卓类合用有协同作用.目前各国药典尚未收载盐酸瑞芬太尼原料及其制剂的质量标准.本试验参照《中国药典》2005年版[2]“细菌内毒素检查法”中干扰试验的原理,对盐酸瑞芬太尼中细菌内毒素进行了检查,发现盐酸瑞芬太尼对鲎试剂有干扰作用,经稀释处理后可消除干扰.

1 实验材料

1.1 仪器

VORTEX-2漩涡混合器(SCIENTIFIC INDUSTRIES,INC.);HH-2数显恒温水浴锅(江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司).

1.2 药品

盐酸瑞芬太尼原料(批号090701、090702、090703,宜昌人福药业有限责任公司).

1.3 试剂

鲎试剂 1(TAL1):批号 0909041,λ=0.5 IU◦mL-1,湛江安度斯生物有限公司生产;鲎试剂 2(TAL2):批号 1001050,λ=0.5IU ◦mL-1,湛江博康海洋生物有限公司生产;细菌内毒素检查用水:批号1001180,规格5mL/支,湛江安度斯生物有限公司生产;细菌内毒素工作标准品:批号150601-200861,规格150IU/支,中国药品生物制品检定所生产.

2 方法与结果

2.1 鲎试剂灵敏度复核试验

按照《中国药典》2005年版二部附录“鲎试剂灵敏度复核试验”规定的方法复核试验用鲎试剂灵敏度.结果见表1.

表1 鲎试剂灵敏度复核试验

2.2 供试品细菌内毒素限值(L)的确定

盐酸瑞芬太尼为麻醉镇痛药,临床每小时每公斤最大用量M=2.0μ g◦kg-1◦min-1[3]=0.12mg◦kg-1◦h-1,按L=K ◦M-1(K=5 IU ◦kg-1),加安全系数2,确定本品内毒素限值为20IU◦mg-1.

2.3 供试品最小稀释浓度

MVC=λ◦L-1;L:20 IU ◦mg-1;λ:鲎试剂灵敏度标示值,0.5 IU◦mL-1;MVC=λ/L=(0.5 IU/mg)◦(20 IU/mL)-1=0.025mg◦mL-1;按干品含量99%、水分0.5%,湿品:0.025mg/mL÷99%÷(1-0.5%)=0.0254mg◦mL-1.

2.4 干扰预试验

取盐酸瑞芬太尼供试品,用细菌内毒素检查用水稀释成 5.08、2.54、1.27、0.635 mg ◦mL-1,混合均匀,取0.1mL加入0.5 IU◦mL-1细菌内毒素的鲎试剂中,混匀,置(37±1)℃水浴中 60min观察,找出其不干扰样品最大稀释质量浓度.

质量浓度为5.08 mg◦mL-1的供试品阳性不凝固,浓度为2.54mg◦mL-1和低于此质量浓度供试品阳性凝固.结果表明:供试品溶液质量浓度为5.08 mg◦mL-1时对鲎试剂有干扰;供试品溶液质量浓度为2.54mg◦mL-1时对鲎试剂无干扰,因此干扰试验使用质量浓度为2.54mg◦mL-1.

表2 干扰预试验结果

2.5 干扰试验

取供试品用检查用水稀释至2.54mg◦mL-1,用此稀释液将内毒素工作品稀释成 1.0、0.5、0.25、0.125 IU◦mL-1系列内毒素溶液,混合均匀,取0.1 mL,加入0.1 mL鲎试剂中,混匀,置(37±1)℃水浴中60min观察,测试2.54 mg◦mL-1试验浓度下对鲎试剂的干扰情况.结果见表3.

表3 样品干扰试验结果

2.6 样品内毒素检测

将3批样品用检查用水稀释至0.0254 mg◦mL-1,按照《中国药典》2005年版二部附录规定进行细菌内毒素检测.结果3批样品均为合格.结果见表4.

表4 样品细菌内毒素检测结果

3 讨 论

本试验用两个厂家的两种鲎试剂对盐酸瑞芬太尼原料3个批号的样品进行干扰试验和确证试验,结果表明样品溶液质量浓度为2.54 mg◦mL-1时对鲎试剂无干扰作用.

药品采用细菌内毒素检查的先决条件是证明药品在满足限量检查要求的浓度下对细菌内毒素不产生干扰作用.如药品在高浓度时对细菌内毒素试验不产生干扰作用,则低浓度时也不会产生干扰[4].盐酸瑞芬太尼的最小稀释浓度(MVC)为0.0254mg◦mL-1.

表4试验结果表明,3个批号盐酸瑞芬太尼采用2个厂家鲎试剂作细菌内毒素检查,结果均符合规定,说明用此限值进行该样品细菌内毒素检查是可行的.综合临床用药、生产和检验的实际情况,本品的细菌内毒素限值可定为20IU◦mg-1.

[1］Saniay S.Patel,Caroline M.Spencer.Remifentanil[J].Drugs,1996,52(3):417-427.

[2］国家药典委员会.《中国药典》2005年版.二部[S].附录XIE.

[3］国家药典委员会.《临床用药须知》化学药和生物制品卷[M].北京:人民卫生出版社,2005:105-106.

[4］黄清泉,夏振民.药品细菌内毒素检查的实验设计[J].中国药学杂志,1997,32(2):72.