花果山“糯米茶”和“糯米花茶”中有效成分提取与测定

胡喜兰，姜 琴，尹福军，刘 涛

(淮海工学院化学工程学院，江苏 连云港 222005)

花果山“糯米茶”和“糯米花茶”中有效成分提取与测定

胡喜兰，姜 琴，尹福军，刘 涛

(淮海工学院化学工程学院，江苏 连云港 222005)

利用超声提取法对花果山“糯米茶”、“糯米花茶”有效成分进行提取，采用酒石酸亚铁比色法、紫外-可见光光度法、苯酚-硫酸比色法以及原子吸收分光光度法分别对样品中的多酚、黄酮、多糖以及矿物元素的含量进行测定。结果显示“糯米茶”和“糯米花茶”的多酚含量分别为301.7mg/g和227.0mg/g；黄酮含量分别为47.925mg/g和62.025mg/g；多糖含量分别为64.674mg/g和71.341mg/g；“糯米茶”和“糯米花茶”富含矿物元素，尤其Ca、Mg含量较高分别为：4165.7、329.75μg/g和6193.50、344.50μg/g，“糯米茶”中多酚含量明显高于“糯米花茶”，因此“糯米茶”可能是更好地抗衰老、抗氧化的保健茶。

糯米茶；有效成分；提取；测定

流苏为木兰植物门木兰纲(Magnoliopsida)菊亚纲(Asteridae)玄参目(Scrophulariales)木犀科(Oleaceae)流苏树属(Chionanthus)植物。流苏树(Chionanthus retusus Lindl. et paxt.)俗名茶叶树，乌金子、牛筋子、萝卜丝花，其高大优美，枝叶茂盛，初夏满树白花，如覆霜盖雪，清丽宜人，适宜植于建筑物四周，或公园中池畔和行道旁。也可选取老桩进行盆栽，制作桩景，是国家二级保护植物。据《植物名实图考》记载“流苏树，叶如尽青大小，疏密无定，春深开花，一枝数朵，长筒长瓣似李光而色白。雪柳之名，或以此。炭栗树生云南荒山。高七八尺，叶似橘叶而阔短，柔滑嫩润。春开四长瓣白花，细如翦纸、类纸末花而稀疏”。《中国经济植物志》中记载，取木樨科植物流苏树的芽、叶6～12g，水煎，内服，具有消暑止渴功效，主治中暑，其主要分布于黄河中下游及其以南地区[1-2]。

糯米茶即流苏，春天采其嫩叶，阴干，制成茶称为“糯米茶”，用其花制茶称为“糯米花茶”，清香爽口，别具一番风味。目前国内对其有效成分的研究尚未见报道，本实验选择连云港特有的“糯米茶”进行研究，测定其矿物元素、多酚、黄酮和多糖的含量，旨在充分开发利用本地区宝贵的天然资源，寻找一些高效的新的天然活性物质，为其综合应用提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

“糯米茶”和“糯米花茶”产自江苏连云港花果山，由江苏连云港康缘药业有限公司中药师吴舟提供。用前将其置于烘箱中，55℃条件下干燥质量恒定后粉碎，过40目筛，保存于磨口瓶中并置于干燥避光处，备用。

芦丁标准品 南京替斯艾么中药研究所；槲皮素、山奈酚标准品 中国药品生物制品鉴定所出品；异鼠李素标准品 美国Biochemika公司；无水甲醇(色谱纯)、无水乙醇、石油醚、乙酸乙酯、无水甲醇、酒石酸钾钠、硫酸亚铁、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠等(均为分析纯)。

1.2 仪器与设备

WFZ-2000型紫外-可见分光光度计 尤尼柯仪器有限公司；SK-1快速混匀器 常州国华电器有限公司；KS-150D超声波清洗器 宁波科生仪器厂；UV-2550紫外分光光度计 日本岛津公司；DZF-6050真空干燥箱 鄄城华鲁仪器有限公司；RE52CS旋转蒸发仪 浙江舟山市定海区海源仪器厂；电子分析天平、容量瓶、锥形瓶、三口烧瓶、具塞试管、酒精计、索氏提取器等。

1.3 方法

1.3.1 矿物元素提取及测定[3-4]

分别准确称取样品1.0g，置于凯氏烧瓶中进行消解，加入10mL浓硝酸和2mL浓高氯酸，静置过夜。第2天用酒精灯加热，由低温向高温逐渐升温至微沸并保持，待继棕色烟雾后的白烟散尽，样品发白近干后加入2mL浓硝酸和2.5mL蒸馏水来溶解，完全转移至25mL容量瓶中，用原子吸收分光光度法进行矿物元素含量测定。

1.3.2 有效成分提取[5]

分别称取样品约3.0g，用滤纸把药品包扎好放入索氏提取器的玻璃筒内，倒入适量无水乙醚进行加热回流去脂，去脂之后，将药品干燥，待用。

各称取样品1.0g于锥形瓶中放入10mL 80%乙醇溶液进行超声提取30min，减压过滤收集醇提取液并重复提取三次，滤液定容于50mL容量瓶中，并分别注明醇提取液1、2，待测。

各称取样品1.0g于锥形瓶中放入20mL蒸馏水进行超声提取50min，减压过滤收集水提取液并重复提取两次，滤液定容于50mL容量瓶中，并分别注明水提取物1、2，待测。

1.3.3 多酚含量测定[6-7]

采用酒石酸亚铁比色法测定多酚含量，分别取醇提取液1.0mL放入25mL容量瓶中，加水4.0mL，加酒石酸亚铁溶液5.0mL，摇匀，再加入pH7. 5的磷酸缓冲液稀释至刻度，以80%乙醇代替供试液加入同样试剂作空白，以1cm比色皿，在540nm处测吸光度(A)。

式中：1.957为上述操作条件下，当吸光度等于0.5时，每毫升供试液中多酚类的毫克数。

1.3.4 黄酮含量测定[8-10]

用微量移液器分别醇提取液100μL定容于5mL比色管中，取4mL 440μg/mL的芦丁标准液于50mL容量瓶中，摇匀，制成35.2μg/mL芦丁标准液，10min后，以1cm石英比色皿，在波长360nm处测吸光度(A)。按下述公式计算黄酮类物质含量：

式中：A样、A标分别表示样品和标准品的吸光度；c样、c标分别表示样品和标准品的质量浓度；C为经紫外-可见光光度法的单组分定量法所得浓度/mg。

1.3.5 葡萄糖标准曲线的制备

吸取葡萄糖标准溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL置于10mL容量瓶中，分别加蒸馏水1mL，再加5%苯酚溶液1.6mL，于快速混匀器上充分混合，然后加浓硫酸7mL，再于快速混匀器上充分混合，放置10min，加蒸馏水至刻度，混匀，置沸水浴恒温15min。取出冷却至室温。另取10mL容量瓶加蒸馏水1mL，5g/100mL苯酚溶液1.6mL，浓硫酸7mL作空白对照品，在波长为490nm处测定吸光度，并制备葡萄糖浓度-吸光度工作曲线。

1.3.6 多糖含量测定[11-13]

采用苯酚-硫酸比色法测定多糖含量。分别取水提取液0.5mL按标准曲线下方法操作测定样液吸光度(A)。由标准曲线查得样液中葡萄糖含量。

式中：m为样品质量/g；ρ为样品液葡萄糖质量浓度/(μg/mL)；V为样液体积/mL。

2 结果与分析

2.1 样品中矿物元素的含量

表1 样品中矿物元素含量Table 1 Contents of seven macro-mineral elements in Chinese fringe tree young leaf tea and flower tea

由表1可知，“糯米茶”和“糯米花茶”中含有多种无机微量元素，其中Ca、Mg、Fe、Zn的含量分别为6193.50、344.50、136.00、43.85μg/g，及4165.75、329.75、218.225、49.60μg/g。相比较来看，“糯米茶”中Fe含量较高，“糯米花茶”中Mg、Ca含量较高，尤其是Ca含量比“糯米茶”高出许多。

2.2 样品中茶多酚的含量

表2 样品中茶多酚含量Table 2 Polyphenol contents in Chinese fringe tree young leaf tea and flower tea

由表2可知，“糯米茶”和“糯米花茶”的茶多酚含量分别为301.7、227.0mg/g，其中“糯米茶”的茶多酚含量相对较高。

2.3 样品中黄酮的含量

图1 芦丁、样品的紫外吸收光谱Fig.1 UV absorption spectra of rutin standard and the ethanol extracts from Chinese fringe tree young leaf tea and flower tea

由1.3.4节方法及图1可计算得“糯米茶”和“糯米花茶”的黄酮含量分别为47.925mg/g、62.025mg/g，其糯米花茶黄酮含量相对较多。紫外光谱的主要吸收峰为峰带Ⅱ(220～280nm)，峰带Ⅰ(300～400nm)较弱，初步判断花和芽中黄酮可能为异黄酮、二氢黄酮或二氢黄酮醇，且图1中峰带Ⅱ较芦丁有明显的红移，说明在7-位及4＇-位引入CH3等助色团的可能性较大，结构的表征和活性研究正在进行中。

2.4 葡萄糖标准曲线及样品中多糖含量计算

图2 葡萄糖标准曲线Fig.2 Standard curve for polysaccharide quantification

测定结果，“糯米茶”和“糯米花茶”的多糖含量分别为64.674、71.341mg/g，“糯米花茶”中的多糖含量较高。

3 结 论

本实验以超声波提取为主要提取方法，对“糯米茶”和“糯米花茶”的有效成分含量进行研究，结果表明“糯米茶”和“糯米花茶”的多酚含量分别为301.7、227.0mg/g，多酚有活泼的羟基氧，能够在多酚氧化酶作用下，起到清除自由基和消除自由基毒性的作用，具有抗脂质氧化、延缓机体衰老、预防心血管疾病、防癌、抗辐射等生物活性功能[6]，其中黄酮含量分别为47.925、62.025mg/g，黄酮类化合物具有抗过敏、降血压、抗炎、抗菌、抗肿瘤、抗病毒、保肝和降血脂等活性，在食品和医学上得到广泛应用，是一种很有发展前景的天然抗氧化剂原料[15]，其进一步的分离纯化和活性研究正在进行中。

“糯米茶”和“糯米花茶”的多糖含量分别为64.674、71.341mg/g，尤其“糯米花茶”的粗多糖含量较高。多糖是茶叶中极具开发价值的一种生理活性物质。现代药理研究证实，多糖具有降血糖、降血脂、降血压及减慢心率、耐缺氧的作用，同时多糖在抗凝血、防血栓形成、保护血相和增强人体非特异性免疫功能方面均有明显效果[15-16]。

“糯米茶”和“糯米花茶”中含有多种矿物元素，其中Ca、Mg、Fe、Zn的含量分别为6193.50、344.50、136.00、43.85μg/g及4165.75、329.75、

218.225、49.60μg/g。相比较来看，“糯米茶”中Fe含量较高，“糯米花茶”中Mg、Ca含量较高，尤其是Ca的含量比“糯米茶”高出许多。从两种样品测得的数据来看，“糯米茶”和“糯米花茶”可以为人体补充这几种元素的不足。

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Extraction and Determination of Mineral Elements and Bioactive Components in Chinese Fringe Tree Young Leaf Tea and Flower Tea

HU Xi-lan，JIANG Qin，YIN Fu-jun，LIU Tao
(School of Chemical Engineering, Huaihai Institute of Technology, Lianyungang 222005, China)

Ultrasonic was applied to the extraction of bioactive components in Chinese fringe tree young leaf tea and flower tea, including polyphenols, flavooids and ploysacchrides. The contents of these components and seven macro-mineral elements including Cu, Fe, Pb and so on in the two tea samples were determined using ferrous tartrate colorimetric, UV/VIS spectrophotometric, phenol-sulfuric acid cololrimetric or atomic absorption spectrophotometric methods. Chinese fringe tree young leaf tea and flower tea had polyphenol contents of 301.7 mg/g and 227.0 mg/g, flavonoid contents of 47.925 mg/g and 62.025 mg/g and polysaccharide contents of 64.674 mg/g and 71.341 mg/g, respectively. The two types of tea were both rich in mineral elements, especially Ca and Mg, of which the contents were 4165.7μg/g and 329.75μg/g in the young leaf tea and 6193.50μg/g and 344.50μg/g in the flower tea, respectively. The polyphenol content of the young leaf tea was even higher than that of the flower tea. Therefore, Chinese fringe tree young leaf tea may be a tea that has superior anti-aging benefits for human body.

Chinese fringe tree；bioactive components；extraction；determination

R284

A

1002-6630(2010)18-0112-04

2010-06-24

连云港市自然科学基金项目(CG0806)；淮海工学院引进人才启动基金项目(KK01060)

胡喜兰(1961—)，女，教授，学士，研究方向为配位化学和天然药物化学的提取及应用。E-mail：huxilan@hhit.edu.cn