吴强强,李国富,吴 江,高启平
(1.上海海洋大学,上海 201306;2.通威股份有限公司,四川 成都 610081)
牛至油是从天然植物牛至(Origanum vulgareL.)中提取的精油,它具有独特的抗菌机理和抗氧化性能,同时其活性成分的独特香味能刺激消化道感受器,激活消化道酶的活性,促进消化,提高饲料转化率,而且无任何药物残留,不产生耐药性[1]。牛至油预混剂是我国农业部《饲料药物添加剂使用规范》(农牧发 [2001]20号)批准可在饲料中使用的一种饲料添加剂。目前国外对牛至油的研究主要集中在其对改善养殖产品抗氧化能力和延长保存方面[2-4],国内对牛至油的研究主要在畜禽上[5-8],而在水产上,国内尚无研究文章发表。
本试验选用我国水产业广泛养殖的建鲤为试验对象,在建鲤日粮中添加牛至油(有效含量5%),通过测定建鲤的生长性能和血清抗氧化指标,以期为今后在水产饲料中运用牛至油提供理论依据。
试验鱼为当年繁殖和培育的建鲤鱼种(Cyprinus Carpio var.jian),购自通威德阳试验场,购回后暂养于室外水泥池中投喂通威101鱼种料暂养驯化15 d。牛至油由广州美瑞康公司提供,有效成分含量5%。
1.2.1 试验设计 试验共设4个处理,每个处理3次重复,对照组参考NRC(1993)鲤鱼营养标准,设计基础料作为对照组,3个试验组分别在此基础上添加0.025%、0.05%、0.1%牛至油。基础饲料配方如表1所示;营养成分:总能12 310 kJ/kg、粗蛋白34.0%、粗脂肪4.2%、粗纤维6.5%、粗灰分8.1%、有效磷0.75%。饲料原料来自四川通威公司,粉碎100%过40目筛,制粒在四川通威生产线上进行,制成直径2.5mm的硬颗粒饲料。
表1 基础饲料配方及主要营养组成
1.2.2 饲养管理 试验在成都通威水产科技园进行。试验选用大小均匀、健康的建鲤鱼种1 560尾,体重16.15 g±0.03 g,随机放入12个室外水泥池中(3.5m×3.5m×1.2m)每池放养130尾。试验时间为2009年6月27日~2009年9月27日为期90 d,期间翻池一次以确定第2阶段投饲量,日投饲率为鱼体重的2%~6%,每天定时、定点投喂5次,根据试验鱼摄食情况及天气状况适当调节投喂量和次数。每天8:30和16:30测定各池溶氧和水温,每5 d换水1次,每次换水1/3~1/2。试验期间水温24~30℃,溶氧高于4mg/L,pH 值7.0~8.5,氨氮低于0.04mg/L。
1.3.1 生产性能指标 试验前、后对鱼称重,记录投饲量,试验结束时计算增重率、饲料系数、特定生长率、蛋白质效率。应用公式如下:
1.3.2 血清制备 试验结束后,停饲24 h,每池随机取鱼5尾,尾静脉采血,4℃冰箱过夜,3 000 r/min 4℃离心10min分离获得血清,血清置于-20℃保存待测。
1.3.3 测定方法 抗氧化指标均采用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒进行测定。总抗氧化能力(T-AOC)测定采用还原三价铁,与菲啉类物质形成络合物比色法,T-AOC活力定义:每分钟每毫升样品使反应体系的吸光度值增加0.01为一个总抗氧化能力单位。采用黄嘌呤氧化酶法测定超氧物歧化酶(SOD)活力,SOD的活力定义为每毫升样品SOD抑制率达50%时所对应的SOD量为一个SOD活力单位(U)。采用TBA法测定丙二醛(MDA)含量,丙二醛(MDA)含量测定采用硫代巴比妥酸比色法(单位:nmol/mL)。
1.4 统计分析 采用SPSS17.0对试验数据进行分析,所有指标采用单因子方差分析(ANOVA)进行分析,用Duncan氏法进行多重比较。数值以平均值±标准差表示。
由表2可知,0.025%、0.05%和0.1%添加组分别较对照组增重率提高了6.1%、7.4%、3.7%;试验组较对照组均降低了饲料系数,其中0.025%、0.05%组较对照组降低了 5.0%、5.1%(P<0.05),0.1%组差与对照组相比差异不显著;试验组较对照组显著提高了蛋白质效率,其中以0.05%组最为显著,比对照组提高了6.8%。
表2 牛至油对建鲤生长性能的影响
由表3可知:试验组较对照组显著提高了TAOC(P<0.05),但试验组间无显著差异,试验组较对照组提高分别提高35%、35%和38%,0.01%牛至油添加组提高最为显著;与对照组相比,试验组均显著提高了血清 SOD (P<0.05),0.025%、0.05%0.1%比对照组组分别提高17.2%、17.0%和18.5%;添加0.025%、0.05%和0.1%牛至油试验组显著降低了血清中MDA(p<0.05),其中0.025%组降低最显著,达33%。
表3 牛至油对建鲤血清抗氧化能力指标的影响
试验结果表明,在基础料中添加0.025%、0.05%牛至油显著提高了建鲤鱼种增重率,蛋白效率和特定生长率,降低饲料系数,这一结果与Dr Claire Yew Yoke Ching[9]在南美白对虾中和泰国Kasetsart大学的Orapint Jintasataporn博士在杂交鲇上的试验结果一致。一般认为牛至油抗菌活性通过对细菌细胞壁结构蛋白的变性和凝固来实现的,通过改变H+和K+的渗透性使细胞胞质膜上的酚相互作用,离子成分的分散导致细胞内关键过程受阻,从而使细胞成分渗漏,水分失去平衡,最终使细菌发生死亡[10],良好的抗菌性能能抑制动物肠道有害菌的生长,促进维持肠道菌落平衡,促进肠道对营养物质的吸收,提高饲料利用率。胡倡华等[11]研究表明牛至油能够防止和抑制动物消化道系统病原微生物的生长繁殖,这也有利于增强消化酶的活性,从而提高对营养物质的消化和利用,以促进动物的生长。雷必勇[12]在仔猪日粮中添加牛至油结果表明:牛至油可提高十二指肠和空肠的绒毛长度,表明牛至油促进动物生长可能是由于牛至油改善了肠粘膜的形态结构,增强了肠上皮细胞的吸收能力,改善动物生产性能。
T-AOC是机体内抗氧化能力的总体体现,是酶促(SOD、CAT、GST、GSH-Px等)和非酶促(维生素、氨基酸和金属蛋白等)两方面因子抗氧化能力的总合。SOD对机体的氧化与抗氧化平衡起着至关重要的作用,它能清除超氧阴离子自由基(O2-),保护细胞免受损伤[13];脂质过氧化是指活性氧、自由基攻击生物膜中多聚不饱和脂肪酸(PUFA)而引起的一系列氧化过程,此过程可产生一系列脂质过氧化物(LPO),从而对生物体造成一种氧化胁迫状态,当这种氧化胁迫超出了生物体的抗氧化防御系统的保护能力的时候,就会对生物体造成毒害[14]。而丙二醛(MDA)是自由基引发的脂质过氧化作用的最终分解产物,MDA含量的多少可以间接反映活性氧自由基含量的多少以及组织细胞脂质过氧化的强度或速率。
本试验结果表明,饲料中添加牛至油后,鲤血清T-AOC和SOD显著提高,MDA含量显著地降低,表明牛至油可以增强建鲤血清抗氧化能力,减轻鱼体的脂质过氧化作用。其可能机制是牛至油抗氧化作用主要是其酚羟基类化合物。它们既可抑制自由基的产生,也可直接清除自由基,还可以增强机体本身抗氧化系统的功能,从多个环节阻断自由基的损伤作用。
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