南瓜中多糖测定方法的探讨

李宏高， 魏利军

(1.陕西科技大学生命科学与工程学院， 陕西 西安 710021； 2.陕西省轻工业研究设计院， 陕西 西安 710054)

0 前 言

南瓜中含碳水化合物15%左右(老南瓜)，其中含有大量的功能性多糖.南瓜多糖能显著刺激胰岛素的分泌，降低空腹血糖的水平，有促进单核巨噬功能、增强肌体自我保护的作用.南瓜中的多糖从化学结构上来分析，它不同于单糖与低聚糖(双糖)，是非还原性的糖类，这种多糖在性质上与单糖、低聚糖不同，一般不溶于水，有的即使能溶于水，也只是形成胶体溶液，无甜味，一般不能形成结晶，在酶或酸的作用下以水解程度不等而完全生成为单糖，再用碱性酒石酸铜测定出含量.由于国标中没有测多糖的方法[1]，本文根据多糖的这一特性，经多次实验最终确定了它的测定方法，且检测结果的准确度和精密度均到了满意的效果.

1 实验部分

1.1 主要试剂和仪器

主要化学试剂：碱性酒石酸铜(甲液 、乙液)；浓盐酸：市售，n=12 mol/L；30%的氢氧化钠；3，5-二硝基水杨酸试剂(甲液、乙液)：将甲乙两液混合，贮于棕色瓶中于7～10天后使用；10%NaOH溶液；葡萄糖 (AR)；酒石酸甲钠(AR)；所有试剂如未注明规格均为分析纯.

仪器：pHD-3C酸度计，上海大普仪器有限公司；Spectrumlab22pc 可见分光光度计；其它为常用理化实验仪器.

1.2 样品

陕西佳县老南瓜.

1.3 测定方法

1.3.1 水解

准确称取样品0.5 g放入250 mL三角瓶中，加水50 mL溶解，加浓盐酸25 mL，装上回流装置于沸水浴中水解2 h，取出，用水冷却至室温，加30%的氢氧化钠中和至中性，用水稀释至250 mL容量瓶中备用.

1.3.2 滴定

在200 mL三角瓶中加入碱性酒石酸铜试剂甲、乙液各5 mL，加水20 mL，置电炉上到煮沸，用样品水解液进行滴定，记录消耗水解液的毫升数.

1.3.3 多糖含量计算

式中：f—10 mL费林氏溶液相当于葡萄糖的量，v—样品消耗量，m—样品称取量，X%—南瓜多糖质量百分数.

2 结果与讨论

2.1 结果分析

表1 两种方法测定结果比较

2.1.1 与标准法测定结果的比较[2]

南瓜样品分别用国家标准规定的葡萄糖氧化酶-比色法(GB/T16285-1996)和本法同时测定，分析结果见表1.

2.1.2 方法的准确度

由表1看出，相对误差Er(%)均较小，说明同一样品用两种不同方法测定，其测定结果基本相同，无显著性差异.为了检验本法的准确度，平行采用9份南瓜样品，分别加入葡糖糖标准溶液进行了加标回收实验，其回收率R1#=95.6～102.0(%)，R2#=96.0～99.6(%)，说明该法的准确度较高.

2.1.3 方法的精密度

对同一南瓜样重复进行了9次测定，测定结果的相对标准偏差为：RSD1#=2.72%，RSD2#=2.86%.从本法测定结果的均值和RSD值来看，该法的重现性好，精密度较为理想.

2.2 讨论

表2 溶液pH对南瓜多糖含量的影响

2.2.1 pH对南瓜多糖量的影响

在温度为65 ℃时，南瓜溶解度为75.82%～81.30%，在不同pH下测定南瓜的含糖量，结果见表2.

由表2看出，随着pH的升高，南瓜多糖量增加，但pH升高到一定程度，随着pH的升高，南瓜多糖量下降，所以测定南瓜多糖量适宜的pH为5.00～5.20.

2.2.2 南瓜的溶解度对南瓜多糖量的影响

表3 溶解度对南瓜多糖量的影响

在温度为65 ℃，pH为5.00～5.20时测定南瓜多糖含量，不同的溶解度对南瓜提取物多糖含量的影响如表3所示.

由表3看出，随着溶解度的增大，南瓜多糖含量增大，然而到达一定程度，南瓜多糖量会随着溶解增大而降低，所以最适宜的溶解度为75.82.%～81.30%.

表4 滴定温度对南瓜多糖量的影响

2.2.3 滴定时温度[3]

随着反应温度的升高，反应液中南瓜多糖含量增加；相反，随着温度的下降，南瓜多糖含量减少(如表4所示)，但是反应温度和溶液的pH、南瓜的溶解度等因素是相互影响、相互制约的.

由表4可以看出，滴定温度为65 ℃比较适宜，它基本上和溶液的pH、溶解度要求相一致.

2.2.4 煮沸时间[4]

一般煮沸时间短，消耗样品多，测定出南瓜多糖的含量高.反之，消耗样品量少.测出的南瓜多糖含量低.

2.2.5 滴定速度[5]

滴定速度快，消耗样品量多，测定南瓜多糖含量高.反之，消耗样品量少，测出的南瓜多糖含量低.

3 结束语

用酸水解法测定南瓜中多糖含量的方法操作简单，测定快速，适应性强，准确度和精密度高.除可测定南瓜中的多糖外，本法还可推广到其他原料中的多糖测定，是一种可以满足生产实际的准确而快捷的测定多糖的方法.

参考文献

[1] 国家标准GB/T5413.5-1997[S]. 乳糖、蔗糖、和总糖的测定,1997.

[2] 刘慧清，王瑞斌. EDTA减量滴定法快速测定固体饮料中微量铜[J]. 饮料工业,2007,10(5):36-38.

[3] 白 英. 肉苁蓉低聚糖提取工艺的研究[J]. 食品工业科技,2006,10(27):118-119.

[4] 刘 侠，米徐茗. 配方乳粉中碳水化合物测定方法的探讨[J].饮料工业，2007,10(1):34-36.

[5] 李 丹.苯酚-硫酸法测定食品总糖方法的应用与改进[J].中国卫生检验杂志,2003,13(4):506.