我国汉族人群单核甘酸多态性与前列腺癌风险的相关性研究

杨亚东,郭海滨,李丽娜,张恩璐

(1宁河县医院,天津 301500;2中国医科大学附属第四医院)

前列腺癌(PCa)发病率占世界上男性癌症的第3位,在欧洲、北美及亚洲一些国家占第 1位[1]。我国的PCa发病率虽远低于西方国家,但近年其发病率呈明显上升趋势[2]。个体遗传学上的差异是 PCa发生的必要条件。目前,以单核苷酸多态性(SNP)作为第 3代遗传标志物成为主要的研究方向。现已证实[3]位于染色体8q24上多个位点SNP与PCa风险有关,尤其rs6983561、rs16901979、rs1447925位点,已在欧洲裔美国人、美国黑人、亚洲印度人群中得到验证。但是这些SNP在我国汉族人群中与PCa的关联性尚未得到证实。2007年 2月 ～2009年 4月,我们采用直接测序法对我国汉族 PCa患者rs6983561、rs16901979、rs1447925位点SNP基因分型频率进行检测,探讨其与我国汉族人群PCa的相关性。

1 资料与方法

1.1 临床资料 所测DNA样本来源于在我院诊治的120例中国汉族PCa患者(PCa组)及同期在我院体检的120例汉族人群健康男性(对照组)。PCa组均经活检或术后病理学确诊为 PCa,排除有任何其他肿瘤史者。PCa组年龄46～86岁,平均71.2岁;对照组年龄 50～79岁,平均 70岁。两组年龄等一般资料比较,P＞0.05,有可比性。

1.2 检测方法 ①主要试剂及仪器：采用上海Invitrogen公司的ABIPRISM实验平台,PCR试剂盒,激光检测器。②DNA测序方法：取两组静脉采血 1 m l,抗凝后全血标本 -70℃保存。用水抽提法提取DNA后行PCR扩增,获得含有SNP位点在内的目的DNA片段。采用直接测序法对 SNP位点(rs6983561、rs16901979、rs1447925位点)基因进行检测。对PCR产物采用四色荧光染料(ddNTP)标记,通过单引物PCR测序反应,生成含不同荧光染料的单链DNA混合物。通过激光检测器窗口中的摄影机检测器对荧光分子逐个检测,用Chromaslite 201测序分析软件将不同荧光分子转变为 DNA序列。

1.3 统计学方法 采用SPSS13.0统计软件。两组基因型频率Hardy-Weinberg遗传平衡性检验,基因型及等位基因频率行相关性检验,用非条件Logistic模型评估单个SNP位点风险基因与PCa关联程度。计算比值比(OR)、95%可信区间(95%CI)。在计算风险等位基因时从野生型基因纯合子、变异基因杂合子、变异基因纯合子分别赋予 0、1、2值。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组中3个位点SNP等位基因及基因型频率与PCa关联性检验结果 ①rs6983561位点：PCa组C等位基因频率比A等位基因频率高,但PCa组与对照组C等位基因频率比较,P＜0.05;rs6983561 C等位基因与PCa无关联性(OR=1.19,P＞0.05)。与AA基因型相比,AC和CC基因型携带者的PCa风险虽增加,但P均＞0.05(OR=1.17、1.52),将AC与CC合并后,P仍＞0.05(OR= 1.22)。②rs16901979位点：PCa组A等位基因频率比对照组频率高,但P＞0.05,rs16901979 A等位基因与PCa无关联性(OR=1.13,P＞0.05)。与CC基因型相比,AC和AA基因型携带者的PCa风险虽增加,但P均＞0.05(OR=1.11、1.34),将AC与AA合并后,P仍＞0.05(OR=1.14)。③rs1447295位点：rs1447295位点A等位基因能增加PCa风险,与PCa明显相关(OR=1.63,P=0.042)。由于AA基因型在人群中所占比例较低,将AC与AA合并后统计,AC+AA基因型携带者的PCa风险明显升高(OR=1.87,P＜0.05)。

2.2 单因素Logistic回归分析结果 rs6983561、rs16901979位点与 PCa无关(P均 ＞0.05)。rs1447295位点与PCa有关(P＜0.05),为PCa发生的危险因素。详见表 1。

表1 3个位点SNP单因素Logistic回归分析结果

3 讨论

PCa是泌尿系统常见恶性肿瘤之一,在美国、加拿大等国家,PCa是男性最常见的恶性肿瘤。在欧洲大多数国家,PCa的发病率为 36/10万。中国、日本等亚洲国家PCa发病率较低(2.3/10万～9.8/10万)。

PCa的发生发展与遗传因素和生活方式密切相关。在我国,生活方式西方化和脂肪摄入量的持续增加导致PCa危险因素和保护因素失衡是PCa发病的重要环境因素[4],而个体遗传学上的差异是PCa发生的必要条件。近年来,各地PCa的检出率均有不同程度增加,但人种间的差异仍很明显,这可能与各人种间雄激素水平,5α还原酶活性及雄激素受体的差异有关。Gronberg等[5]报道,1个一级亲属患PCa危险度为2,两人患PCa上升至5;3个一级亲属患病危险度达到 11。在其另一项对孪生兄弟PCa患病相关性跟踪调查中发现,单卵双生的孪生兄弟PCa发生率是双卵双生者的 5倍,进一步揭示了PCa的发生与遗传因素存在密切关系。对欧美人PCa的全基因组关联研究(GWAS)发现,有多个基因位点与PCa的发病相关[6]。

SNP是人类基因组中遗传学变异最常见的一种类型,通过对比健康和患病人群SNP发生频率的差异,可以确定 SNP与疾病之间的相关性。当一个遗传标记的频率在患者中明显超过非患者时,即表明该标记与疾病关联。常见变异(CD-CV)假说[7]认为,常见疾病的易患性是由于人群中某些位点特别是在基因的编码区或调控区的常见变异引起的。如果这一假说成立,那么列出人群中频率较高的 SNP,将其与疾病表型进行关联分析,就可能检出疾病易感SNP。不同的SNP位点在不同人群中的分布频率及杂合程度不同,在进行疾病分析时提供的信息量可能存在较大差异。

目前我国的 PCa病例构成以晚期为主。对于我国汉族人群研究较多为 5-α还原酶 Ⅱ基因(SRD5A2)、维生素D受体(VDR)基因、雌激素受体(ER)基因等[8,9]。本研究结果显示,我国汉族人群中 rs1447295A等位基因与 PCa有关联性, rs1447295A等位基因携带者PCa风险增加。

我们认为,随着有关SNP研究的不断深入,可以在流行病学调查中确定PCa高危人群,进行其危险程度评价,有助于建立有效的预警系统,形成有效预防。

[1]Gronberg H.Prostate cancer epidem iology[J].Lancet,2003,361 (9360)：859-864.

[2]叶定伟.前列腺癌的流行病学和中国的发病趋势[J].中华外科杂志,2006,44(6)：362-364.

[3]Amundadottir LT,Sulem P,Gudmundsson J,et al.A common variant associated with prostate cancer in European and A frican populations[J].Nat Genet,2006,38(6)：652-658.

[4]马军,秦叔逵,张清媛.中国临床肿瘤学教育专辑[C].北京：中国协和医科大学出版社,2007：616-620.

[5]GronbergH,Damber L,Damer JE.Familial prostate cancer Sweden. A nation wide register cohort study[J].Cancer,1996,77(1)：138-143.

[6]Eeles RA,Kote-Jarai Z,GilesGG,etal.Multiple new ly identified loci associated with prostate cancer susceptibility[J].Nat Genet, 2008,40(3)：316-321.

[7]Zhang XF,Wang YM,Wang R,et al.Correlation of E-cadherin polymorphisms to esophageal squamous cell carcinoma and gastric cardiac adenocarcinoma[J].Ai Zheng,2005,24(5)：519-529.

[8]佟明,艾军魁,袁亦明,等.SRD 5A2基因A 49T多态性与前列腺癌风险性关系的研究[J].中华医学杂志,2005,85(19)：1319-1321.

[9]杨奕,王少刚,叶章群,等.湖北地区汉族人群维生素D受体基因起始密码单核苷酸多态性与前列腺癌的相关性分析[J].中华男科学杂志,2004,10(6)：411-414.