膀胱癌组织中Livin的表达变化及意义

高伟兴,王志祥,张立国,康绍叁,刘 健,王 磊,曹凤宏,李晓强

(1华北煤炭医学院附属医院,河北唐山 063000;2唐山工人医院)

Livin是新近发现的凋亡抑制蛋白(IAP)家族成员之一,研究表明[1～3],Livin在多种肿瘤细胞中呈高度表达,与肿瘤的发生发展有着密切关系。2007年 8月 ～2009年 12月,我们采用免疫组化法检测膀胱癌组织中Livin的表达情况,探讨Livin与膀胱癌的病理分级、临床分期、肿瘤数目以及复发的相关性,为膀胱癌诊断、判定预后提供理论依据。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择我院经开放手术证实且成功随访的膀胱尿路上皮癌(膀胱癌)69例,均为初次经病理检查确诊者,术前均未行放化疗,保留膀胱手术后使用化疗药物膀胱内灌注。其中男 66例,女 3例,年龄23～82岁,平均 59岁。病理分级按 WHO (1973年)标准：G1级 18例,G2级 28例,G3级 23例;临床分期按UICC-TNM(2002年)分期标准：Ta～T142例,T2～T427例;肿瘤单发者 47例,多发者22例。随访从手术后开始,如肿瘤复发,随访结束,计为复发时间,否则随访至 5 a结束,在保留膀胱手术的 60例患者中,复发 33例,无复发 27例。设为对照的 10例正常膀胱组织标本取自前列腺切除术患者。

1.2 Livin检测方法 一抗为兔抗人Livin多克隆抗体,山羊抗兔 SP免疫组织化学染色试剂盒及DAB显色试剂盒。标本用石蜡包埋,4μm厚切片,采用免疫组化SP法染色,按试剂盒说明书操作,以PBS替代一抗作为阴性对照。

胞质呈现黄色及棕黄色者为阳性细胞。将阳性细胞按照其数量及显色程度分为 3级：弱阳性(+)：阳性细胞＜10%、显色强度为淡黄色;强阳性(+++)：阳性细胞＞60%,显色强度为黄色或综黄色;中阳性(++)：阳性细胞及显色强度介于+与+++之间;细胞无染色为阴性(-)。

1.3 统计学方法 采用SPSS12.0统计软件。数据比较用χ2检验、Fisher确切概率检验和t检验。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

膀胱癌组织中 Livin阳性表达率为 65% (45/69),其中+++者12例,++者8例,+者25例;正常膀胱黏膜组织中Livin呈阴性表达(P＜0.05)。Livin阳性表达与膀胱癌病理分级、临床分期、肿瘤数量无关(P＞0.05),与肿瘤复发有关(P＜0.05)。详见表1。本组中Livin阳性表达者术后复发率为 67%(26/39),平均复发时间为 20个月, Livin阴性表达者术后复发率为33%(7/21),平均复发时间为42个月(P均＜0.05)。

表1 Livin表达与膀胱癌临床病理指标的关系

3 讨论

细胞凋亡在肿瘤的发生发展中起着重要作用,也与肿瘤的放疗和化疗效果密切相关。影响细胞凋亡的基因分为促凋亡基因和抗凋亡基因,IAP家族为后者。Livin是2000年发现的IAP家族中新成员,人类的Livin基因位于染色体20q13,全长46 kb,包含7个外显子及6个内含子,Livin蛋白N端仅包含一个杆状病毒IAP重复序列(BIR)结构,它与Caspase蛋白结合,抑制其介导级联激活反应及多种途径引起的细胞凋亡[2]。另外,C端含一个环状锌指样结构,其转录产物因剪接方式不同有两种mRNA亚型即Livinα和Livinβ,分别编码298和280个氨基酸的蛋白质,两种蛋白在功能上没有本质差别。

在胎儿时期,Livin在多种组织呈高表达,可能与生长发育有关;在正常成人的组织中(除胎盘外),Livin呈低表达或不表达,而在多种恶性肿瘤中有特异性表达,如黑色素瘤、乳腺癌、宫颈癌、结肠癌、膀胱癌、前列腺癌、白血病、淋巴瘤以及肺癌等[3,4]。本研究结果显示 Livin在膀胱癌组织中的阳性表达率为65%,而在正常膀胱黏膜组织中不表达,提示Livin与膀胱癌的发生密切相关,可作为膀胱癌的分子标志物。本研究结果还显示Livin的阳性表达与膀胱癌病理分级、临床分期及病灶数量无关,这与文献[5,6]的报告相同。G1级和 Ta～T1期的膀胱癌组织中Livin的阳性表达率分别为56%、62%,说明膀胱癌发生的早期即有Livin的阳性高表达,Livin可作为膀胱癌早期诊断的指标之一。至于Livin的阳性表达与膀胱癌的复发是否有关国内外研究结果并不一致,可能与资料的选择和随访时间不同有关。本组 69例均为初发膀胱癌患者,其中60例行保留膀胱手术,采用回顾性随访,即术后开始随访,肿瘤复发,随访即结束,计为复发时间。本组膀胱癌5 a复发率为55%,其中Livin阳性表达者的复发率为67%,平均复发时间为20个月;Livin阴性表达者的复发率为 33%,平均复发时间 42个月(P均＜0.05),说明Livin与膀胱癌复发有关。

膀胱癌是泌尿外科最常见的恶性肿瘤,术后复发率高达50%～70%,其中10%～20%的复发肿瘤恶性度增加,临床上采用膀胱镜和尿脱落细胞学检查诊断膀胱癌均有其不足之处,另外根据病理分级和临床分期来判断膀胱癌的预后和5 a生存率也有些滞后。而采用分子生物学方法来探讨肿瘤的发生发展及预后是医学前进的方向。我们认为,通过对凋亡抑制基因Livin的结构和功能进一步研究,其有望成为膀胱癌早期诊断、监测复发及预后判断的重要指标之一。

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