杜宗沛,解慧梅,吴 植,徐婷婷,黄银芸
(江苏畜牧兽医职业技术学院,江苏泰州225300)
2009年8月份,苏中地区某种猪场,某日10头2月龄仔猪发病,病猪食欲降低直至废绝,高热,遂注射头孢哌酮,未见好转。随后又有几头繁殖母猪、哺乳仔猪、保育舍猪只发病。先发病的仔猪有几头死亡,随后来本院就诊。
猪只突然发病,体温41℃~42℃,食欲降低直至废绝,精神沉郁,卧地不起;有短期轻度呕吐和腹泻;咳嗽,张口呼吸,口腔和鼻腔流出大量带血的泡沫样分泌物,呈犬坐姿势,逐渐出现呼吸衰竭;耳、鼻、颈、胸腹、四肢直至全身皮肤发绀。
剖检病死猪只可见黏膜、浆膜出血,鼻腔、喉头及气管、支气管黏膜充血,内有大量血色气泡。肺充血、肿胀、出血,呈暗红色,切面易碎,间质充满血色胶样液体,肝变明显;可见纤维素性出血性胸膜肺炎。全身淋巴结肿大、充血。心包有淡黄色积液。胸腔内有大量血色液体。胸膜与心包粘连。
4.1 病原检查 分别取病死猪的肺、胸膜及心血触片,经革兰染色后镜检,见革兰阴性卵圆形两极浓染球杆菌和长丝状菌存在。
4.2 病原分离培养 将鲜血琼脂培养基,加热到85C°,经10 min后,即制成巧克力培养基;严格无菌操作,分别取病死猪的肺、胸膜及心血,钩菌、接种,在10%CO2环境中,经37℃恒温培养24 h后挑取分离菌镜检,与4.1结果相同。
所培养的菌落呈圆形隆起,表面光滑、边缘整齐、灰白色半透明小菌落。
4.3 动物试验 取30只体重20 g左右的小鼠(购自扬州大学实验动物中心),对其中10只各皮下注射0.2 mL胸膜、心血乳剂悬液,作为第1组;再取10只各注射0.2 mL巧克力培养基培养物的生理盐水稀释液,作为第2组;另10只作为对照组。结果对照组全部存活;试验组小鼠分别在20 h~50 h死亡,剖检死亡小鼠症状1组、2组基本相似,同时进行组织触片和细菌培养结果检查也和上述发病猪一样。
4.4 生化试验 将从病料中分离的病菌进行生化试验鉴定,结果:溶血性、需 X因子、氧化酶、吲哚、脲酶、甘露醇、鸟氨酸脱羧酶、精氨酸水解酶、木糖反应为阴性。需V因子、葡萄糖产酸、氮还原、蔗糖、触酶、七叶苷反应为阳性。CO2促生长、乳糖反应变化不确定。生化试验结果表明,分离菌株符合副猪嗜血杆菌的生化特性。
4.5 V因子需要试验 挑取巧克力培养基培养菌,接种兔鲜血琼脂平板培养基,用金黄色葡萄球菌于中间画一直线,置10%CO2环境中,经37℃恒温培养24 h后,见靠近金黄色葡萄球菌直线的菌落很大,远离直线的菌落很小,甚至不见生长,证明“卫星现象”存在。同时,菌落周围β溶血明显。
4.6 药敏试验 22种药敏纸片购自上海市伊华有限公司。试验结果表明,该菌对复方新诺明、磺胺甲基咪啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺异噁唑、林可霉素、结晶紫、杆菌肽、红霉素、土霉素、卡那霉素高度敏感;对头孢哌酮、头孢噻吩、庆大霉素、四环素、青霉素、呋喃妥因、氯霉素、链霉素、洛美沙星、环丙沙星、氟甲砜霉素、安普霉素不敏感。
4.7 酶联免疫吸附试验 对发病经治愈猪只采血分离血清。选用武汉科前动物生物制品有限责任公司生产的猪传染性胸膜肺炎ApxⅣ-ELISA抗体检测试剂盒,按照说明书进行操作。结果在酶标仪上测各孔样品OD630值>0.35,判为阳性。
确诊为该猪场发生的是猪放线杆菌性胸膜肺炎。立即隔离发病猪只;对死亡猪只进行无害化处理;清理圈舍,用菌毒敌消毒杀菌。对发病猪只每头肌肉注射卡那霉素50万单位、磺胺类药物一支,早晚各1次。
对未发病猪群,圈舍消毒杀菌,如发现有症状猪只,立即进行药物注射、隔离。
全场采取以上措施3 d后,已无新发病例出现,疫情得到控制。