ADAM9在肺癌组织中的异常表达

祁娟，张军，3

（中国医科大学 附属第一医院 1.中国医科大学肺癌中心；2.肿瘤研究所分子靶向治疗研究室；3.胸外科）

近来发现，去整合素-金属蛋白酶9（a disintegrin and metalloprotease 9，ADAM9）在多种恶性肿瘤中高表达，与肿瘤侵袭、转移及预后不良相关［1～3］；ADAM9的高表达可增强非小细胞肺癌细胞A549的侵袭、转移能力［4］，但ADAM9在人肺癌组织中的表达及意义尚不清楚。本研究拟检测ADAM9在手术切除非小细胞肺癌组织标本中的表达情况。

1 材料与方法

1.1 临床资料

选择2000年4月至2006年5月在中国医科大学附属第一医院胸外科接受肺叶切除加纵隔淋巴结切除术、具有完整病历资料及随访结果的39例非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）患者。其中男性 23例（59.0%），女性 16例（41.0%），中位年龄60岁（33～71岁）。不吸烟者17例（43.6%），吸烟者22例（56.4%）。腺癌28例（71.8%），鳞癌11例（28.2%）。术后病理分期（以UICC和AJCC 1997年修订的肺癌TNM分期系统为标准）：Ⅰ期12例（30.8%），Ⅱ期5例（12.8%），Ⅲ期22例（56.4%）。术后中位生存时间31个月（4～98个月）。另取10例正常肺组织作为对照。

1.2 试剂来源

羊抗鼠ADAM9抗体（AF949）为R&D公司产品。SP法免疫组化试剂盒、DAB显色试剂盒等均购自福州迈新生物技术开发有限公司。

1.3 方法

参照文献［1～3］，采用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶法（SP法），检测ADAM9在手术切除非小细胞肺癌组织标本中的表达情况。

1.4 免疫组化结果判定

以细胞膜或细胞浆呈棕黄色为阳性染色。高倍镜下（×400）每张切片随机选择5个视野，每个视野计数200个肿瘤细胞，评定细胞染色强度，计算阳性肿瘤细胞所占的百分数。采用半定量计分方法，根据细胞染色强度和染色细胞所占的比例两者乘积来判定评分：0分为阴性（-）；1～4分为弱阳性（+）；5～8分为中度阳性（++）；9～12分为强阳性（+++）。以评分均数为界值分为低表达组和高表达组。

1.5 数据分析和统计学处理

采用SPSS17.0统计软件建立数据库文件并进行统计学分析。采用χ2检验分析ADAM9表达情况。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 ADAM9在正常肺组织和非小细胞肺癌组织中的表达

ADAM9在细胞膜和细胞质都有表达；在具有管腔结构的腺癌组织中，阳性着色主要在管腔周围的细胞靠近管腔的顶端胞浆。本组平均染色评分为8.0分，将评分小于8.0分病例归入低表达组，大于等于8.0分者归入高表达组。

ADAM9在非小细胞肺癌组织中呈现高表达。在39例手术切除肺癌组织中，23例肺癌组织中ADAM9呈现高表达，其高表达率为59%（23/39）；在10例正常对照支气管黏膜上皮细胞及肺泡上皮细胞中，ADAM9的表达均为低表达，其ADAM9高表达率为0%（0/10），二者比较差异显著，有统计学意义（P=0.001）。

2.2 ADAM9表达与临床病理因素的关系

ADAM9在肺腺癌组织中呈现高表达。在28例肺腺癌组织中，20例肺癌组织中ADAM9呈现高表达，其高表达率为71.4%（20/28）；在11例肺鳞癌组织中，仅3例肺癌组织中ADAM9呈现高表达，其高表达率为27.3%（3/11），二者比较差异有统计学意义（P=0.027）。

而ADAM9表达与患者性别、年龄、吸烟状况、病理分期等临床病理因素无明显相关性（P＞0.05）。

3 讨论

文献报道ADAM9在胰腺癌、肾癌、前列腺癌等多种恶性肿瘤中高表达，与肿瘤侵袭、转移及预后不良相关，可能参与EGF（表皮生长因子）等信号转导途径［1～3］；但ADAM9在人体肺癌组织中的表达情况尚不清楚。

Shintani等［4］发现ADAM9的高表达增强了非小细胞肺癌细胞A549的侵袭性，增强了A549细胞脑转移能力。我们在探索肝癌衍生生长因子（hepatoma-derived growth factor，HDGF）促进肺癌细胞侵袭转移机制时发现［5，6］，siRNA 沉默HDGF可明显下调AXL酪氨酸受体激酶（anexelekto，AXL）、ADAM9等肿瘤侵袭转移相关基因，显著抑制A549等肺癌细胞的体内、外生长、侵袭迁移能力，提示ADAM9等可能是HDGF促进肺癌侵袭转移信号传导途径中的重要一环，在肺癌细胞侵袭转移中发挥重要作用。

本研究应用免疫组化技术，检测手术切除NSCLC患者肺癌组织中ADAM9蛋白的表达情况，发现与正常肺组织相比，ADAM9在人非小细胞肺癌中表达显著增高；ADAM9的表达与肺癌组织学类型密切相关，在肺腺癌中的表达显著高于肺鳞癌，提示ADAM9可能在肺癌特别是肺腺癌的发生、发展中发挥作用。

本研究初步报道了ADAM9在人肺癌组织中表达情况，结果表明ADAM9在非小细胞肺癌中存在高表达，结合上述HDGF可能通过调节ADAM9等发挥其促进肺癌细胞侵袭转移作用，提示ADAM9在非小细胞肺癌侵袭转移中起重要作用，有待扩大样本量、设计前瞻性对照研究以进一步验证ADAM9在肺癌侵袭转移及预后中的意义。

［1］Grutzmann R，Luttges J，Sipos B，et al.ADAM9 expression in pancreatic cancer is associated with tumour type and is a prognostic factor in ductal adenocarcinoma［J］.Br J Cancer，2004，90（5）：1053-1058.

［2］Fritzsche F，Wassermann K，Jung M，et al.ADAM9 is highly expressed in renal cell cancer and is associated with tumour progression［J］.BMC Cancer，2008，8：179.

［3］Peduto L，Reuter V，Shaffer D，et al.Critical function for ADAM9 in mouse prostate cancer［J］.Cancer Res，2005，65（20）：9312-9319.

［4］Shintani Y，Higashiyama S，Ohta M，et al.Overexpression of ADAM9 in non-small cell lung cancer correlates with brain metastasis［J］.Cancer Res，2004，64（12）：4190-4196.

［5］Zhang J，Ren H，Yuan P，et al.Down-regulation of hepatoma-derived growth factor inhibits anchorage-independent growth and invasion of non-small cell lung cancer cells［J］.Cancer Res，2006，66（1）：18-23.

［6］Zhang J，Mao L.siRNA targeting hepatoma-derived growth factor（HDGF）inhibits growth of non-small cell lung cancer in xenograft models.Tumor Biology 35：Emerging Molecules，Mechanisms，and Models.Abstract#5135.Proc Amer Assoc Cancer Res，Volume 47，2006.