不同治疗方法对脾气虚证模型兔血清D-木糖含量的影响

李 篮， 何 群， 王欢欢， 李铁浪， 卿 蓝， 王 适

(1.湖南化工职业技术学院，湖南株洲412004;2.湖南中医药大学，湖南长沙410208;3.湖南中医药大学附属衡阳医院，湖南衡阳421001)

脾气虚证是临床上小儿疳症常见的证侯群之一，目前多用健脾益气方内服进行治疗。然而小儿服用汤剂有一定困难，寻找合适的针对小儿的治疗方法乃临床急需。捏脊疗法为中医特色疗法之一，广泛用于临床多种疾病，特别是小儿疳证的治疗中，目前临床上多采用捏脊疗法配合药物等综合治疗，对其单独使用的疗效观察偏少，能否推广适合小儿特色的捏脊疗法是目前学术界关注的内容之一。本文探索单独使用捏脊疗法对脾气虚症的治疗效果，以评价能否单独使用该法对脾气虚症进行治疗。血液中的D-木糖含量是反应肠道功能的重要指标，本实验通过对D-木糖含量的测定来检定实验兔的胃肠道功能从而对比各个治疗组的治疗效果。据报道:脾气虚症患者，木糖排泄率多数降低，表明小肠的吸收功能减弱。本研究以利血平复制的脾气虚证模型家兔为研究对象，通过捏脊疗法对血清中的D-木糖的含量的影响，观察捏脊疗法治疗脾气虚症的疗效，并与四君子汤进行对比，探讨捏脊疗法治疗脾气虚症的可行性。

1 动物、药品、试剂与仪器

1.1 动物 健康成年新西兰大白兔，湖南中医药大学实验动物中心提供。

1.2 药品与试剂 D-木糖:中国惠兴生化试剂有限公司批号20080118;间苯三酚:天津市光复精细化工研究所 批号20070607;冰醋酸:分析纯;四君子汤:湖南中医药大学第一临床医院药剂科提供;二次蒸馏水(自制)。

1.3 主要仪器 TU-1900双光束紫外可见光光度计:北京普析通用仪器有限公司。

2 方法与结果

2.1 双波长分光光度法血中D-木糖含量测定的方法学考察［1］

2.1.1 标准对照液的配制［1］称取30.1 mg木糖用重蒸水溶解并稀释至100 mL，配置成2.0 mmol/L的木糖对照品溶液。

2.1.2 最大吸收波长的测定 将标准对照液在双光束紫外可见光光度计下扫描，记录其紫外吸收光谱。结果显示，D-木糖在550 nm处有最大吸收波长。

2.1.3 供试品溶液的制备 取试管若干，在供试品测定管、标准对照管和空白管中分别加入血清、标准液和双蒸水各50 μL，各管加入显色剂(取间苯三酚约0.5 g，精密称定，加入100 mL冰醋酸及6 mL浓盐酸)5 mL，混匀，100℃水浴中10 min，流水冷却至室温。用550 nm波长，以空白管调零，读取测定管、标准管的吸收值(Abs)。

2.1.4 线性关系考察 取D-木糖标准对照品适量，精密称定，加入双蒸水溶解，定容至100 mL，摇匀，即得母液。分别移取 10、20、40、60、80、100 mL，置 100 mL 量瓶中，加入双蒸水至刻度，摇匀，即得 0.6、1.2、2.4、3.6、4.8、6.0 mmol/L 的标准对照品溶液。取各标准对照品溶液，于双光束紫外可见光光度计测定吸光度，得吸收度与浓度的线性回归方程为:Y=0.235 4X+0.049 1(R2=0.994 3，R=0.997 1)实验结果表明，样品的浓度在0.6 mmol/L到6 mmol/L之间线性关系良好。

2.1.5 仪器精密度实验 取正常兔血清50 μL，加入显色剂5 mL，混匀，于100℃水浴加热10 min，流水冷却至室温，测定A值，重复6次，计算得其RSD为0.404 5%，表明仪器精密度符合分析方法的要求，结果见表1。

表1 仪器精密度测定结果

2.1.6 稳定性实验 取正常兔血清50 μL，按2.1.4项法测定A值，每隔1 h测定1次，结果见表2。通过建立数学模型可知，吸收值随时间变化的函数关系符合零级数学方程表达式为:Y=-1.55X+101.6，决定系数 R2=0.950 8，P ＜0.05，将吸收值下降至95%所需时间代入方程中得测定时间4.258 h，供试品溶液在4.258个小时内稳定。

表2 稳定性测定结果

2.1.7 重复性测定 取试管6支，分别加入正常兔血清50 μL，再加入显色剂5 mL，混匀，在100℃水浴加热10 min，流水冷却至室温，测定A值，计算得其平均值=0.367 45，RSD=1.78%，表明重复性良好，测定结果见表3。

表3 重复性测定结果

方法学考察表明该分析方法简便、快速、准确，灵敏度高、重复性好(RSD=1.78%)，供试品溶液在4.258个小时内稳定，可用于本项研究中D-木糖的含量测定。

2.2 不同治疗方法对脾气虚证家兔的疗效研究实验设计及结果处理

2.2.1 家兔的选择与分组 选用重量为1.4～2.1 kg的普通级家兔32只，♀♂各半，动物购买后，正常喂养1周，观察健康情况，称重，编号，随机分为4组:空白对照组、模型治疗组、捏脊治疗组、中药治疗组(四君子汤治疗组)。每组8只。

2.2.2 脾气虚症模型兔的制备 除空白组外，各组家兔每日1次肌内注射利血平注射液0.25 mg/kg，连续5 d，制作脾气虚症动物模型。空白组家兔同期肌肉注射生理盐水0.25 mg/kg，连续 5 d［3］。

2.2.3 各组处理方法及实验数据的统计学处理结果 空白组:每日1次灌喂生理盐水10 mL/kg，连续两周。模型组:每日1次灌喂生理盐水10 mL/kg，连续两周。中药组:给予四君子汤治疗，每日1次灌喂四君子汤10 mL/kg，连续两周。捏脊组:每日捏脊1次，7 d为1个疗程，连续2个疗程，分别测定4组家兔在实验结束后(第15天)血清中的D-木糖含量，结果见表4。

表4 第15天各组家兔血清中D-木糖含量测定结果(±s，n=8)

表4 第15天各组家兔血清中D-木糖含量测定结果(±s，n=8)

/mmol/L空白组组别 D-木糖平均浓度5.288 8±0.980 6模型组 3.351 5±1.186 7捏脊组 4.748 0±0.741 4中药组5.029 4±1.077 3

将每组中测得的数据依次采用3S法、狄克松(Dixon)法、格拉布斯(Grubbs)法、指数分布样本法检验异常值，结果显示每组数据无异常值(P＜0.05);数据经正态性检验(Shapiro Wilk法、Kolmogorov-Smirnov法)，均满足正态性(P＞0.05);数据经方差齐性检验(Bartlett卡方检验、Levene检验)，均满足方差齐性(P＞0.05)。所以采用完全随机单因素试验统计分析进行多重比较(LSD法)，结果如表5。

表5 治疗第15天各组D-木糖浓度多重比较结果

3 小结与讨论

3.1通过实验结果得知: 模型组与空白组的差异有统计学意义，表明造模成功;空白组与捏脊组、中药组差异无统计学意义(P＞0.05)，捏脊组、中药组均与模型组差异有统计学意义(P＜0.05)，表明治疗效果显著;其中捏脊组与中药组差异无统计学意义(P＞0.05)。

3.2 D-木糖是一种五碳糖，通常在血液中不存在。樊欣荣［3］等认为，D-木糖在小肠内通过被动扩散的方式进行吸收，不需消化酶参与，吸收后在体内不被肝脏代谢，经肾排出，其吸收水平能够反映小肠的表面积及小肠吸收功能水平。本实验用利血平造模，以期在模型动物上模拟人的脾气虚证，实验结果显示造模成功。捏脊疗法为中医的特色疗法之一，广泛流传于民间，且已被应用于临床治疗之中。本实验利用捏脊疗法治疗脾气虚证并与传统中药的治疗效果进行比较，结果显示捏脊疗法与中药汤剂疗法治疗效果相近，值得进一步向临床推广。

［1］李幼生，刘放南，盛学勤，等.血清或尿液木糖快速测定及应用［J］.陕西医学检验，1995，10(2):1-2.

［2］张 锐，王联清，李雨升，等.捏积疗法对脾虚家兔血浆胃泌素的影响［J］.按摩与导引，2004，10(20):5-7.

［3］樊欣荣，朱文锋，伍参荣，等.太阴与阳明病证实验大鼠小肠D-木糖的吸收功能及肝脏ATP酶活性研究［J］.上海中医药大学学报，2007，21(4):47-49.