高效液相色谱法测定间苯二酚反应液中间苯二酚的含量

纪晓红 张 莉 邱 娟

(山东省化工研究院，济南 250014)

山东省化工研究院生化室研发出通过间苯二胺酸解制备间苯二酚的新工艺，此工艺克服了传统工艺的一些缺点，提高了反应收率。为了更好地控制工艺流程，保证实验的顺利进行，提高反应收率，需要进行中控分析，即需要检测间苯二胺酸解反应液中间苯二酚的含量。《中华人民共和国药典》中有间苯二酚的化学分析方法[1]，但仅限于间苯二酚成品的分析，对于新工艺酸解反应液中间苯二酚含量的测定不适用。因为间苯二酚反应液中除了有间苯二酚外还有少量未反应间苯二胺和中间体间氨基酚以及其它杂质，它们对分析结果有较大影响。现有文献资料中均未见间苯二酚的定量方法，因此笔者研究了采用高效液相色谱法测定间苯二酚反应液中间苯二酚含量的方法。

1 实验部分

1.1 主要仪器与试剂

液相色谱仪：LC-10ATvp型，附带SPA-10Avp可变紫外检测器，日本岛津公司；

N2000双通道色谱工作站；

紫外光栅分光光度计：752型，上海第三分析仪器厂；

间苯二酚标准样品：分析纯，含量为99.5%，天津市大茂化学试剂厂；

甲醇：一级色谱纯，天津四友精细化学品有限公司；

乙酸：分析纯，山东省化工研究院；

实验用水为自制二次蒸馏水。

1.2 色谱条件

色谱柱：Diamonsil ODS(150 mm×4.6 mm, 5 μm)；流动相为A∶B=5∶95混合溶液(A为乙腈，B为5 mmol/L 1,8-二胺辛烷与20 mmol/L庚磺酸钠水溶液混合后调节至pH 4.5)，流速为1.0 mL/min；UV检测波长：276 nm；进样量：5 μL。

1.3 实验方法

(1)标准贮备液配制

称取0.2 g间苯二酚标准样品(准确至0.000 2 g)置于100 mL容量瓶中，用高纯水溶解并稀释至刻度。

(2)标准曲线与线性范围

用移液管精确吸取标准贮备液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL分别置于10 mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，过滤。待仪器稳定后，按1.2色谱条件进样分析，记录峰面积。对峰面积A与浓度c进行线性回归，得线性方程为A=4.84×109c+16 035(r2=0.999 6)，间苯二酚浓度在0.1～0.5 g/L范围内线性关系良好。

(3)标准溶液制备

精确吸取标准贮备液2 mL置于10 mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，过滤，备用。

(4)样品溶液制备

精确称取约0.1 g样品﹙准确至0.000 2 g﹚置于10 mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，过滤，备用。

(5)间苯二酚含量测定

按1.2色谱条件，待仪器工作状态稳定后，按下列程序进样分析：(a)样品溶液；(b)标样溶液；(c)标样溶液；﹙d﹚样品溶液，分别进样5 μL，记录峰面积，用外标法[2]计算间苯二酚含量。

1.4 结果计算

间苯二酚反应液中间苯二酚的含量按式(1)计算:

(1)

式中：X——间苯二酚的含量，%；

A2——a、d两针反应液中间苯二酚峰面积的平均值；

m1——间苯二酚标样的质量，g；

P——间苯二酚标样的质量分数，%；

A1——b、c两针间苯二酚标样峰面积的平均值；

m2——间苯二酚反应液的质量，g。

2 结果与讨论

2.1 流动相的选择

反应液中杂质较多，其中含量较大的有未反应完全的原料间苯二胺和中间体间氨基酚。起初采用甲醇和水混合液，由于甲醇的洗脱能力较弱，主峰峰形很不理想，因此改为乙腈和水进行实验。首先采用乙腈-水(体积比为60∶40)作为流动相，但分离度太小，主峰与主要杂质间苯二胺、间氨基酚无法分开。后来增加流动相中水的体积分数：V(乙腈)∶V﹙水﹚=20∶80、V(乙腈)∶V(水)=10∶90，主峰与主要杂质的分离度变大，但是间苯二酚的色谱峰拖尾明显。最后将乙腈和水的体积比调整为5∶95，且加入了少量的缓冲盐并调节至pH 4.5，发现可以使间苯二酚主峰与各种主要杂质峰得到很好的分离而且主峰峰形好，色谱图如图1所示。间苯二酚的保留时间为9.432 min。

1—间苯二胺； 2—间氨基酚； 3—间苯二酚图1 间苯二酚反应液色谱图

2.2 检测波长的选择

根据文献[3]并经过实验验证可知，间苯二酚在(276±1)nm的波长处有最大吸收。虽然反应液中除间苯二酚外还有较多的中间体间氨基酚和未反应的间苯二胺，因主要是测定反应中间苯二酚的含量，故不考虑间氨基酚和间苯二胺，因此选择检测波长为276 nm。

2.3 方法的精密度与检出限

取间苯二酚含量为0.4 g/L的标准溶液在1.2色谱条件下平行进样8次，8次色谱峰面积测定结果的相对偏差为0.85%。在1.2色谱条件下，将标准溶液稀释一定倍数，进样分析，以S/N=3计算方法的检出限为0.2 μg/L。

2.4 回收试验

分别在已知含量的样品中加入一定量的间苯二酚标准样品，平行进样3次进行测定，计算回收率，结果见表1。

表1 回收试验结果

3 结语

采用高效液相色谱法测定间苯二酚反应液中间苯二酚的含量，测定结果准确可靠，为整个工艺流程的控制、反应收率的提高提供了理论依据。该方法也适用于废水中间苯二酚含量的检测以及间苯二酚成品的分析。

[1] 中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国药典(第二部)[M].第2版.北京：化学工业出版社，人民卫生出版社,1990：251-252.

[2] 汪正范.色谱定性与定量[M].北京：化学工业出版社，2000：205.

[3] 鞠秀兰.皮炎宁酊中抗氧剂的选择与间苯二酚和水杨酸的测定[J].药物分析杂志，1992，12(3)：169-170.