叶鸣,贺道远,刘霞,曾凡星,王煜
●成果报告Original Artic les
低氧和运动经AR-IGF-1对骨骼肌蛋白质合成的作用
叶鸣1,贺道远2,刘霞3,曾凡星4,王煜5
目的:探讨低氧、运动对骨骼肌蛋白质合成的作用。方法:2月龄雄性SD大鼠40只随机分为对照组、低氧组、运动组、低氧运动组,实验28天后取材测试。结果:(1)运动组AR蛋白表达量、AR活性与骨骼肌总蛋白质含量比对照组显著升高;(2)低氧组骨骼肌睾酮含量、AR蛋白表达量、IGF-1mRNA含量以及肌纤维横截面积较对照组显著降低;AR活性、骨骼肌蛋白质含量较对照组显著升高;(3)低氧运动组AR蛋白表达量、AR活性和骨骼肌总蛋白含量比运动组显著下降。结论:(1)运动后进行低氧暴露比单纯运动更能通过AR含量-AR活性水平抑制蛋白质合成;(2)低氧、运动或低氧运动通过睾酮调节AR数量及活性,最终影响骨骼肌蛋白含量;(3)低氧、运动或低氧运动可通过调节AR转录活性影响IGF-1mRNA表达,最终调节骨骼肌蛋白质合成。
低氧运动;AR表达;AR与DNA结合能力;IGF-1mRNA
高住低训(Living high-training low HiLo)是美国学者莱文在高原训练基础上提出的一种低氧训练模式,主要用于耐力项目运动员提高有氧运动能力。高住低训期间运动员白天进行耐力训练,肌肉蛋白质分解增加,合成减少,存在蛋白质净降解现象,耐力运动后蛋白质以合成代谢为主,蛋白质合成增强的趋势一直持续到第二天训练之前[1-2]。高住低训是否可以避免低氧对骨骼肌的负面作用?运动员白天进行耐力训练后,晚上在低氧环境中休息是否抑制骨骼肌蛋白质合成?这些都直接关系到运动员训练后的恢复、运动员力量、速度素质的保持或提高,所以为了全面完整地把握高住低训对机体作用的规律,高住低训,尤其是高住低氧对蛋白质合成的影响是一个急待探讨的问题。因对运动员实施肌肉活检很困难,所以本研究以大鼠为研究对象,利
用一个促进骨骼肌蛋白质合成的耐力运动训练模型,模拟高住低训,观察低氧、低氧运动是否通过骨骼肌睾酮含量影响雄激素受体含量及其活性,调节雄激素受体的靶基因-IGF-1mRNA,最终影响耐力运动后骨骼肌蛋白质的合成,试图为高住低训期间运动员运动能力和肌肉力量保持和提高提供理论依据。国内外未见高住低训从AR表达、AR转录激活活性和IGF-1mRNA等方面对骨骼肌蛋白质合成作用及其机理的研究报道。
健康雄性、2月龄SD大鼠40只,体重(180~200)g,随机分为4组:对照组、低氧组、运动组、低氧运动组,每组各10只。北京大学医学部实验动物科学部SPF级动物房中饲养,温度22~26℃,湿度30%~58%,自由进食及饮水。
第28天各组动物出低氧帐篷后分别用25%乌拉坦麻醉后腹主动脉取血处死,常规制备血清,置于-80℃冰箱保存。快速取出腿部的腓肠肌,剔除脂肪和筋膜,用预冷的生理盐水洗净,滤纸吸干后称重,投入液氮中保存。
用于形态学测定的肌肉块被切成4×4×6mm3大小,自然伸直(勿牵拉),用OCT(SAKURA,O.C.T.Compound)包裹后,投入用液氮预冷的装有异戊烷(-70℃)的小烧杯中速冻约40 s,之后迅速用锡纸包好标记放入液氮中,取出后用封口袋密封后于-80℃长期保存,用于冰冻切片。
用于匀浆的肌肉样品,被切成重约100mg大小。用锡纸包好、标记后放入液氮中,于-80℃长期保存。
1.3.1 骨骼肌睾酮含量称取40mg的腓肠肌,用眼科小剪迅速剪碎,按1:4的比例加入组织匀浆介质,匀浆20 s*3次,匀浆速度为13 000 rpm,然后4℃,20 000 r/min离心20min,取上清于-80℃储存待测。
采用北京华英HY-020睾酮放免试剂盒,取标准品和待测样品按照试剂盒的操作步骤进行加样,利用GC-911-r计数仪直接读出样品浓度。
1.3.2 骨骼肌AR蛋白表达取40mg骨骼肌组织,以1:4的比例加入细胞裂解缓冲液,冰浴匀浆,测定蛋白浓度。上样量40 ug/well,浓缩胶60V,1.5 h,分离胶90V,2.5 h,电泳。Janssen Life Sciences Products半干式电转印仪350mA转膜1.5 h。封闭过夜后,与稀释1∶500的抗体(AR(N-20)sc-816:Santa Cruz Biotechnology)4mL结合,4℃过夜。与稀释1∶3 000的二抗(Anti-Rabbit IgG/HRP:Dakocytomation)4m L结合,室温震荡孵育1 h。利用ECL显色试剂盒和ImageQuantECL凝胶成像仪曝光,采集并分析图像。
1.3.3 骨骼肌组织中AR与DNA结合能力称取肌肉组织40 mg,利用美国Pierce公司NE-PER核蛋白抽提试剂盒制备核蛋白抽提物。考马斯亮蓝法进行核蛋白定量。采用特异性的竞争结合实验来证实探针的特异性,探针序列(5'-atagtccatgatgttctcaagat-3',5'-atcttgagaacatcatggactat-3'),利用AR(N-20)sc-816(Santa Cruz Biotechnology)进行超级凝胶电泳实验确定结合复合物中AR蛋白的特异性。凝胶电泳迁移率改变分析实验(EMSA):采用美国Pierce公司LightShift ChemiluminescentEMSA试剂盒和TL-2000紫外交联仪进行核蛋白与探针结合,电泳,显影。利用LAS-3000化学发光及成像系统成像,采集信号。用Molecular Imager FXSystem软件系统对条带进行灰度分析。
1.3.4 骨骼肌IGF-1mRNA表达首先以TrizolTM提取总RNA,使用Farmentas K1622试剂盒,按说明书进行逆转录操作。使用taq酶(TakaRa DR001A)试剂盒,按说明在PCR仪(GeneAmpPCRSystem9700)进行扩增。IGF-1基因的引物序列(5'-AAGCCTACAAAGTCAGCTCG-3',5'-GGTCTTGTTTCCTGCACTTC-3';NM 178866.2),扩增条件为:94℃5min;94℃30 sec,58℃30 sec,72℃45 sec,32循环;72℃10min。取10 uLPCR产物,1.5%琼脂糖、100V恒压电泳30m in,凝胶紫外数字成像系统(LISCAPcaptureapplication软件)拍照,图像条带光密度分析处理。1.3.5骨骼肌总蛋白质含量采用BCA测试方法,按PIERCE公司BCA蛋白测试试剂盒说明进行测试。
1.3.6 冰冻切片和HE染色冰冻切片:将肌肉样品从-80℃冰箱中取出放入恒冷冰冻切片机(LEIKA CM1900)内,在-20℃平衡30min后切厚为8 um切片,然后贴于涂有APES载玻片上,晾干后,冷丙酮固定10min,PBS洗3次,存于-20℃,用于HE染色。HE染色:常规HE染色。显微观察、肌纤维横截面积测量:HE染色封片,在光学显微镜下观察拍片。IPP 6.0软件测量面积,每片选取4个视野计算面积平均值。
所有数据均以“平均数±标准差”表示,用Spss13.0统计软件进行数据处理,组间比较用单因素方差分析。P<0.05为显著性差异,P<0.01为非常显著性差异。
由表2所示,低氧组AR表达比运动组明显下降,说明低氧抑制AR蛋白水平。Ghafaretal的研究报道说明了LNCaP细胞在24 h持续低氧暴露和24 h低氧暴露后复氧均降低AR蛋白水平和AR靶基因PSA水平[3]。推测低氧应激一方面抑制AR蛋白翻译,抑制AR蛋白质合成,一方面降低AR蛋白的稳定性,增加AR蛋白的降解,所以在低氧作用下AR蛋白水平是降低的。低氧运动组的AR蛋白表达介于低氧组和运动组之间,结合运动组的变化,说明低氧运动组AR蛋白表达明显减低是低氧抑制效应起了主要作用。
表2 各组指标测试结果Tab.2 The testing results of several index between groups
各组骨骼肌睾酮、AR蛋白水平与腓肠肌总蛋白含量的变化一致,说明睾酮是通过AR调节骨骼肌蛋白质合成,AR蛋白水平的变化更能反映骨骼肌蛋白质含量的变化。低氧暴露、运动或低氧运动均通过改变骨骼肌睾酮水平来调节AR蛋白水平改变,最终影响骨骼肌蛋白质含量。
雄激素受体是一种配体依赖的核转录调节因子,在细胞核内与DNA上特定的ARE结合,调节靶基因表达,产生不同的生物效应,AR与DNA结合能力反应了AR核转录因子的活性。
如表2所示,运动组AR与DNA结合能力明显提高,结合运动组AR蛋白水平升高,说明运动不仅通过改变AR含量,还可通过提高AR活性来调节骨骼肌蛋白质的合成。近年来的研究证明运动可以通过MAPK途径影响AR活性。与运动相关联的生长因子、细胞因子、缺氧、胞内钙离子的变化和机械应力等都可以刺激MAPK信号级联。许多学者的研究从MAPK信号转导途径探讨骨骼肌对运动的适应机制:有学者的研究显示运动使骨骼肌中p38MAPK和JNK一次性升高,尤其是p38MAPKγ的活性明显升高[4];动物实验和人体实验都表明一过性的耐力和力量训练后,骨骼肌细胞p38MAPK分子被激活[5-6];也有研究表明8周的耐力训练使骨骼肌发生适应性改变的同时,骨骼肌中p38MAPK活性明显增高[7]。
低氧组和低氧运动组AR与DNA结合能力均略高于对照组,但没有显著性差异变化。Soo-Yeon Park[8]等人的研究观察了LNCaP细胞在低氧环境中暴露4 h后复氧0、2、6、24 h的AR与ARE结合活性的变化。结果显示4 h低氧(氧浓度低于0.05%)处理后,LNCaP细胞中AR与ARE结合活性明显提高,在复氧2h时达到最大,然后随时间的推移逐渐下降。细胞被暴露8或16 h低氧后复氧2 h,观察AR的刺激作用小于低氧处理4 h后所看到的最大AR刺激作用。同时还用Western blot和ELISA assay分析观察4 h低氧处理后的复氧期间,细胞培养基中PSAmRNA水平、细胞PSA蛋白和PSA分泌明显增加。并且还发现低氧作用于转染了ARE-荧光素酶报告基因的LNCaP细胞后,荧光素酶活性明显提高了。以上两部分研究说明低氧提高了AR的转录激活作用,而且不只限于PSA基因。同时在低氧处理4、8、16 h后复氧24 h没有观察到AR蛋白水平的任何变化,说明低氧可促进AR的转录激活作用,但并不改变AR的含量。为了进一步证实短暂低氧对AR转录激活作用不仅是在LNCaP细胞,同时又利用人类缺乏AR的DU145前列腺癌细胞,把外源的野生型AR和ARE-荧光素酶一起引入到DU145细胞,进行4 h低氧暴露后发现:与LNCaP细胞一致,短暂的低氧暴露激活外源性AR的转录活性,并提高了ARE-荧光素酶的活性,在低氧处理4h后同样观察到低氧对AR的最大刺激作用。总而言之,以上研究结果说明:低氧、复氧的动态变化提高了AR-ARE结合能力和AR靶基因的表达。本实验结果还显示在雄激素衰竭的培养基中低氧诱导的AR-ARE结合活性完全停止,说明低氧提高AR转录激活是依赖雄激素的,雄激素结合雄激素受体是AR转录激活作用所必需的。低氧可提高AR对低雄激素水平的敏感性,建议在雄激素低于生理水平时,低氧明显刺激AR的转录激活活性。
Ghafar etal的研究却报道了在进行24 h持续低氧暴露后或24 h低氧后复氧,LNCaP细胞中PSA和AR蛋白水平均明显降低。作者分析低氧提高AR功能的分子机理在于低氧激活ROS,活化的ROS经由PTK蛋白酪氨酸激酶刺激PI3K和 MAPK途径,激活的MAPK信号途径可明显提高AR的转录激活活性,低氧产生的ROS可能直接修饰AR的氧化-还原敏感区域,低氧调节共激活因子和抑制因子之间的平衡变化可能也影响AR激活。
本研究中未见单纯低氧暴露或运动后低氧暴露比对照组明显提高AR的转录活性,分析原因可能是低氧刺激的浓度较高,机体对低氧逐渐适应的结果。尽管很多研究建议可能通过不依赖雄激素的途径激活AR促转录活性,但本实验通过观察各组骨骼肌睾酮含量、AR表达和AR活性的变化,证实了AR的转录激活是依赖雄激素的。
虽然低氧组和高住低训组睾酮水平明显降低,但AR蛋白水平和AR活性比对照组都没有显著性差异的变化,因此可以解释低氧组和高住低训组骨骼肌总蛋白含量相对于对照组没有明显变化。
IGF-1对肌肉组织的生长起调控作用,表现为增加肌肉蛋白质合成,在细胞整体水平上对细胞的增殖、分裂、生长、以及凋亡的生理过程发生影响。骨骼肌组织以自分泌或旁分泌的方式自身分泌产生IGF-1。
有少量耐力运动对IGF-1影响的报道。大鼠12周跑台运动后骨骼肌IGF-1和睾酮受体mRNA水平没有变化,而血中IGF-1和睾酮水平显著降低[9]。Eliakim报道5天耐力运动后肌肉IGF-1蛋白增加而基因表达没有变化[10]。
由表2所示,运动组IGF-1mRNA表达与对照组相比没有显著变化,本研究结果与已有的研究一致。分析认为长时间耐力运动后机体产生适应,加上耐力运动本身的牵拉作用不如力量运动时明显,可能导致对IGF-1分泌影响不大。耐力运动主要是改善肌肉供血与供氧,肌纤维的牵拉刺激不明显,IGF-1自分泌/旁分泌不显著。
由表2所示,低氧组IGF-1mRNA表达明显下降,低氧运动组IGF-1mRNA表达无显著变化。低氧及低氧运动对IGF-1的影响报道极少,Moromisato发现低氧增加IGF-1mRNA且具有组织特异性[11]。有报道低氧时GH/IGF-1轴受到抑制[12],至于肌肉组织如何应对这一反应,是否与GH/IGF-1轴受到抑制有关还不清楚。还有研究显示低氧运动后血GH迅速升高,但这种升高并没有导致肝及血中的IGF-1的响应升高[13]。
AR转录活性通常需要用AR与DNA结合能力和AR靶基因mRNA水平的高低来共同反映。在骨骼肌中,IGF-1是主要的促合成因子,通过PI3K信号转导途径调节骨骼肌蛋白质合成。IGF-1是AR的靶基因,近年来很多研究相继证明睾酮促进骨骼肌蛋白质合成的机理是睾酮通过AR激活IGF-1。Urban etal的研究显示对性腺机能减退的老年男性补充外源性睾酮可提高肌肉蛋白质合成和肌肉力量,同时伴有肌肉中IGF-1 mRNA升高[14]。睾酮通过AR使IGF-1mRNA升高可能是提高肌肉蛋白质合成必需的[15],相反雄激素减少的青年肌肉中IGF-1mRNA减少,导致肌肉萎缩[16],AR、IGF-1mRNA增加与肌肉增加明显相关[17]。睾酮治疗可使阉羊肌肉局部产生IGF-1增多,而IGF-1增加与肌肉重量增加明显相关[18]。
近年来还有一些研究提示:雄激素不仅通过AR促进IGF-1的转录激活,还会促进IGF-IR的转录激活。在前列腺上皮细胞,雄激素可能是通过激活细胞质中Src-Raf-Ras-Map激酶途径,激活ERK1/2,通过AR提高IGF-IR启动子的转录活性[19],促进IGF-IR升高。除此之外,雄激素还可能刺激KFL6增加,KFL6通过与IGF-IR启动子结合提高IGF-IR的表达[20]。尽管还存在很多争议,但这些研究一致显示雄激素是通过AR提高IGF-IR的蛋白表达,同时提高IGF-IR磷酸化水平,IGF-IR的变化提高IGF-1的细胞增殖反应。这种机理是否存在于骨骼肌细胞还有待进一步研究。
综合AR与DNA结合能力和IGF-1mRNA的变化,说明低氧、运动、低氧运动可通过调节AR转录活性影响骨骼肌中IGF-1mRNA的表达,通过IGF-1途径最终调节骨骼肌的蛋白质合成。
如表2所示,运动组大鼠骨骼肌总蛋白质含量明显升高反映了机体对28天耐力运动的良好适应,说明本实验采用的运动模型有效促进肌肉蛋白质的合成代谢,在此模型基础上进行低氧暴露模拟高住低训是可行的。低氧组比对照组略高,说明单纯的间断性低氧暴露对蛋白质含量影响不大。28天低氧运动组的骨骼肌总蛋白含量最低,与运动组比较,说明每天运动后进行低氧暴露还是在一定程度上抑制了蛋白质的合成。
运动后进行低氧暴露降低骨骼肌总蛋白质含量的原因可能是:低氧抑制蛋白质合成、加快蛋白质分解,其中主要是抑制蛋白质合成,可能主要是由于促合成激素的变化或缺氧直接抑制了蛋白质的合成。
低氧暴露可能抑制睾酮合成:长期低氧暴露抑制下丘脑-垂体-性腺轴,抑制睾丸间质细胞内睾酮合成酶的活性,促进糖皮质激素分泌,糖皮质激素在下丘脑-垂体-睾丸三个环节影响睾酮的分泌。除了雄激素之外,蛋白质合成代谢还受生长激素、胰导素等激素通过PI3K、MAPK途径调节。有学者报道了2 km和5 km的慢性连续低氧激活SS,显著抑制GH-IGF-1轴,这种抑制作用一直持续整个低氧过程[12]。结合本研究同期实验28天低氧运动组胰岛素的变化,说明低氧、低氧运动使蛋白质含量比对照组、运动组减低的另一可能机理是低氧降低血清中胰岛素水平。
Sandrine等人报道了低氧直接抑制蛋白质合成:大鼠肝细胞在5%氧浓度的低氧环境中孵育120min后,细胞内ATP、RNA和蛋白质合成分别明显降低了62%、82%和93%[21]。Victor R等人测试了大鼠体内心肌、骨骼肌、肝脏、胫骨、皮肤、大脑、肾、肺等各种组织在10%氧浓度中低氧暴露6 h后,蛋白质合成速率降低了15%~35%[22]。近几年关于低氧直接抑制蛋白质合成的机理主要集中在蛋白质的翻译环节:低氧通过抑制mRNA翻译的起始步骤而快速抑制蛋白质的合成,低氧抑制翻译是通过两个不同的机理介导的[23]:第一个是通过磷酸化并抑制真核起始因子eIF2α,PERK激酶可磷酸化这个因子;低氧抑制翻译的第二个机理是使第二个真核起始复合物eIF4F失活。低氧很快并且持续的抑制了mRNA翻译,在1 h急性低氧暴露后蛋白质合成速率降低了60%~70%,随后复氧可使蛋白质合成很快恢复到常氧水平[24]。低氧使蛋白质合成减少并不是通过HIF途径,而是通过氧传感途径直接抑制mRNA翻译的起始步骤[25],低氧通过抑制mTOR途径的4E-BP1和eEF2降低乳腺上皮细胞的蛋白质合成[26]。
本实验发现28天低氧运动后肌纤维面积有减小的趋势(比对照少7%),低氧暴露后肌肉萎缩肌纤维面积减少14%。在一些研究中也发现了低氧暴露及低氧运动对肌肉体积的影响,Hoppeler[27]发现人体在慢性低氧暴露后肌肉萎缩,肌肉横截面积下降10%。Sillau[28]等人以大鼠为研究对象,发现慢性缺氧时骨骼肌纤维萎缩、变细,毛细血管密度增加。间歇性低氧运动对肌肉体积的影响报道不多。我们采用的是运动后1 h即进入低氧舱进行低氧暴露,可能运动后低氧状态下机体的恢复不充分,影响肌肉生长,肌纤维面积有减少趋势。
肌肉在低氧暴露及低氧运动后适度萎缩是低氧和运动适应的结果。机体处于低氧环境时氧供应减少,为了适应这一环境的变化,机体通过肌纤维的萎缩、变细,毛细血管密度增加,使氧的弥散距离缩短,从而有利于骨骼肌组织氧的供应,适应低氧环境。耐力运动时也可能造成骨骼肌的低氧,机体或者通过增强心肺功能增加氧供或线粒体毛细血管增多加强氧利用,或者肌纤维的适度萎缩等来调整自身结构和机能状况从而适应运动时的氧供。缺氧引起肌肉萎缩的机制不清楚,可能与缺氧时肌肉蛋白的大量分解及动物的活动量减少有关。
综上所述,与运动组相比,低氧运动组AR含量、AR活性及骨骼肌总蛋白含量均显著降低,说明运动后进行低氧暴露比单纯运动通过AR含量-AR活性水平抑制蛋白质合成,影响机体的恢复。综合四组骨骼肌睾酮含量、AR蛋白水平、AR活性、骨骼肌蛋白含量的变化,说明低氧、运动或低氧运动通过睾酮调节AR数量及活性,最终影响骨骼肌蛋白含量。综合四组AR与DNA结合能力和IGF-1mRNA的变化,说明低氧、运动或低氧运动可通过调节AR转录活性影响骨骼肌中IGF-1mRNA的表达,通过IGF-1途径最终调节骨骼肌的蛋白质合成。
[1]叶鸣,刘霞,曾凡星.高住低训对骨骨骼肌蛋白合成的作用及机理[J].首都体育学院学报,2009,(5):106-109,125.
[2]叶鸣,贺道远,曾凡星.高住低训对骨骼肌蛋白质及MHC含量作用及其机理研究[J].西安体育学院学报,2009,(6):74-78.
[3]GhafarM A,Anastasiadis AG,Chen MW,etal.Acutehypoxia increases the aggressive characteristics and survival properties of prostate cancer cells[J].Prostates,2003,54(1):58-67.
[4]BoppartM D,Hirshman M F,Sakamoto K,etal.Static stretch increases c-Jun NH2-terminal kinase activity and p38 phosphorylation in rat skeletalmuscle[J].Am JPhysiolCell Physiol,2001,280(2):352-358.
[5]Nader G A,Esser K A.Intracellular signal specificity in skeletalmuscle in response to differentmodes of exercise[J].JAppl Physiol,2001,90(5):1 936-1 942.
[6]Krook A,Widegren U,Jiang X J,etal.Effectsofexerciseonmitogen-and stress-activated kinase signal transduction in human skeletalmuscle[J].Am JPhysiolRegul IntegrComp Physiol,2000,279(5):1 716-1 721.
[7]朱红军.耐力训练对糖尿病大鼠骨骼肌p38信号激酶的调节作用[D].南京:南京医科大学,2002.
[8]Park SY,Kim Y J,Gao A C,etal.Hypoxia increases androgen receptor activity in prostatecancercells[J].CancerRes,2006,66(10):5121-5129.
[9]MatsakasA,NikolaidisMG,Kokalas N,etal.Effectofvoluntaryexercise on the expression of IGF-I and androgen receptor in three rat skeletal musclesand on serum IGF-Iand testosterone levels[J].Int JSportsMed,2004,25(7):502-508.
[10]Eliakim A,MoromisatoM,MoromisatoD,etal.Increase inmuscle IGF-I proteinbutnotIGF-ImRNAafter5daysofendurancetraininginyoungrats [J].Am JPhysiolRegulatory Integrative Comp Physiol,1997,273:1557-1 561.
[11]Moromisato DY,MoromisatoM Y,Zanconato S,etal.Effectofhypoxia on lung,heart,and liver insulin-like growth factor-Igene and receptor expression in thenewborn rat[J].CriticalCareMedicine,1996,24(6):919-924.
[12]许宁一.低氧等应激对大鼠GH-IGF-I轴的作用及其调控机制[D].杭州:浙江大学,2004.
[13]SchmidtW,Dore S,Hilgendorf A,et al.Effects of exercise during normoxia and hypoxia on the growth hormone-insulin-like growth factor Iaxis[J].Eur JApplPhysiolOccup Physiol,1995,71(5):424-430.
[14]Urban R J,BodenburgYH,Gilkison C,etal.Testosteroneadministration toelderlymen increasesskeletalmuscle strength and protein synthesis[J].TheAmerican journalofphysiology,1995,269(5):820-826.
[15]Rooyackers OE,Nair KS.Hormonal regulation ofhumanmuscle protein metabolism[J].Annual review ofnutrition,1997,17:457-485.
[16]Mauras N,Hayes V,Welch S,etal.Testosterone deficiency in young men:marked alterations in whole body protein kinetics,strength,and adiposity[J].The Journal of clinical endocrinology and metabolism,1998,83(6):1 886-1 892.
[17]Mateescu R G,Thonney M L.Gene expression in sexually dimorphic musclesinsheep[J].Journalofanimalscience,2002,80(7):1879-1887.
[18]Mateescu RG,ThonneyM L.Effectof testosteroneon insulin-likegrowth factor-I,androgen receptor,and myostatin gene expression in splenius and semitendinosusmusclesin sheep[J].Journalofanimalscience,2005,83(4):803-809.
[19]Pandini G,Mineo R,Frasca F,et al.Androgens up-regulate the insulin-likegrowth factor-Ireceptor in prostate cancer cells[J].Cancer research,2005,65(5):1 849-1 857.
[20]Rubinstein M,Idelman G,Plymate SR,etal.Transcriptionalactivation of the insulin-like growth factor I receptor gene by the Kruppel-like factor6(KLF6)tumor suppressor protein:potentialinteractionsbetween KLF6 and p53[J].Endocrinology,2004,145(8):3 769-3 777.
[21]Tinton S,Calderon PB.Roleof protein phosphorylation in the inhibition ofprotein synthesis caused by hypoxia in rathepatocytes[J].Int JToxicol,2001,20(1):21-27.
[22]Preedy VR,Smith DM,Sugden PH.Theeffectsof6 hoursofhypoxiaon protein synthesis in rat tissuesin vivoand in vitro[J].Biochem J,1985,228(1):179-185.
[23]Wouters BG,van den Beucken T,Magagnin M G,etal.Control of the hypoxic responsethrough regulationofmRNA translation[J].SeminCellDev Biol,2005,16(4):487-501.
[24]Kraggerud S M,Sandvik J A,Pettersen E O.Regulation of protein synthesis in human cellsexposed to extremehypoxia[J].Anticancer Res,1995,15(3):683-686.
[25]Koumenis C,Naczki C,Koritzinsky M,et al.Regulation of protein synthesis by hypoxia via activation of the endoplasmic reticulum kinase PERKand phosphorylation of the translation initiation factoreIF2alpha[J].MolCellBiol,2002,22(21):7 405-7416.
[26]Connolly E,Braunstein S,Formenti S,et al.Hypoxia inhibits protein synthesis through a 4E-BP1 and elongation factor 2 kinase pathway controlledbymTORanduncoupled inbreastcancercells[J].MolCellBiol,2006,26(10):3955-3965.
[27]Hoppeler H,Kleinert E,Schlegel C,etal.Morphologicaladaptations of human skeletalmuscle to chronic hypoxia[J].Int JSportsMed,1990,11(Suppl):3-9.
[28]Sillau A H,Banchero N.Effects ofhypoxia on capillary density and fiber composition in rat skeletal muscle[J].Pflugers Arch,1977,16(3):227-232.
The Effect of Hypoxia and Exercise on M uscle Protein Synthesis via AR-IGF-1
YEMing1,HEDaoyuan2,LIU Xia3,ZENG Fanxing4,WANG Yu5
(1.Dept.of Exercise Physiology,Capital Institute of Physical Education,Beijing 100088,China;2.Dept.of PE,Sanxia University,Yichang 443002,China;3.Dept.of PE,Yangzhou University,Yangzhou 225009,China;4.Dept.of Exercise Physiology,Beijing Sport University, Beijing 100084,China;5.Dept.of Sport Anatomy,Xi’an Institute of Physical Education,Xi'an 710068,China)
Purpose:To study the effect of hypoxia and exercise on protein synthesis in skeletalmuscle.Methods:2 monthsmale Sprague-Dawley rats were randomly divided into four groups as follow:control group,hypoxic group,exercise group,hypoxic exercise group.In the 28th day of test,the sampleswere tested.Results:1)Compared with control group,the exercise group's AR protein expression,AR activity and muscle total protein content increased significantly.2)Compared with control group,the hypoxic group'smuscle testosterone,AR protein expression,IGF-1mRNA and cross section area ofmuscle fiber decreased significantly,AR activity and muscle total protein content increased significantly.3)Compared with exercise group,the hypoxia exercise group's AR protein expression,AR activity and muscle total protein content decreased significantly.Conclusions:1)Hypoxia after exercise inhibited muscle protein synthesismuch via AR protein content-AR activity than normoxia exercise.2)Hypoxic exposure,normoxia exercise,hypoxia exercise regulated AR protein content and AR activity by changing muscle testosterone leval,and influenced muscle protein content finally.3)Hypoxic exposure,normoxia exercise,hypoxia exercise influenced IGF-1mRNA by regulating AR activity,and regulated muscle protein synthesis finally.
hypoxic exercise;AR expression;AR and DNA binding ability;IGF-1mRNA
G 804.23
A
1005-0000(2010)02-0125-05
2009-09-26;
2009-11-10;录用日期:2009-11-15
高等学校博士学科点专项基金(项目编号:20050043002);北京市重点实验室开放课题(项目编号:200701)。
叶鸣(1975-),女,陕西绥德人,博士,首都体育学院副教授。通讯作者:曾凡星(1956-),男,北京体育大学教授,博士生导师,Email:fanxingz@china.com.cn。
1.首都体育学院运动生理生化教研室,北京100088;2.三峡大学体育学院,宜昌443002;3.扬州大学体育学院,扬州225009;4.北京体育大学运动生理教研室,北京100084;5.西安体育学院运动解剖生物力学教研室,西安710068。
运动组和低氧运动组先进行适应性跑台训练1周,然后进行正式实验4周,各组的生活、运动和低氧暴露方式见表1。
表1 各组大鼠生活、运动和低氧暴露方式一览表
Tab.1 living,exercise,hypoxia exposuremodes ofeach groups
分组生活方式运动和低氧方式对照组在常氧环境下安静生活训练方式:动物跑台耐力运动,跑台坡度为5°,跑速为20m/min,持续运动1 h/天,6天/周,4周。低氧帐篷氧浓度:13.6%(大约3500m),4周。低氧组晚上在低氧环境下暴露12 h运动组白天在常氧环境下运动1 h低氧运动组白天在常氧环境下运动1 h,晚上在低氧环境下暴露12 h