CO2气腹对大鼠急性坏死性胰腺炎TXA2、ET/NO的影响

秦春宏 张学林 贺宏杰 吴江

CO2气腹对大鼠急性坏死性胰腺炎TXA2、ET/NO的影响

秦春宏 张学林 贺宏杰 吴江

腹腔镜下置管腹腔灌洗引流术(laparoscopic peritoneallavage and drainge，LPLD)以微创手段达到胰腺清创灌洗引流的治疗目的，开创了重症急性胰腺炎(SAP)治疗的新途径[1]，并已取得了阶段性的疗效。但腹腔镜手术时腹腔内高压的CO2对病变胰腺局部及全身微循环的影响，目前尚缺乏系统的研究资料。本实验观察CO2对急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠胰腺局部及全身微循环状况的相关炎性因子内皮素(ET)、一氧化氮(NO)、血栓素A2(TXA2)、前列腺素I2(PGI2)的影响，为临床工作提供参考。

一、材料与方法

1．实验动物及分组：雄性SD大鼠50只，由南华大学实验动物部提供，清洁级，体重220～250 g，按随机数字表法分为3组：对照组(10只)、ANP组(20只)和CO2组(20只)。ANP组和CO2组参照黄克俭等[2]方法并加改良制作ANP模型。开腹后于胆胰管开口略偏下十二指肠对系膜缘肠壁上戳一小孔，采用拉长一倍的尖端成斜面，顶端修圆的硬膜外导管缓慢探入胆胰管内约3～4 cm。用两个显微血管夹分别夹闭肝门部胆管和胆胰管末端后缓慢匀速逆行注入5%牛磺胆酸钠5 mg/100 g体重，5 min注完。拔管后以生物蛋白胶(广州倍绣生物科技有限公司)封闭十二指肠穿刺孔，缝合腹壁切口。CO2组在制模后以腹腔镜气腹机(DVL,I′750,中国合肥)向大鼠腹腔内注入CO2，压力12 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)，维持30 min。对照组仅开腹轻柔翻动十二指肠和胰腺后关腹。各组动物均于术后150 min开腹，下腔静脉取血，加消炎痛EDTA.Na2抗凝，40℃离心，取血清，-20℃保存。同时取胰腺组织，10%甲醛固定。

2．血淀粉酶、TXA2、PGI2、ET、NO检测：全自动生化分析仪(Olympus, AU800)检测淀粉酶，放射免疫法检测TXA2、PGI2、ET、NO。检测试剂盒均购自北京普尔伟业生物科技有限公司，严格按照放射免疫分析药盒说明书操作。

3．胰腺组织病理检查：固定的胰腺组织常规脱水、浸蜡、包埋、切片、HE染色。由病理科医师盲法读片，参照Schmidt等[3]方法评分。

二、结果

1．胰腺病理学改变：对照组大鼠胰腺无明显改变。ANP组和CO2组大鼠腹腔内可见中量浅红色腹水，胰腺轮廓模糊，局部呈黏冻样出血改变，并有散在分布的暗红色点灶状坏死；光镜见小叶排列紊乱并有部分灶性坏死，坏死区内腺泡结构消失，腺泡细胞萎缩、胞核溶解，大量炎症细胞浸润(图1)。对照组、ANP组和CO2组病理分值分别为0、1.75±0.26和1.90±0.37，ANP组与CO2组无显著差异(F=0.017，P=0.294)，但显著高于对照组(F=163.164，P=0.000)。

2．血清淀粉酶、TXA2、PGI2、ET、NO水平变化：ANP组和CO2组的血清淀粉酶、TXA2、PGI2、ET、NO水平无显著差异，但均明显高于对照组(表1，Plt;0.01)。

图1 CO2组(A)、ANP组(B)和对照组(C)大鼠胰腺的病理改变 (HE 4×100)

组 别只数淀粉酶(U/L)TXA2(pg/ml)PGI2(pg/ml)ET(pg/ml)NO(μg/ml)对照组101610±4140.172+0.0722.081±0.71951.48±13.68173.56±34.04ANP组205241±2048a2.524±0.418a3.428±0.152a270.98±127.04a302.69±35.22aCO2组206769±2216a2.627±0.434a3.458±0.356a239.92±37.32a305.79±30.96a

注：与对照组比较，aPlt;0.01

对照组、ANP组和CO2组TXA2/PGI2分别为0.083±0.046、0.713±0.151和0.765±0.142；ET/NO分别为0.294±0.074、0.656±0.456和0.571±0.119。ANP组和CO2组的差异无统计学意义(P=0.223,P=0.870)，但均显著高于对照组(P=0.000)。

讨论本实验制备大鼠ANP模型时改用软质的硬膜外导管，避免了硬质针头对十二指肠乳头的损伤；用生物蛋白胶封闭十二指肠穿刺孔，既减少了手术时间，又避免了传统胆管直接穿刺法术后胆漏和荷包缝合致十二指肠狭窄或梗阻的可能性。

根据血淀粉酶及胰腺病理改变，表明模型制作成功。实验结果显示，CO2组与ANP组大鼠胰腺病理变化及病理评分无明显差异，提示CO2气腹对SAP胰腺病理变化无明显影响。

血循环障碍作为SAP发病中的重要环节正受到越来越多的关注。血循环方面的研究显示，SAP早期即发生血循环障碍，出现胰腺小叶内动脉括约肌和微血管内皮细胞损伤，这与急性胰腺炎早期单核巨噬细胞系统、粒细胞系统激活释放多种细胞因子和炎症介质有关[4]。其中血管活性物质如TXA2、PGI2、ET、NO等的分泌调节失衡，是导致胰腺小叶内动脉括约肌的损伤及微循环床的痉挛、缺血、痕滞、出血、坏死等病理改变的重要原因，这些变化将加重胰腺血循环障碍，使病情恶化[5]。

TXA2和PGI2是一对血管张力调节介质。TXA2可致血管收缩和血小板微血栓形成，可诱导组织缺血及引发凝血障碍，活化白细胞，释放氧自由基，导致血管内皮损伤，造成急性胰腺炎时胰腺的灌注下降[6-7]。PGI2是一种血管扩张剂，可强烈抑制血小板聚集和激活，是TXA2的生理拮抗剂[8]。ET和NO也是一对血管活性物质，ET作为强有力的缩血管物质，加重胰腺微血管的收缩，加重胰腺微循环障碍，NO则有拮抗作用，并存在着负反馈调节作用。两者的平衡对维持正常的血管张力起着重要的作用，比例失衡导致血管收缩、毛细血管通透性增加，引起微循环淤滞[9]。SAP时，PGI和NO合成相对不足，造成TXA2/PGI2、ET/NO的比值升高，与病情严重程度相平行[10]。本实验结果显示，CO2组与ANP组的血清淀粉酶、TXA2、PGI2、ET、NO、TXA2/PGI2、ET/NO值均无显著性差异，表明CO2气腹对大鼠ANP血液微循环无不良影响。

[1] Kjossev KT，losanof JE．Laparoscopic treatment of severe acute pancreatitis．Surg Endosc，2001，15：1239-1241．

[2] 黄克俭,花人放,孔今城,等.静脉输注长链或中长链脂肪酸脂肪乳剂对急性坏死性胰腺炎大鼠脂质炎性介质的影响.肠外与肠内营养,2002,9:212-215.

[3] Schmidt J,Lewandrowski K,Fernandez-del Castillo C,et al.Histopathologic correlates of serum amylase activity in acute experimental pancreatitis.Dig Dis Sci,1992,37:1426-1433.

[4] 薛东波.王海洋.张伟辉.急性胰腺炎大鼠核因子-κB,TNF-α及胰腺病理损伤的动态变化,中国现代医学杂志，2005，15：1512-1514.

[5] 毛恩强，张圣道，韩天权，等.坏死性胰腺炎的持续损害因子——胰腺缺血.中华外科杂志，1997，35：150-152.

[6] Rivera JA,Werner J,Warshaw AI,et al.Lexipafant fails to imp rove survival in severe necrotizing pancreatitis in rats.Int J Pancreatol,1998,23:101-106.

[7] Foitzik T,Eibl G,Hotz HG,et al.Endothelin receptor blockade in severe acute pancreatitis leads to systemic enhancement of microcirculation,stabilization of capillary permeability and improved survival rates.Surgery,2000,128:399-407.

[8] Zhou W,Levine BA,Olson MS.Lipid mediator production in acute and chronic pancreatitis in the rat.J Surg Res,1994,56:37-44.

[9] 胡铭荣，徐德征.急性胰腺炎微循环障碍的研究现状.中国现代普通外科进展，2003，6:143-145.

[10] 赵晓晏,夏时海.血小板活化因子与急性胰腺炎的发生和治疗.世界华人消化杂志,2001,9:958-960.

2008-12-26)

(本文编辑：吕芳萍)

10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2009.05.022

湖南省卫生厅2007年度科研计划项目基金资助(B2007112)

421001 湖南衡阳，南华大学附属第二医院普外科

张学林