植物活性多糖清除羟自由基的抗氧化性能研究

刘满红　王如阳

摘要：目的：研究芦荟多糖、野甘草多糖、凤尾荼多糖、抗坏血酸清除羟自由基的作用。方法：采用分光光度法测定羟自由基清除率，并对抗氧化性进行了比较。结果：植物活性多糖与抗坏血酸相比，其抗氧化能力的顺序为：野甘草多糖>芦荟多糖>凤尾茶多糖>抗坏血酸。结论：所研究的3种植物活性多糖都有很强的清除羟自由基的能力。

关键词：羟自由基；植物多糖；分光光度法

中图分类号：R285.5

文献标识码：A

文章编号：1007-2349(2009)06-0057-02

羟自由基(·OH)是一种氧化能力很强的自由基，能很容易地氧化各种有机物和无机物，氧化效率高，反应速率快，是造成生物组织脂质过氧化、核酸断裂、蛋白质和多糖分解的重要活性氧。因而对羟自由基的研究和探讨，对揭示生物体的生命过程及有毒有机污染物控制和对机体抗衰老、肿瘤等形成的了解，寻找清除羟自由基及降解有毒物质具有十分重要的意义。因此，对羟自由基的研究在生命科学及环境科学等领域中引起了广泛的兴趣，抗自由基生物学、医药学与功能食品科学的研究成为一个十分活跃的研究领域。

多糖是存在于植物中的主要供能物质，随着膜的化学功能、免疫物质的化学研究与发展，人们逐渐认识到多糖不仅作为能量资源和结构材料，更重要的是参与了生命现象中细胞的各种活动，具有抗衰老、抗肿瘤、抗病毒等多种作用。

本文主要考察了野甘草多糖、芦荟多糖、风尾茶多糖这3种植物活性多糖清除羟自由基的抗氧化活性，并与常用的抗氧化剂抗坏血酸(V_c)做比较，为开发和利用植物活性多糖提供理论依据。

1材料与方法

1.1仪器和试剂UV-9200型紫外一可见光谱仪(北京瑞利分析仪器公司)；FeSO₄溶液(0.4 mmol／L)；H₂O₂溶液(0.3％)；H₂SO₄溶液(0.02mol／L)；罗丹明B溶液(0.05％)；抗坏血酸(2mmol／L)。以上所用试剂均为分析纯试剂，水为纯化水。野甘草多糖(傣药)3.5g／L)；凤尾茶多糖(6.6g／L)；芦荟多糖(2.6g／L)均为粗提取物。

1.2实验方法

1.2.1Fenton反应产生羟自由基的测定原理Fenton反应是以过氧化氢为氧化剂，以亚铁盐为催化体系的氧化反应方法，其反应机理如下：Fe²+H₂O₂→Fe³+·OH＋OH^－，然后，再利用其产生的羟自由基氧化罗丹明B使其吸光度发生变化，从而间接地测定羟自由基的产生量。

1.2.2羟自由基检测取两支10mL刻度试管，分别加入罗丹明B1.8mL和H₂SO₄0.5mL，其中一支再加入FeSO₄,1.2mL、H₂O₂0.6mL，加纯化水稀释至刻度，反应5min，以1cm比色皿在554nm波长测定吸光度，计算二者之差△A。

1.2.3抗氧化剂清除羟自由基作用在上述体系中加入一定量抗氧化剂，测定加入抗氧化剂的A_加抗，只有指示剂和酸存在的空白参比液A_参比羟自由基反应体系的A_羟，羟自由基清除率R的计算方法如下：

R＝A_加抗－A_羟／A_参比－A_羟×100％

1.2.4芦荟多糖的提取原料清洗→去皮称重(200g)→打浆→按比例加水(1:1)→超声浸提(1h)→过滤→清液保留，残渣再提取，合并提取液→浓缩→加95％的乙醇沉淀(1:2)→抽滤→低温真空干燥→芦荟粗多糖0.26g→加水定容至100mL。其他粗提物多糖提取方法也与此相同。

2结果与讨论

2.1试验条件的选择

2.1.1酸度罗丹明B无论在酸性介质中，还是在碱性介质中均显红色，在H₂SO₄介质中罗丹明B可被氧化剂氧化褪色。硫酸的用量太少，反应慢，用量太多时，体系不稳定，当硫酸用量为0.5mL时，△A最大且体系稳定，选择硫酸用量为0.5mL。

2.1.2罗丹明B用量于体系中加入不同体积0.05％的罗丹明B溶液，测定其吸光度。实验结果表明：随着罗丹明B用量的增大，△A值增大，罗丹明B用量1.8mL时，△A最大，用量再增加则A₀超出正常读数范围，故选择罗丹明B用量为1.8mL。

2.1.3过氧化氢用量于体系中加入不同体积0.3％的H₂O₂溶液，反应后测定其吸光度A，实验结果表明，开始随着用量加大，△A增大，继续增至0.6mL时，△A值变化缓慢，呈稳定状态，故本实验过氧化氢用量为0.6mL。

2.1.4硫酸亚铁用量于体系中加入不同体积0.4 mmol／L的硫酸亚铁溶液，反应后测定其吸光度A。实验表明，随着硫酸亚铁用量的增加，△A逐渐增加，增加到1.2mL后，△A增加缓慢。取0.4mmol／L的硫酸亚铁溶液用量为1.2mL。

2.1.5反应时间按上述用量配制产生羟自由基的溶液体系，每隔1min测定一次吸光度值。结果表明，1～5min范围内，吸光度下降迅速，反应5min后，A基本无变化。选择反应时间为5min。

2.2植物活性多糖清除羟自由基的作用在Fenton反应体系中加入含10mg对应体积的抗氧化剂溶液，反应5min后，测定加入抗氧化剂的A_加抗，只有指示剂和酸存在的空白参比液A_参比，羟自由基反应体系的A_羟，计算羟自由基的清除率R，以抗坏血酸为阳性对照。结果见表1。

结果表明：所有的粗提植物活性多糖均具有抗氧化性。植物活性多糖与抗坏血酸相比，其抗氧化活性顺序为：野甘草多糖>芦荟多糖>凤尾茶多糖>抗坏血酸(Vc)。

3结论

3种植物活性多糖均具有清除羟自由基的能力，且都比抗坏血酸(Vc)强。植物活性多糖可清除溶液中的羟自由基(·OH)，这说明植物活性多精有抗氧化作用，能增强机体防御毒性自由基损伤的能力，因而具有抗衰老作用。所以植物活性多糖具有抗氧化、抗衰老作用的保健食品开发应用价值。

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