HPLC法测定溶栓胶囊中丹酚酸B的含量

王正波 王伟丽 高 芳 孟建升

[摘要] 目的 建立溶栓胶囊的质量标准。方法 采用HPLC法对溶栓胶囊中丹酚酸B的含量进行测定。结果 溶栓胶囊中丹酚酸B的含量在0.158-2.37μg的范围内,有良好的线性关系,r=0.9999,平均回收率为99.91%,RSD为1.09%。结论 建立了溶栓胶囊的质量标准,该方法操作易行,稳定可靠,用于溶栓胶囊中丹酚酸B的含量,可以用于该制剂的质量控制。

[关键词] 溶栓胶囊;丹酚酸B;HPLC

[中图分类号] R927.2[文献标识码] A[文章编号] 1004-8650(2009)12-170-02

溶栓胶囊是经批准生产的医院中药制剂,处方由葛根,当归,红花,水蛭等七味药组成,具有活血、破瘀、通经散结、抗凝血,主治血瘀闭经,可降血压降低血液黏稠度,防止血栓的形成和预防及治疗中风、冠心病等,经过多年的临床应用证明其疗效显著。其主药葛根的主要成分是丹酚酸B,因此,测定溶栓胶囊制剂中丹酚酸B含量对控制溶栓胶囊的质量有着十分积极的意义。所以为了进一步提高标准,保证制剂的稳定可靠,我们采用高效液相法对制剂中的丹酚酸B进行了含量测定。

1仪器与试药

Agilent1200高效液相色谱仪;色谱柱Agilent-C18(5μm,4.6mm×150mm),AEU-210电子天平,丹酚酸B对照品(批号:111562-200504,中国药品生物制品检定所),溶栓胶囊为商丘市中医院提供(批号为090508,090509,090510),缺位阴性对照样品由商丘市中医院提供。甲醇为色谱纯,水为纯化水。

2方法与结果

2.1色谱条件[1]

Agilent-C18色谱柱(150mm×4.6mm,5μm),流动相:甲醇-乙腈-冰醋酸-水(30:10:1:59),检测波长为286nm,柱温:25℃,流速为1.0ml/min,进样量10μl。

2.2对照品溶液的制备

精密称取对照品丹酚酸B 15.80mg,置100ml的量瓶中,加75%甲醇溶解至刻度,摇匀,即得。

2.3供试品溶液的制备[1-2]

取供试品去除囊壳,倾出内容物研细,混匀,精密称定1.0g,置具塞锥形瓶中,精密加入75%的甲醇50ml,称定重量,加热回流1小时,放冷,再称定重量,用75%的甲醇补足减失重量,摇匀,滤过,取续滤液,用0.45μm 微孔滤膜滤过,即得。

2.4阴性对照品溶液的制备

除丹参外,其他各药按供试品处方量投料按溶栓胶囊的制备工艺制成阴性对照品,然后按供试品的制备方法,制成阴性对照品溶液的制备。

2.5系统适应性试验

2.5.1 线性关系考察:分别吸取对照品溶液(0.158mg/ml)2.5、5、8、10、12、15μl各进样两次,记录峰面积分值,以丹酚酸B峰面积积分值对进样量进行回归,得到回归曲线Y=33.919X-18.628,r=0.9999。结果表明其线性关系良好,线性范围为:0.158-2.37μg 。

2.5.2 精密度试验:精密吸取上述对照品溶液10μL ,重复进样6 次,按上述色谱条件测定峰面积。结果, RSD = 0.34% ,表明仪器精密度良好。

2.5.3 重复性试验:精密称取同一批(批号:090508) 样品6 份,照“2.2”项下方法制备供试品溶液,按上述色谱条件进样,测定。结果,平均含量为1.53mg/粒,RSD=0.27% ,表明本方法重复性良好。

2.5.4 稳定性试验:取供试品溶液(批号: 090508),分别于0、1、2、4、8、12h 各精密吸取10μl,按上述色谱条件测定峰面积积分值。结果,RSD=0.51%,表明供试品溶液在12h内稳定。

2.5.5 加样回收率试验:取已知含量的样品6份各约0.5g,精密称重,分别精密加入一定量的丹酚酸B对照品,照“2.3”项下方法制备供试品溶液,按上述色谱条件进样10μl,测定,计算回收率。结果详见表1。

3 样品含量测定

按上述含量测定方法测定样品中丹酚酸B含量。结果见表2。

4结论

在供试品制备的过程中,也曾考虑到其他样品对葛根提取以及含量测定的影响[3],考察了用不同浓度的乙醇进行提取,结果发现以30%乙醇照中国药典2005版一部葛根项下规定的提取,效果较好,峰面积较大,所以本试验供试品的处理方法为中国药典葛根项下的方法。

溶栓胶囊是医院制剂,在长期的临床实践中证明,就有良好的疗效,但是长期以来,以薄层鉴别作为该药的标准,没有具体的质量控制标准,葛根是溶栓胶囊的主药之一,本实验通过用HPLC法对溶栓胶囊中丹酚酸B的含量进行测定。通过以上实验,建立了溶栓胶囊制剂的质量控制方法,该方法稳定可靠,操作简便,专属性较强,可以作为溶栓胶囊制剂的质量控制标准的参考。

参考文献:

[1] 国家药典委员会编.中华人民共和国药典(一部)[S].北京:化学工业出版社,2005:52.

[2] 杨翠微,张俊伟.HPLC测定参苏丸中丹酚酸B的含量[J].湖南中医药导报,2000,6(16):36.

[3] 邵陆,李振志.HPLC法测定愈风宁心胶囊中丹酚酸B的含量[J].齐鲁药事,2001,(4):23.

(收稿日期2009-08-23)