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(长春中医药大学 药学院,吉林 长春 130117)
人参果为五加科植物人参(PanaxgisengC.A.Meyer)的成熟果实。近年来,随着人们对人参地上部分利用的研究进展,人参果具有高含量的人参皂苷和显著的生理活性,已引起国内外学者的重视和研究。目前对人参果的化学成分研究报道较少[1-2],吉林省为人参主产地,每年产参果几百吨,由于搓破取籽,种子用于繁殖,大部分果肉都作为废物被扔掉。而按干品计算其中所含人参皂苷含量是人参根的3~4倍,极有开发利用价值。因此,为了给系统研究人参增添新的内容,扩大人参的药用范围,给正确评价人参果的质量提供理论依据,我们对人参果的化学成分进行了系统研究[3-6],本文应用日立-835-50型氨基酸自动分析仪对人参果肉中氨基酸种类及其含量进行了测定分析研究。为人参果的研究及综合利用提供了初步的基础数据。
1.1 仪器 日本日立公司835-50型氨基酸自动分析仪。离子交换树脂层析柱(2.6 mm×150 mm)填料为2619型磺酸型强酸性阳离子交换树脂(日立株式会社)。
1.2 实验材料 人参果肉多采于长白县人参(PanaxginsengC.A.Meyer)新鲜成熟果实,去籽得果肉,经冻干,粉碎(60目)所得。
1.3 试剂 标准品溶液:17种氨基酸标准品混合溶液;6 mol/L盐酸:取优级纯盐酸用去离子水稀释定容制成。1%巯基乙醇:取巯基乙醇用去离子水稀释定容制成。高纯氮气:含量99.99%。其它试剂均为分析纯。
2.1 样品液的制备 精密称取人参果肉干燥粉末15.0 mg,置于水解管底部,用注射器注入6 mol/L盐酸15 mL和1%的巯基乙醇1 mL,然后将水解管接通真空泵,抽至真空,迅速在喷灯上封口,置干燥箱内于110℃±1℃水解24 h,取出放冷至室温,打开瓶口,将水解液过滤至50 mL容量瓶中,用去离子水冲洗水解安瓶及滤纸,继而用去离子水定容至刻度,取此稀释的水解液1 mL置小烧杯中,在水浴上蒸干,残渣用去离子水约1 mL溶解并蒸干,如此反复操作2~3次,挥尽氯化氢气体,然后准确加入0.02 mol/L盐酸1 mL溶解残渣,备用。
2.2 氨基酸自动分析仪测试条件 层析柱:2.6mm×150 mm (内径×柱高);柱填料:2619型磺酸型的强酸性阳离子交换树脂(日立株式会社);缓冲液流速:0.225 mL/min;茚三酮流速:0.30 mL/min;柱压:80~130 kg/cm2;茚三酮泵压:15~35 kg/cm2;缓冲液改变次数:5;柱温:53℃;氮气压力:0.28 kg/cm2;分析时间:50 min。
2.3 测定分析 取样品液50 μL,按上述测试条件上机测定。人参果肉中的总氨基酸的分离是采用上述测试条件进行,用样品色谱图与已知的混合氨基酸标准色谱图核对进行定性;根据已知浓度的氨基酸标准样的色谱图峰面积与样品色谱图峰面积的比,计算出样品中各氨基酸的量,再根据样品的重量和水分,求出样品中所含氨基酸的百分含量。
人参果肉中的氨基酸测定结果:见表1。
表1 人参果肉中总氨基的测定结果
表1结果表明,人参果肉含有16种以上氨基酸。人参果肉中的总氨基酸含量为10.423%。人参果肉中精氨酸含量最高(1.815%),天门冬氨酸次之(1.748%),谷氨酸居第三位(1.329%);其中酸性氨基酸、碱性氨基酸、中性氨基酸和必需氨基酸占总氨基酸的比例为中性氨基酸>必需氨基酸>酸性氨基酸>碱性氨基酸。
同植物体内其它的化学成分一样,由于植物的生长周期不同,其各生长部位的体内生理代谢也有所不同,因而体内的化学成分积累也有所差别,在不同的生态环境条件下,因植物的生长不同,形成了体内化学成分积累的差别,植物体内化学成分的积累是一个随时间和空间的变动,而呈现动态变化的过程。由于时间和条件的限制,本实验对人参果氨基酸的种类及含量只初步进行了分析,为人参果的质量评价提供初步的基础数据。结果不够全面和充分。因此,要全面了解和掌握人参果化学成分的积累变化规律,科学准确的评价其质量,需有待今后进一步深入研究。
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