红树植物提取物对３种植物病原真菌孢子的抑制活性

毕秀莲　邓业成　陈凯灵

摘要：用孢子萌发法测定了16种红树植物甲醇提取物对甘蔗凤梨病菌、西瓜枯萎病菌和柑橘疮痂病菌孢子萌发的抑制活性。结果表明，苦郎树和苦槛蓝对3种病菌孢子的萌发有明显的抑制作用，提取物浓度为10 g／L时，抑制率达77.29％以上。桐花树、海漆、榄李和银叶树对甘蔗凤梨病菌孢子萌发有明显的抑制作用，但对其余2种病菌孢子的抑制活性低。其余植物提取物对3种病菌孢子的抑制活性低。榄李和桐花树对甘蔗凤梨病菌孢子的毒力高，EC₅₀分别为0.385 2 g／L和0.571 4 g／L。

关键词：红树植物；植物病原真菌；孢子；抑制活性

中图分类号：S 482．292

从植物中寻找抗菌活性物质是目前开发无公害农药的重要途径之一。红树植物因为生存环境特殊，在代谢过程中能产生许多特有的植物次生物质，这些植物次生物质是开发新农药的天然资源库。世界各国对红树植物的活性物质结构及其药理研究表明，红树植物含萜类、多糖和生物碱等化合物，具有抗艾滋病、抗肿瘤、抗菌和抗氧化等活性，如杨叶肖槿内的mansonones类化合物具有抗肿瘤活性；老鼠筋的根具有抗白血病活性，其所含的苯嗯唑啉可用作止痛药、退热剂、抗惊厥剂和安眠药及具有肌肉松弛活性。然而对红树植物的杀虫抑菌效果研究较少，阳振等报道了红树植物甲醇提取物对8种植物病原菌菌丝生长的抑制活性。本研究在此基础上测试了16种红树植物甲醇提取物对3种植物病原真菌孢子萌发的抑制活性，现将研究结果总结如下。

1材料和方法

1．1供试材料

1．1．1供试植物

供试的16种红树植物采自广西防城港市沿海红树林，植物名录见表1。

1．1．2供试病原菌

甘蔗凤梨病菌[Thielaviopsis paradoxa(de sey-nes)V.Hohnel]，西瓜枯萎病菌[Fusarium oxyspo-rum Schl.f.sp.niveum(E.F.Smith)Syn.etHans.]，柑橘疮痂病菌(Sphaceloma fawcettii Jen-kins)。上述3种病原菌由从田间采集的植物发病部位经室内分离纯化获得。

1．2试验方法

1．2．1植物材料的提取

参照阳振等的溶剂冷浸提取法对植物材料进行提取。

1．2．2抑菌活性测定

采用孢子萌发法。用少量丙酮将样品溶解，再用无菌水配成所需浓度的药液备用。培养好的病原菌孢子用无菌水配成孢子悬浮液(孢子密度为低倍镜下每视野80个左右)，备用。将孢子悬浮液与药液等量混合，用滴管加1滴混合液于干净的载玻片表面(载玻片先用0.25％火棉胶乙醚溶液处理过)，然后将载玻片反放在培养皿中的u型玻棒上，使液滴向下。在培养皿中加入少量无菌水，盖上皿盖。每处理重复3次。处理过的孢子在(28±1)℃培养一定时间，检查记录孢子的萌发数(在低倍镜下每处理随机检查200个孢子)，按下式计算孢子萌发抑制率：

萌发率=孢子萌发数／检查孢子总数×100％；

孢子萌发抑制率=(对照萌发率一处理萌发率)／对照萌发率×100％。

毒力测定时，先将样品配成5个系列浓度的药液，按上述方法测定，用最小二乘法计算毒力回归方程、有效中浓度(EC₅₀)及EC₅₀的95％置信限等。

2结果与分析

2．116种红树植物甲醇提取物对3种植物病原真菌孢子萌发的抑制活性

在实验室条件下，测定了16种红树植物甲醇提取物对3种植物病原真菌孢子萌发的抑制活性，结果见表1。在供试质量浓度为10 g／L下，苦郎树对甘蔗凤梨病菌孢子和西瓜枯萎病菌孢子萌发的抑制率均高于95％，对柑橘疮痂病菌孢子的抑制率也达77.29％。苦槛蓝提取物对3种病菌孢子的抑制效果均较好，达75％以上，其中对西瓜枯萎病菌的抑制率达100％。另外，桐花树、海漆、榄李对甘蔗凤梨病菌的抑菌率都在90％以上，但对其余两种病菌孢子的抑制率较低，甚至出现促进萌发的情况。银叶树、水黄皮、黄槿对甘蔗凤梨病菌也有一定的抑制活性。

2．2 5种植物提取物对甘蔗凤梨病菌孢子的毒力

在实验室条件下，进一步测定了榄李、桐花树、海漆、苦郎树、苦槛蓝甲醇提取物对甘蔗凤梨病菌孢子的毒力，结果见表2。榄李、桐花树、苦郎树、海漆、苦槛蓝甲醇提取物对甘蔗凤梨病菌孢子的EC₅₀分别为0.385 2、0.571 4、3.191 0、3.438 4 g／L和4.820 5 g／L。榄李甲醇提取物对甘蔗凤梨病菌孢子的毒力最高。5种植物中苦槛蓝甲醇提取物对甘蔗凤梨病原菌孢子的毒力最低。

2．3苦郎树及苦槛蓝甲醇提取物对西瓜枯萎病菌孢子的毒力

进一步测定了对西瓜枯萎病菌孢子具有较高抑制活性的苦郎树和苦槛蓝甲醇提取物的毒力，结果见表3。苦槛蓝和苦郎树对西瓜枯萎病菌孢子的EC₅₀分别为2.994 7 g／L和4.254 9 g／L。苦槛蓝对西瓜枯萎病菌孢子的毒力稍高于苦郎树。

2．4苦郎树及苦槛蓝甲醇提取物对柑橘疮痂病菌孢子的毒力

进一步测定了对柑橘疮痂病菌孢子具有较高抑制活性的苦郎树和苦槛蓝甲醇提取物的毒力，结果见表4。苦槛蓝和苦郎树对柑橘疮痂病菌孢子的EC₅₀分别为4.294 9 g／L和4.939 7 g／L。苦槛蓝对柑橘疮痂病菌孢子的毒力与苦郎树相似。

3讨论

从16种红树植物甲醇提取物对供试病菌孢子的抑制活性可以看出，苦郎树和苦槛蓝对3种病菌孢子有明显的抑制作用，桐花树、榄李、海漆和银叶树对甘蔗凤梨病菌孢子有明显的抑制活性，但对其余两种病菌孢子的抑制活性低。说明红树植物中存在大量的抗菌活性植物，其在生物源天然产物农药领域有开发应用前景。不同的抗菌活性植物其抗菌谱有差异，说明在不同植物中存在不同的抗菌活性物质，它们的作用机制存在差异。这些活性植物的抗菌活性物质目前尚未有报道，值得进一步研究。分离鉴定出其中的抗菌活性物质，对开发新型无公害杀菌剂具有重要意义。另外，在研究中发现某些提取物对一些供试菌孢子表现出促进萌发作用，可能是由于此类植物中存在促进供试菌孢子萌发的活性物质所致。