基因编辑在肝胆外科中的应用

摘要：肝胆疾病种类繁多，其中有不少常规治疗效果有限的危重疾病，尤其是涉及代谢、消耗等问题的疾病需要新的治疗手段。CRISPR/Cas9是目前常见的基因编辑技术之一，具有原理简单，操作方便灵活等优点，可满足肝胆疾病的基因研究需求。近年来，已有不少使用CRISPR/Cas9研究治疗肝胆疾病的成果出现，甚至不乏疑难杂症的相关研究。本综述通过回顾近10年相关研究，从多个肝胆外科疾病角度逐一叙述并分析基因编辑技术的优势与潜力，为将来实现基因编辑技术大规模应用于临床提供参考。

关键词：基因编辑;肝病;胆道疾病;肝移植

中图分类号：R575" " " " " " " " " " " " " " " " " "文献标识码：A" " " " " " " " " " " " " " " " "DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2025.01.035

文章编号：1006-1959（2025）01-0168-07

Application of Gene Editing in Hepatobiliary Surgery

WANG Xiao1， SHEN Yinfeng2，3

（1.The First Clinical Medical College， Hubei University of Chinese Medicine， Wuhan 430065， Hubei， China;

2.Department of Hepatobiliary Surgery， Hubei Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine， Affiliated

with Hubei University of Traditional Chinese Medicine， Wuhan 430061， Hubei， China;

3.Hubei Shizhen Laboratory， Wuhan 430065， Hubei， China）

Abstract： There are various types of hepatobiliary diseases， among which many critical diseases getting limited therapeutic effects after routine treatment need new treatment methods， especially for those involving metabolism， consumption， and other issues. As a common gene editing techniques， CRISPR/Cas9 has the advantages of simple principle， convenient and flexible operation， which can satisfy the genetic research requirements of hepatobiliary diseases. In recent years， many research results using CRISPR/Cas9 to study the treatment of hepatobiliary diseases have emerged， many of which related to difficult and complex diseases. By reviewing relevant research in the past 10 years， the advantages and potential of gene editing technology are described and analyzed from the perspectives of multiple liver and gallbladder surgical diseases in this review， so as to provide reference for the realization of applying gene editing on a large scale in clinical practice in the future.

Key words：Gene editing; Liver disease; Biliary tract disease; Liver transplantation

肝胆疾病复杂多样，不少疾病还与代谢、基因缺陷问题关系密切，导致目前仍有大量难以彻底解决的病种。成簇规律间隔短回文重复序列及其相关核酸酶9系统（CRISPR/Cas9）是目前最常用基因编辑工具，属于第三代基因编辑技术，是一种方便快捷的基因编辑工具，由gRNA和Cas9组成，可对基因进行同源重组修复（HR）、非同源末端连接（NHEJ）造成移码（即“基因敲除”）[1]。因此，利用基因编辑来治疗肝胆疾病成为一种合理的新选择，相关研究已较为丰富，本文对相关应用研究进行整合，以供未来迈向大规模临床应用参考。

1基因编辑原理及常规设计流程

CRISPR/Cas9源于细菌内的获得性免疫系统，为了应对感染，细菌将病毒基因组切割成更小的片段，并将其纳入自己的基因组短而高度重复的序列之间，称为CRISPR。然后，病毒基因组被转录成CRISPR RNA（crRNA），与反式激活crRNA（tracrRNA）结合。下次细菌感染时，crRNA和tracrRNA指导CRISPR相关的“Cas”蛋白降解入侵的病毒基因组，从而使其无法造成后续感染[2]。与CRISPRi对目标基因转录短暂的定向沉默不同，CRISPR是gRNA引导Cas9对目标基因敲除、敲入或修复，造成的影响是长期的[3]。此外，CRISPR/Cas9相较于ZFNs、TALENs更廉价方便，已成为目前最常用的基因编辑方式。

CRISPR/Cas9进行基因编辑设计时先确定研究所需的目的基因，从生物信息学数据库获得该基因序列，根据序列信息设计PCR引物，通过PCR技术从宿主细胞内取得真正目的基因，再测序得到真正需要的基因序列（避免个体差异的干扰），在该序列的外显子中寻找需要敲除的基因片段，该片段后方需要有原型间隔相邻基序（PAM）[3]帮助识别（2～6碱基，通常是NGG），且需要选择两个靶点序列，两个靶点间距150～200 bp。guide RNA（gRNA）由5’端开头的20个碱基（靶点序列）及其后的76个碱基组成的transactivating RNA段组成，其中5’端开头20个碱基主要用于识别靶点基因位置（需要设计），后76个碱基组成的tracr RNA序列固定（一般无需设计），其与Cas9酶结合，装入载体。常见的载体有疱疹病毒、腺病毒、腺相关病毒、组蛋白运载体、病毒运载体的包膜蛋白假膜标本等，非病毒载体一般比病毒载体更安全，无较大免疫原性。动物实验可使用流体动力注射、超声、电穿孔等物理方法直接导入，而无需载体[4]。

利用载体转入宿主，当gRNA识别靶点后，其连带的Cas9酶会将目标基因切断，可通过以下四种途径提高Cas9酶精确度[5]：①精确计算设计靶点，降低基因组Cas9目标密度;②在5’端增加两个鸟嘌呤核苷酸修饰或者截短gRNA;③将Cas9-sgRNA作为核糖复合物递送;④修饰Cas9核酸酶：双Cas9缺口酶（Cas9n）、FokI-dCas、SpCas9 PAM变体、SpCas9mt-pDBD、Split-Cas9。基因敲入在上述基础上需额外准备携带引入基因的donor质粒，质粒携带基因序列两侧和目标插入位置两侧要设计好同源臂，通过同源臂同源定向修复实现基因敲入。目前技术下脱靶现象依然常见[6]，如非预期位置出现PAM序列、真核细胞内非编码RNA（ncRNAs）发挥调节作用等，通常可对目的基因使用PCR技术观察产物片段与原本基因片段长度差异来确定是否脱靶。

基因编辑技术可能会产生其他影响，如 CRISPR可能会让细胞携带p53突变甚至通过p53通路导致细胞死亡[7]，酶切引起DNA双链断裂导致细胞毒性[8]，外源导入Cas9促进细胞增殖[9]等。因此在植入CRISPR-Cas编辑的细胞之前，建议通过实验方法严格筛选，以避免非目标突变导致恶性或无效的移植[10]。当基因编辑技术用于修正某基因来进行临床治疗时，必须要作用于分裂活跃的细胞中效果才明显，但体内大多数细胞分裂并不活跃，这也是其走向临床应用的一大障碍。

2基因编辑在肝胆疾病治疗中的应用

2.1肝癌治疗" 利用基因编辑技术可以在较短的实验周期内完成肝细胞癌相关基因进行筛选验证、鉴定生物标志物等任务，已成为肝癌研究的重要工具。Tanaka S等[11]利用CRISPR介导的ARID2基因敲除证明核苷酸切除修复（NER）过程通过抑制着色性干皮病基因G（XPG）的补充而被破坏，导致对致癌物的易感性和ARID2突变亚型HCC的潜在超突变。同时基因编辑可增强癌症的免疫治疗效果，通过使驱动突变失活抑制癌细胞，通过合成致死作用发现药物靶点。

治疗方面，基因编辑天然的优势不仅使得寻找、验证肿瘤药物靶点更加容易，还能减少基因变异对肿瘤治疗的影响。Lu J等[12]利用CRISPR/Cas9系统发现SQSTM1/p62的敲除导致Keap1上调，并促进Keap1对Nrf2的抑制作用。而Nrf2的失活抑制基质金属蛋白酶（MMPs）的表达，从而削弱了HCC的迁移和侵袭。此外，该研究发现顺铂能明显抑制SQSTM1/p62的表达来减缓HCC的迁移和侵袭，该机制可能是顺铂的药理机制之一。这些结果表明，SQSTM1/p62的敲除通过Keap1/Nrf2/MMP2信号通路抑制HCC的迁移和侵袭，对应的药物开发潜力也得到肯定。

姜舒等[13]利用基因编辑构建PD-1敲除及磷脂酰肌醇蛋白多糖-3（GPC3）修饰的CART（GPC3-PD1gRNA-CART）细胞，相同效靶比同样是刀豆蛋白A刺激后的GPC3-PD1gRNA-CART细胞相比GPC3 CART细胞对HepG2细胞的杀伤效果显著增强，且同样受刀豆蛋白A刺激及与HepG2细胞共孵育后的GPC3-PD1gRNA-CART细胞比GPC3 CART细胞IFN-γ的释放水平更高。这些实验证明PD-1的敲除可以逆转CART细胞的功能抑制，为进一步优化相关靶向治疗提供实验基础和理论依据。Zeng J等[14]深入研究参与RNA编辑的ADAR、ADARB1、ADARB2和AIMP2基因的基因型与接受TACE治疗的HCC患者死亡风险之间的相关性，发现ADARB1 rs1051367和rs2253763基因多态性与接受TACE治疗的HCC患者的OS显著相关。该研究还发现癌细胞ADAR1基因缺失能克服癌细胞对PD-1产生抗体耐药问题。因此对于不可切除的HCC患者，可以考虑TACE联合靶向ADARB1基因治疗。

基因编辑对免疫细胞、免疫分子的改变也是肿瘤治疗重要策略。目前大致有三种思路：①利用基因编辑的T细胞进行肝癌免疫治疗，例如针对表达NY-ESO-1的肝癌细胞可静脉注射经基因修饰含抗NY-ESO-1鼠T细胞受体的淋巴细胞来治疗[15];②利用基因编辑实现细胞因子表达基因进行局部表达治疗，例如通过瘤内注射将白细胞介素-12表达在腺病毒载体中，用于治疗乳腺癌肝转移和结直肠癌肝转移等[15];③利用基因编辑制造缺失E1B和E3的5型腺病毒感染实现治疗。正常细胞的肿瘤抑制因子p53蛋白能识别该病毒并停止进入S期，病毒无法复制，而肿瘤细胞p53发生了突变，p53蛋白无法识别病毒，继续让肿瘤细胞进入S期，病毒得以复制，肿瘤细胞死亡[16]。

当前肝癌的肝脏靶向基因治疗的效果与多功能性已经得到肯定[17]，其中重组腺相关病毒（rAAV）介导的基因治疗对遗传性肝脏疾病的作用不可小觑，这是利用了腺相关病毒（AAV）的天然肝脏倾向性的优势。多种肝脏靶向基因治疗产品或许将在不久的将来获得市场批准，为基因治疗解决其他无法治愈的疾病提供选择。但要注意AAV的几个问题：高剂量病毒的毒性作用不可忽略、rAAV动物模型研究不能准确代表患者特征、rAAV介导基因治疗的严重不良反应需要应对方案等。

2.2胆囊癌治疗研究" 胆囊癌的发病机制尚不明确，尚有诸多假说。基因编辑就是验证这些假说的良好工具。J V等[18]通过CRISPR-Cas9基因组编辑技术敲除rs1004030和rs1003049周围119 bp的启动子区域，导致G415细胞中基质金属蛋白酶14（MMP14）表达降低。电泳迁移率实验显示rs1004030和rs1003049位点存在风险等位基因'C'/'G'，分别为转录因子SOX10和MYB创造结合位点。进一步，在G415和TGBC1TKB细胞中稳定敲低这些转录因子，发现MMP14的表达降低。这项研究使得MMP14通过改变肿瘤微环境促进胆囊肿瘤发生的假说在一定程度上得以佐证。但关于胆囊癌相关机制的研究较少，有待丰富。

2.3胆道癌的治疗研究" 肝内胆管癌（ICC）是一种具有侵袭性的肝脏胆管恶性肿瘤，常伴有异柠檬酸脱氢酶（IDH1/IDH2）突变，Saha SK等[19]利用CRISPR/Cas9的基因组编辑引入达沙替尼耐药的突变激酶，确定激酶SRC是IDHm ICC中达沙替尼的关键靶点，说明达沙替尼可能对IDHm ICC具有治疗作用。

胆道癌主要发生于胆管上皮细胞，类器官移植是切除癌变胆道后重构胆道的一种新型治疗方案。类器官来源相对较宽，既可从胚胎干细胞或诱导多能干细胞培养而来，也可以从成体组织干细胞中培养而来，为基因治疗研究提供充足的试验样本，基因修饰后的类器官移植甚至可能给胆道癌患者带来新的机会。目前胆道类器官移植的潜力已经初步显现，Sampaziotis F等[20]利用单细胞RNA测序，证明原代人胆管细胞表现出转录多样性，利用胆道细胞类器官培养成功构建人肝内胆管常温灌注细胞移植模型，证明了胆道类器官移植修复肝内胆管上皮损伤的可行性。这使得在该研究基础上利用基因编辑技术敲除胆道癌相关基因降低胆道癌复发风险重建胆道成为可能。

2.4肝纤维化与肝硬化治疗" 肝纤维化是一种由慢性肝脏损伤引起的病理变化，常见于酒精肝、脂肪肝及病毒性肝炎中。肝纤维化常逐步发展为肝硬化，因此对于肝纤维化的早期干预十分重要。目前已有分子层面、肝细胞层面、干细胞层面的治疗研究。

分子层面重点主要集中在胰蛋白酶。α1-抗胰蛋白酶（AAT）是一种从肝脏分泌的循环丝氨酸蛋白酶抑制剂，也是血浆中含量最丰富的蛋白酶抑制剂，故常作为重点内容研究。人类中AAT由SERPINA1（hSERPINA1）基因编码，该基因发生点突变（PiZ）会导致错误折叠的蛋白质聚集在肝细胞中，进而导致肝损伤。来自瑞典的Bjursell M等[21]研究人员设计出定位hSERPINA1的gRNA搭配Cas9一起用腺病毒传递给AAT缺陷（AATD）病理性肝脏表型小鼠做基因治疗，单剂量基因治疗后PiZ突变相关表型（人AAT和循环转氨酶水平、肝纤维化、蛋白聚集）完全恢复，基因治疗小鼠炎症和整体形态组织学方面得到显著改善。Li Y等[22]从AAT的Z型突变体（ATZ）着手研究，使用重组腺相关病毒rAAV和锌指核酸酶（ZFN）结合物做载体，利用基因编辑技术在SA1-ATZ转基因的第7外显子进行靶向DNA切断。接受低剂量（7.5×1010 vg/小鼠）和高剂量（1.5×1011 vg/小鼠）静脉注射治疗的SA1-ATZ-转基因（PiZ）小鼠治疗6个月后肝细胞内ATZ球体明显得以清除，肝脏纤维化得到解决，同时肝脏TAZ/WWTR1、刺猬配体、Gli2、TIMP和胶原蛋白含量减少，该方法为逆转肝脏纤维化提供了新的希望。

肝细胞层面研究重点是肝星状细胞（HSCs）。肝星状细胞会在肝损伤时，转化为表达α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的肌成纤维细胞样表型，导致Ⅰ型胶原蛋白α1等细胞外基质成分的产生。另一方面金属蛋白酶组织抑制剂1过度表达导致肝星状细胞（HSCs）活化而对胶原降解不利。Gu J等[23]利用二氧化硅交联胶束将一种基于结构引导核酸内切酶（SGN）的新型基因编辑系统（HpSGN）送到小鼠肝星状细胞，搭配药物罗格列酮，实现下调金属蛋白酶组织抑制剂-1的表达并使肝星状细胞失活。该系统通过同时促进胶原蛋白的降解和抑制胶原蛋白的生成实现逆转小鼠的肝纤维化。阻碍胶原蛋白生成和星状细胞基因治疗双管齐下或许有望向肝纤维化临床治疗转化。

间充质干细胞（MSCs）因其自身特性，可方便地配合相关机制，在修复肝纤维化方面有所贡献。例如IL-10通过抑制HSCs的功能和促进HSCs的凋亡，调节胶原蛋白和胶原酶的产生来影响肝纤维化过程。韩国的Choi JS等[24]在此机制上利用TALENs将白介素-10（IL-10）基因的多个拷贝插入到羊膜间充质干细胞（AMMs）的安全港基因组位点。再将大量表达人白蛋白的AMM/I植入受体小鼠的肝脏，从而实现显著抑制硫代乙酰胺（TAA）诱导的肝纤维化以及改善肝功能的效果。这种利用基因编辑制造过表达IL-10的AMMs的方式甚至有望成为抗肝纤维化的替代疗法。

利用基因编辑干预间充质干细胞与其他细胞之间的信号传递也是肝纤维化治疗的一种新型思路。MSCs既可直接作用于肝星状细胞发挥抗纤维化作用，又可产生抑制免疫细胞活性、减少细胞外基质合成的可溶性因子（如转化生长因子β、前列腺素E2、白细胞介素10等）[25]。利用其旁分泌和免疫调节特性可以在肝纤维化治疗中发挥作用。海军军医大学曾韬[9]发现人脐带间充质干细胞（uMSC）的外泌体对逆转肝纤维化具有积极作用，尤其是其中的α-2，6-唾液酸糖基化修饰起了关键作用，其具体机制是通过抑制星状细胞的活化和肝细胞的凋亡，并促进正常肝细胞的增殖，这些学者进一步提出修改糖基转移酶相关基因ST6Gal-2来优化外泌体糖基化修饰对未来肝纤维化治疗的临床转化有重要意义。

利用体细胞重编程获得诱导多能干细胞（iPSCs）分化为iHep细胞是治疗肝病的万能方法，同样也适合肝纤维化治疗[26]。Choi JS等[27]利用基因编辑技术构造出iHep细胞——表达白蛋白（ALB）的iPSCs，该细胞高度表达肝细胞生长因子（HGF）和IL-10。接着将其移植到小鼠肝纤维化模型肝组织中，移植iHep细胞的肝组织中转化生长因子（TGF）-β、IL-6和单核细胞趋化蛋白（MCP）-1的表达降低，且抑制了TAA诱导的肝纤维化。

2.5乙肝病毒感染治疗" 目前已上市的抗HBV药物能有效抑制病毒复制。然而，它们对负责病毒持续存在的病毒微小染色体的肝内共价闭合环状DNA（cccDNA）没有显著影响。因此，乙肝病毒感染的基因治疗可以考虑裂解HBV基因组的主要形式——cccDNA，发生突变失活从而使病毒复制减少。可以利用CRISPR技术在病毒基因组内的预定目标位点诱导双链断裂达到目的，即使病毒能够利用宿主细胞易出错的NHEJ修复发生的双链断裂，但是仍可能因基因组内的插入和缺失突变产生异常或截短的蛋白质来干扰病毒生命周期过程[28]。Zhu W等[29]利用CRISPR/Cas9内切酶携带HBV S和X基因的2个同源序列，构建pCas9载体。在HBV M-Tg HBV小鼠模型中，流体力学注射pCas9构建物降低了血清HBsAg和肝脏HBcAg。Kostyusheva AP等[30]发现，单次注射针对乙肝病毒设计的CRISPR/Cas9的核糖核蛋白复合物48 h后，小鼠血清和肝脏中的HBV DNA水平就会减少约10倍。因此，开发基于CRISPR/Cas9核糖核酸蛋白复合物的治疗CHB的新抗病毒药物是目前最有可能完全消除乙肝病毒感染的方法。

2.6高胆固醇血症治疗" 家族性高胆固醇血症是一种遗传性疾病，主要是由于低密度脂蛋白受体的突变导致胆固醇升高和心血管疾病的过早发展。具有2个低密度脂蛋白受体功能失调等位基因的纯合型家族性高胆固醇血症患者按常规治疗方法效果不佳，尚需更好的办法控制胆固醇水平。Omer L等[31]使用CRISPR/Cas9对患者来源的纯合型家族性高胆固醇血症诱导多能干细胞低密度脂蛋白受体外显子4的3个碱基对的纯合缺失进行基因校正。进一步转化得到的肝样细胞中低密度脂蛋白受体介导的内吞作用恢复，证明了基因编辑根治纯合型家族性高胆固醇血症的可能性。

除了“治本”，“治标”也值得期待。Zhao Y等[32]制造出一种可以在肝脏中被羧酸酯酶选择性地激活和分解的三元共聚物mPEG-b-P（Met/n-PMA），用于在体外和体内向肝细胞传递核酸。再构建出mPEG-b-P（Met/n-PMA）/Cas9 mRNA/sgRNA纳米颗粒在肝细胞中有效累积，通过抑制PCSK9，使小鼠血清中的低密度脂蛋白胆固醇和总胆固醇水平比未处理时降低20%。若继续深入该方面的研究，或将改变当前常规降低胆固醇的治疗方案。

2.7 Crigler-Najjar综合征治疗" Crigler-Najjar综合征（CNS）又称先天性葡萄糖醛酸转移酶缺乏症，先天性非梗阻性非溶血性黄疸。CNS分为Ⅰ型与Ⅱ型，前者醛酸转移酶1A1（UGT1A1）酶活性完全缺失，后者仍保留部分酶活性能靠药物维持生活质量。对于CNSⅠ型患者特别是儿童，辅助性肝移植是目前唯一根治方案，术后基本能保证肝功能稳定且术后10年生存率大于95%，主要缺点是手术过程复杂，需要捆扎自体门静脉将门静脉血流分流至移植肝[33]。而基因治疗CNS被认为是未来最有潜力的治疗方式，甚至有望使CNS治疗发生决定性改变。目前相关研究已有很多，例如：利用腺相关病毒（AAV）递送CRISPR/Cas9和无启动子人UGT1A1互补DNA序列至UGT1-/-小鼠来恢复UGT1A1基因编码的酶功能[34];聚氧离子聚乙烯亚胺递送UGT1A1基因嵌合寡核苷酸序列至Gunn大鼠（CNSⅠ型模型鼠），恢复大鼠体内酶[35];基于AAV8-hUGT1A1互补DNA的基因治疗方案已进入临床试验阶段[4]。

2.8威尔逊病（Wilson’s disease）治疗" 肝豆状核变性，又名威尔逊病，是一种常染色体隐性遗传性单基因遗传病，由ATP酶铜转运蛋白β（ATP7B）功能缺陷引起。该病基因治疗思路很简单，只要校正ATP7B基因，肝脏铜蓄积就能减少，铜诱导的肝细胞毒性降低，肝功能、肝纤维化均会改善。Wei R等[36]利用CRISPR/Cas9和ssODNs构建携带野生型ATP7B基因（ATP7BWT/-）1个等位基因的杂合基因矫正的iPSCs，诱导分化得到恢复了ATP7B的体外亚细胞定位、响应铜超载的亚细胞运输和铜输出功能的ATP7BWT/-iHeps，紧接着通过脾内注射将ATP7BWT/-iHeps细胞移植到ARG小鼠体内，便显著减轻了WD的肝脏表现。

2.9肝移植问题解决方案" 肝移植手术治疗是肝功能异常且无法纠正的患者通常接受的治疗方法，即将正常功能肝脏移植并替换患者肝脏。传统肝移植手术常应用于患有急性间歇性卟啉病（AIP）、α1-抗胰蛋白酶缺乏症（AATD）、Crigler-Najjar综合征（CNS）等肝脏疾病又缺乏合适药物的患者，部分肝脏遗传代谢病患者选择肝移植后的10年存活率可达95%以上，原有的代谢缺陷也得到改善，甚至彻底根治[33]。然而肝移植面临了诸多问题，其中排斥反应（特别是超排斥反应）、致命性血小板减少症、红细胞固存等重大问题有待解决[37]，其他方面诸如不可逆的原有代谢损害、肝脏来源短缺、肝病引起多器官损害时的手术难度，术后免疫抑制治疗费用等也不容忽视[8]。因此，有人将基因编辑技术应用于肝移植上，希望能改善传统肝移植的诸多问题。

在异种肝移植方面，韩士超等[38]将1头GTKO/β4GalNT2 KO/CMAH KO/hCD55/hCD46/hTBM 6-基因编辑猪作为肝肾器官供体，实施国际首例6-基因编辑猪-恒河猴腹腔异位肝脏移植+原位肾脏移植术，受体猴术后5 d才出现急性排斥反应，在冲击疗法和透析支持下活到术后14 d。淮国丽等[39]综合考虑肝移植动物实验的超急性排斥反应、移植物血栓性微血管病、持续性血小板减少症、全身性消耗性凝血功能障碍及伴随的体液和细胞介导的免疫排斥反应，认为有两种较合适方案：①基因改造。α-Ga1，Neu5Gc对于抑制急性排斥反应是抗原敲除的必要选择，CD47以及ASGR1是抑制异种肝移植术后血小板减少症等的必需基因，对于人源补体调节蛋白可以采取单个或多个转入。与此同时，要补充人体凝血因子及共刺激阻断剂等免疫抑制剂方案;②人源化肝脏嵌合体猪。在无菌环境下利用基因编辑技术制备GTKO/FAHKO/Rag2KO/IL2RGKO小型猪可作为直接培育人源化器官的来源。

更有学者[40]利用基因编辑技术敲除小鼠和猪胚胎细胞HHEX基因，使小鼠、猪肝脏无法发育后，再利用囊胚互补技术将人诱导多能干细胞补充进胚胎同步发育来进行器官孵化，这种新型种间嵌合体或能避免肝移植手术的免疫排斥反应。未来的肝移植手术或将在基因编辑技术的辅助下变得更加安全可靠。

3总结

基因编辑技术在研究疾病和治疗疾病方面有着丰富而灵活的处理方式，还可借助多种新型材料与技术进行创新，扩展前景宽广，对肝胆疾病病理、药理、新药研发等有不可替代的推动作用。目前基因编辑技术在胆道疾病的应用远少于肝脏疾病研究，在胆道疾病领域的治疗应用有待进一步探索。基因编辑技术本身也存在风险，若实际进行临床应用不仅要考虑人体复杂环境，还要有规范的制度甚至更广泛的国际治理框架施以保障，必要时在医疗效益和治疗风险中做出权衡。综合来看，基因编辑技术在肝胆外科疾病的应用前景良好，值得关注。

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收稿日期：2024-03-25;修回日期：2024-04-19

编辑/王萌

基金项目：1.湖北省中医药管理局2023-2024年度中医药重点项目（编号：ZY2023Z001）;2.湖北省时珍人才工程项目（编号：鄂卫医〔2024〕256号）

作者简介：王虓（1998.5-），男，湖北武汉人，硕士研究生，主要从事肝胆外科疾病研究

通讯作者：沈银峰（1979.8-），男，湖北黄梅县人，博士，教授，硕士生导师，主要从事肝胆外科疾病研究