梨火疫病菌拮抗菌株组合的亲和力及其防病效果测定

摘 要 为获得对梨火疫病菌（Erwinia amylovora）抑菌活性高、防病效果好的拮抗菌组合，以实验室前期从香梨酵素液中分离初筛出的E. amylovora拮抗细菌菌株为材料，采用对峙培养法检测菌株之间的亲和性，打孔-抑菌圈法测定复配组合菌株的抑菌活性。对筛选出相容性良好，对E. amylovora抑菌作用强的拮抗细菌组合通过喷施香梨离体花序和盆栽杜梨苗评价其对梨火疫病的防病效果。结果显示：筛选出相容性良好的3个拮抗细菌组合FX1-FJ20、FX74-FN12和FX70-FX43，其复配比例为1∶1的组合菌体发酵液和组合除菌发酵液的抑菌率均达到83%以上，明显高于单一菌株。3个拮抗细菌组合菌体发酵液和组合除菌发酵液对香梨花腐的3～7 d的平均预防型防效分别为56.26%～73.16%和72.02～82.66%；对杜梨苗的7～15 d的预防型防效分别为67.38%～77.73%和71.78%～80.11%，治疗型防效分别为64.53%～75.01%和 "69.09%～79.03%。组合菌的防效均较单个菌株提高，组合菌除菌发酵液的防效优于组合菌菌体发酵液，预防型防效优于治疗型防效。综合防效试验结果可见，拮抗菌组合FX74-FN12的防效最佳，其菌体发酵液和除菌发酵液对香梨花腐3～7 d的预防型防效分别为73.16%、82.66%，比单菌株的平均防效分别增加12.90%和22.40%；对杜梨苗的7～15 d的平均预防型和治疗型防效分别达到75.00%和79.00%以上，比单菌株的平均防效分别增加15.12%和11.02%，对梨火疫病具有较好的生防潜力。

关键词 梨火疫病菌；拮抗菌组合；相容性；抑菌活性；防效

由解淀粉欧文氏菌（Erwinia amylovora）引起的梨火疫病是新入侵我国、危害蔷薇科仁果类果树最具毁灭性的细菌病害，被列为国际重大检疫性有害生物和我国一类农作物病害[1]。该病害现已在新疆与甘肃65个县、市（区）发生危害[2-3]，对全国林果业生产带来巨大威胁和风险。

化学药剂防治是梨火疫病防治的重要手段。农用链霉素曾经是梨火疫病防治的最佳药剂，但它的普遍使用所导致的病原菌抗药性菌系的产生及对人类健康安全和环境安全的隐患，已被禁止和限制大田施用[4]。目前，我国针对梨火疫病的专用登记药剂的种类较为有限[5]，研发出新型的高效杀菌剂，采取有效措施阻断梨火疫病的进一步传播扩散，是保障林果安全生产的重大需求。近年来国内外研究者利用拮抗微生物防治梨火疫病方面开展了一些工作，取得较好进展，成为病害防治新的发展方向。有报道从果树内生菌、附生菌、土壤微生物中筛选拮抗菌，从植物提取物中提取抗菌成分用于梨火疫病的生物防治，涉及的生防微生物种类有荧光假单胞菌（Pseudomonas fluorescens）[6]、草生欧文氏菌（E. herbicola）[7]、解淀粉欧文氏菌无毒菌系[8]、酵母菌和E. amylovora的特异性噬菌体[9]等。国内在梨火疫病的生物防治所开展的研究工作尚处于起步阶段[10-11]，目前尚无登记的梨火疫病专用生防菌剂。

有研究发现，在植物病害生防中采用单一菌株，在田间应用存在菌株定殖性能不佳、适应力不强，易受环境条件的影响，防效不稳定等问题；而将亲和性良好的生防菌株二元或多元复配使用，可以产生协同增效的作用，能提高生防微生物防治的广度及防效的稳定性[12]。本研究以分离、筛选出的梨火疫病菌拮抗菌株为材料，测定拮抗细菌菌株之间亲和性，筛选出菌株间亲和力好、抑菌活性高的组合，明确其对梨火疫病的防治效果，为创制和应用优良的梨火疫病生防菌剂，安全防控病害、保障产业的可持续健康发展提供参考。

1 材料与方法

1.1 材 料

1.1.1 供试病原菌 梨火疫病菌：E. amylovora 001菌株，库尔勒香梨分离物，由新疆农业大学植物病理实验室分离、鉴定并保存，致病力测定为强致病力的菌株。

1.1.2 供试拮抗菌菌株 以实验室前期从香梨酵素液分离细菌中通过平板对峙试验初筛出的对E. amylovora具有明显的抑菌圈，或在与病原菌对峙培养平板上表现出竞争力强、生长速度快，能迅速覆盖病原菌菌落的6个菌株作为待选组合生防潜力菌株，分别是FX1（Bacillus" velezensis）、FJ20（B." sp.）、FX74（B.amyloliquefaciens）、FN12（B.velezensis）、FX70（B. sp.）、FX43（B." sp.）。

1.1.3 培养基 NA培养基：蛋白胨10.00 ""g/L、琼脂粉18.00 g/L、蔗糖5.00 g/L、氯化钠5.00 g/L、牛肉膏3.00 g/L、蒸馏水 "1 000.00 mL。NB培养基：蛋白胨10.00 ""g/L、蔗糖5.00 g/L、氯化钠5.00 g/L、牛肉膏3.00 g/L、蒸馏水 "1 000.00 mL。

1.2 拮抗菌株间的亲和性测定

1.2.1 E.amylovora菌液的制备 在NA培养基中活化E.amylovora 001菌株，挑取单菌落接入NB培养液中，在28 ℃、150 r/min摇床上振荡培养24～48 h至菌液OD600nm＝0.8～1.0，8 000" "r/min离心3 min，收集菌体用无菌水稀释至浓度约为1×107 cfu/mL的菌悬液。

1.2.2 拮抗细菌单菌株发酵液、除菌发酵液的制备 将拮抗菌株在NA平板上活化后，用接种环移取一环接入装有50 mL NB培养液的250 mL三角瓶中，置于28 ℃、180" "r/min的恒温摇床振荡培养12 h，获得种子液。在NB培养液中按1%接种量接种拮抗细菌种子液，在28 ℃、180" "r/min的恒温摇床振荡培养至发酵液OD600nm为 "0.8～1.0，稀释至108 cfu/mL，备用。将发酵液在 "4 ℃、12 000 r/min条件下离心30 min去除菌体，上清液用微孔滤膜（d=0.22 μm）过滤除菌，得到除菌发酵液。

1.2.3 拮抗细菌单菌株发酵液、除菌发酵液对梨火疫病菌的抑菌活性测定 采用打孔—抑菌圈法测定拮抗菌的抑菌活性。将100 μL的梨火疫病菌（E. amylovora）菌液涂布于NA培养基上，用灭菌打孔器在涂菌培养基平板均匀打3个孔，分别在每孔中加入拮抗菌发酵液、除菌发酵液200 μL，以等量的无菌培养液为对照，在28 ℃恒温培养箱中培养24 h后采用十字交叉法测定抑菌圈直径大小，计算抑菌率[13]。

抑菌率=[（处理组抑菌圈直径-对照组抑菌圈直径）/处理组抑菌圈直径]×100%

1.2.4 拮抗细菌不同菌株之间亲和性的测定 采用对峙培养法测定拮抗细菌不同菌株之间亲和性。取一个拮抗细菌菌株的新鲜发酵液100 μL均匀涂布于NA培养基上作为被测菌株，将无菌滤纸片（d=6 mm）放至在涂菌平板上，每皿2片，每个滤纸片滴加5 μL的另一个待测拮抗细菌的发酵液，以加入5 μL NB培养液的处理作为对照，各菌株均作为测试菌株和被测菌株交叉测试，每个处理重复3次，28 ℃培养48 h，观察两菌株间是否有抑菌圈，筛选出不产生抑菌圈，亲和性良好的菌株组合。

1.3 拮抗细菌菌株组合抑菌活性的测定

1.3.1 拮抗细菌组合菌体发酵液、组合除菌发酵液的制备 在灭菌NB培养液中按1∶1比例加入拮抗细菌混合种子液，在28 ℃、180 r/min振荡培养24 h，测定OD600nm约为0.8～1.0，获得拮抗细菌组合菌体发酵液。将组合菌体发酵液在 "4 ℃、12 000 r/min条件下离心30 min去除菌体，上清液用微孔滤膜（d=0.22 μm）过滤除菌，得到组合除菌发酵液，备用。

1.3.2 拮抗菌组合菌体发酵液、组合除菌发酵液对梨火疫病菌的抑菌活性测定 方法与“1.2.3”中单一拮抗菌株发酵液、除菌发酵液抑菌活性测定方法相似，在涂布E. amylovora菌液的培养基平板的打孔中（d=6 mm）加入200 μL的拮抗菌组合菌体发酵液、组合除菌发酵液，观察产生的抑菌圈并测定其直径。

1.4 拮抗菌组合对梨火疫病的防效测定

1.4.1 拮抗细菌组合菌体发酵液及组合除菌发酵液接种液的制备 按照“1.3.1”制备拮抗细菌组合菌体发酵液和组合除菌发酵液接种液。

1.4.2 香梨离体花序防效测定

在新疆库尔勒市香梨园健康梨树上采集初花期花枝插入3%蔗糖溶液中，待花苞全部绽放时用手持压力喷雾器将待测拮抗菌单菌发酵液、单菌除菌发酵液，组合菌发酵液和组合除菌发酵液喷雾接种至花序全部润湿，每个处理接种50朵，重复3次；以喷施农用链霉素（华北制药厂生产，有效成分72%）4 000倍液为对照，同时设置无菌水代替拮抗菌发酵液（除菌发酵液）的对照，在25 ℃、75%空气湿度的人工气候箱中培养24 h后喷雾接种梨火疫病菌菌液。将接种后的花序置于人工气候箱中25 ℃、75%空气湿度继续培养，3 d、4 d和5 d后定时观察记录发病情况，统计花腐率并计算防效。试验结束后将发病植株材料干热灭菌后销毁。

花腐率=病花数/总花数×100%

花腐防效=[（喷施无菌水对照组花腐率-处理组花腐率）/喷施无菌水对照组花腐率]×100%

1.4.3 盆栽杜梨苗防效测定 在库尔勒市巴州农科所日光试验温室开展试验，以2 a生盆栽杜梨盆栽苗10～25 cm的新生幼嫩枝条为接种材料。

预防型防效试验：用手持压力式喷雾器将拮抗菌发酵液、除菌发酵液喷雾接种盆栽杜梨苗，喷雾至杜梨苗全部湿润，每个处理喷施10～15个杜梨枝条，重复3次。同时设喷施农用链霉素（72% WP，华北制药厂）4 000倍液为对照，以无菌水喷雾为空白对照。接种后的杜梨苗放入搭建好的覆盖塑料膜的保湿棚中， "48 h后再喷雾接种梨火疫病菌菌液，继续在25 ℃～30 ℃、相对湿度75%以上，自然光照下的保湿棚中培养。待发病后掀开塑料膜，每天观察发病情况，记录发病枝条数，计算病情指数，统计防效。

治疗型防效试验：与预防型试验接种顺序相反，即先在杜梨苗上喷施接种病原菌液48 h后，再喷施拮抗菌发酵液、除菌发酵液，培养条件及防效调查方法等均与预防性试验一致。

盆栽杜梨苗梨火疫病的病情分级标准[7]： "0级，枝条无病斑；Ⅰ级，枝条病斑长度占接种枝条长度的1/3；Ⅲ级，枝条病斑长度占接种枝条长度的1/3～2/3；Ⅴ级，枝条病斑长度占接种枝条的2/3。依据病情指数计算试验各处理的防效。

发病率=发病枝条数/接种总枝条数×100%

病情指数=[∑（各级发病枝条数×病级代表值）/（接种总枝条数×最高级值）]×100

枝枯防效=[（喷施无菌水对照组病情指数-喷施拮抗菌处理组病情指数）/喷施无菌水对照组病情指数]×100%

1.5 数据统计分析

使用Microsoft Excel整理试验数据，并采用SPSS统计分析软件和Duncan氏新复极差法对数据进行方差分析和差异显著性检验。

2 结果与分析

2.1 拮抗细菌单一菌株对梨火疫病菌的抑制作用

供试拮抗细菌单一菌株对梨火疫病原菌的抑菌作用测定结果如表1所示，6个拮抗细菌菌株对梨火疫病菌具有较强的抑菌活性，发酵液的抑菌圈大小为27.35 mm±0.85 mm～33.04 mm±" 0.39 mm，抑菌率均达到78%以上；除菌发酵液的抑菌圈大小为29.05 mm±0.76 mm～ "33.44 mm±0.84 mm，抑菌率达79%以上，其中FX1、FJ20、FX70和FX43还具有生长速度快、竞争能力强的优势，在与梨火疫病菌共培养的培养基平板上能在24 h迅速覆盖病原菌菌落。

2.2 不同拮抗细菌菌株间的相容性

分别将不同拮抗菌株进行交叉试验，测定菌株之间的亲和性。结果显示（图1），菌株FX1与FJ20、FX74与FN12、FX70与FX43在平板上分别作为测试菌株和被测菌株共培养时，菌株之间均不产生抑菌圈，表明菌株间相容性好；而其他组合菌株（FX1与FN12、FX1与FX70、FX74与FX1、FN12与FX1、FX74与FX70、FX74与FJ20、FX1与FX43、FJ20与FX70、FJ20与FX43、FX74与FX43、FJ20与FN12、FN12与FX70、FN12与FX43）共培养时均产生抑菌圈，表明菌株间相互抑制生长，菌株之间不相容。因此，选用相容性好的三个拮抗菌组合，分别命名为FX1-FJ20、FX74-FN12和FX70-FX43开展后续试验。

2.3 拮抗细菌组合对梨火疫病菌的抑菌作用

对相容性良好3个拮抗菌组合测定其对梨火疫病菌的抑菌活性。结果表明（表2），拮抗菌组合FX74-FN12、FX1-FJ20、FX70-FX43的抑菌活性都较单一菌株提高，组合菌发酵液和组合菌除菌发酵液抑菌率分别为84.05%、83.84%、 "83.49%和84.21%、84.61%、84.06%，其中FX74-FN12组合的抑菌率最高。

2.4 拮抗细菌组合对梨火疫病的防效

将筛选出的对梨火疫病菌具有较强抑菌作用的3个拮抗菌组合FX1-FJ20、FX74-FN12、FX70-FX43及单菌FX1、FJ20、FX74、FN12、FX70、FX43的菌体发酵液、除菌发酵液，通过香梨离体花序、盆栽杜梨苗接种，测定、比较其对病害的防治效果。

2.4.1 对香梨花序的预防型防效 在离体香梨花序上喷施拮抗菌组合菌和单个菌株的发酵液及除菌发酵液，再接种梨火疫病菌，测定其预防型防效，试验结果如表3所示。未喷施拮抗菌菌液的对照，在接种病原菌后第2天香梨花序的花药、柱头、蜜腺、花萼、子房、花柄等处陆续开始出现深褐色、萎蔫和坏死的花腐症状，而预先喷施拮抗菌的处理能明显延缓花腐症状出现的时间，降低花腐率。拮抗菌组合发酵液、组合除菌发酵液对香梨花腐防效分别为FX74-FN12（73.16%、 "82.66%）、FX1-FJ20（59.37%、72.02%）、FX70-FX43（56.26%、73.43%），而单一拮抗菌株发酵液、除菌发酵液的防效分别为FX74（65.03%、69.36%）、FN12（55.49%、67.07%）、FX1 "（51.05、67.85%）、FJ20（43.88%、62.50%）、FX70（56.61%、68.56%）、FX43（48.64%、 "59.32%），拮抗菌组合的防效显著优于单一菌株，组合菌除菌发酵液的防效显著优于组合菌发酵液。FX74-FN12组合菌发酵液、组合除菌发酵液的防效最高，比2个单菌株的平均防效有较大幅度提高，分别增加12.90%和22.40%；其次是FX1-FJ20组合菌发酵液、组合菌除菌发酵液，比2个单菌株的平均防效分别增加11.91%和 "6.85%；再次是FX70-FX43组合菌发酵液、组合菌除菌发酵液比2个单菌株的平均防效分别增加3.64%和9.49%。

2.4.2 对杜梨苗梨火疫病的预防型和治疗型防治效果 预防型防效试验结果显示（表4），在杜梨苗上预先喷施拮抗菌组合、单个菌株的发酵液及除菌发酵液能明显降低嫩枝的枝枯率，减轻病情指数（Plt;0.05），具有明显的保护效果，不同处理之间差异显著。拮抗菌组合发酵液和组合除菌发酵液的7～15 d平均预防型防效分别为FX74-FN12（77.73%、80.11%）、FX1-FJ20（76.06%、77.73%）、FX70-FX43（67.38%、71.78%），而单一拮抗菌株发酵液和除菌发酵液的7～15 d平均预防型防效分别为FX74（67.26%、72.09%）、FN12（56.87%、66.91%）、FX1（65.36%、 "70.06%）、FJ20（56.54%、60.59%）、FX70 "（61.46%、65.86%）和FX43（54.02%、 "55.79%），拮抗菌组合防效较单一拮抗菌株的平均防效分别增加FX74-FN12 "（15.11%、 "12.41%）、FX1-FJ20（15.66%、10.61%）、FX70-FX43 （9.46%、 10.96%）。

治疗型试验结果表明（表5），各处理对杜梨苗梨火疫病具有一定的治疗效果。拮抗菌组合发酵液和组合菌除菌发酵液的7～15 d平均治疗型防效分别为FX74-FN12（75.01%、79.03%）、FX1-FJ20（72.63%、75.10%）、FX70-FX43 "（64.53%、69.04%），而单一拮抗菌株发酵液和除菌发酵液的7～15 d平均治疗型防效分别为FX74（64.06%、69.49%）、FN12（55.25%、 "64.71%）、FX1（59.84%、67.32%）、FJ20 "（51.65%、57.92%）、FX70（59.64%、62.67%）和FX43（50.99%、53.11%），拮抗菌组合发酵液和组合除菌发酵液的防效较单一拮抗菌株的平均防效分别增加了FX74-FN12（15.23%、9.62%）、FX1-FJ20（16.89%、12.48%）、FX70-FX43 "（9.10%、11.15%）。

综合预防和治疗防效的试验结果，3个拮抗菌组合的防效均比单个菌株明显提高，组合除菌发酵液的防效显著优于组合菌发酵液的防效，预防型防效较治疗型防效更佳。其中FX74-FN12组合的防效最好，其组合发酵液、组合除菌发酵液的预防型和治疗型防效分别在75%以上和79%以上；其次是FX1-FJ20组合，其组合发酵液、组合除菌发酵液的预防型和治疗型防效分别在72%以上和75%以上；再次是FX70-FX43，其组合发酵液、组合除菌发酵液的预防型和治疗型防效分别在64%以上和69%以上。

3 讨" 论

目前，对于植物病害生防菌的研究主要集中在单个菌株，多菌株组合复配对生防效果的影响研究较少。筛选不同类型、不同作用机制、不同营养需求、不同环境适应性的多功能生防潜力菌株，通过菌株的二元或多元复配，利用不同菌株在时间、空间和生理上的互补、协同及互惠互生作用，构建研制高效广谱的复合菌剂，能克服单菌株功效的局限性和在环境中的不稳定性，增强其防病效果，因而更具有应用价值[14]。有研究表明，组合菌株的合理选择对于发挥其防病功效，提高生防效果至关重要。组合复配的生防细菌菌株间的亲和性良好，能提高对病害的防治效果；但菌株间存在拮抗性则影响其稳定性，反而会降低防病效果[15]。本研究中所采用的6个供试菌株FX74、FN12、FX1、FJ20、FX70和FX43其发酵液、除菌发酵液在平板对峙试验中均表现出对梨火疫病菌较强的抑菌作用，除菌发酵液产生的抑菌圈大于发酵液，表明其胞外代谢产物中的抑菌物质具有较强的抑菌活性；同时FX1、FJ20、FX70和FX43菌株还具有营养的竞争能力强、生长速度快的特性，形成的菌苔能迅速占据空间，快速覆盖病原菌。本研究将这些具有不同抗菌机制的菌株通过相容性测定，从中筛选出相容性良好拮抗菌组合FX1-FJ20、FX74-FN12、FX70-FX43。将3个拮抗菌组合按照1∶1的比例复配，测定结果表明对梨火疫病菌的抑菌活性较单个菌株均有明显增强。李恩琛等[16]试验发现，生防细菌的不同组合、不同比例复配对苹果树腐烂病菌的抑制效果不同，当亲和性菌株组合B1与FS-1206以2∶1复配时，其发酵液抑菌率达86.64%，抑菌效果显著优于单一生防细菌及其他复配组合。本研究筛选出的拮抗细菌组合，仅测定了1∶1的比例复配的抑菌活性，在后续工作中还需对组合菌株不同配比发酵对菌体生长速度、活菌数量和抑菌物质的产量及抑菌活性和防病效果的影响等研究还有待在后续工作中开展。

本研究采用对梨火疫高度感病的香梨花序和杜梨苗（香梨砧木）作为接种材料，通过喷雾接种拮抗菌组合发酵液菌和除菌发酵液，测定、评价对梨火疫病的防病效果。试验结果表明，喷施3个拮抗细菌组合发酵液和组合菌除菌发酵液对梨火疫病菌侵染造成的香梨花腐、杜梨苗枝枯均具有较好的防病效果，拮抗细菌组合的防效显著优于单一菌株，组合菌除菌发酵液的防效显著优于组合菌发酵液。综合香梨花序和杜梨苗防效的试验结果，FX74-FN12组合的防效最佳，对梨火疫病香梨花腐的预防型防效，对杜梨苗梨火疫病的预防型和治疗型防效都能达到73%以上，组合除菌发酵液的防效更优。其次是FX1-FJ20和FX70-FX43组合，也表现出较好的防病效果。李国等[17]将2株均能产生脂肽类抗生素的拮抗细菌特基拉芽孢杆菌C-9和鞘氨醇杆菌A1混合复配，提高了对棉花黄萎病菌的抑制能力和防病效果。分析其原因是2株菌混合提高了生长竞争性，能相互促进、相互利用，化解在发酵时产生的代谢产物对活菌的反馈抑制现象，从而增强菌株的代谢活力，促进了抑菌性物质的产生。本研究中的拮抗菌组合，FX74-FN12组合中的2个菌株的抑菌作用均是通过产生胞外抑菌物质，FX1-FJ20和FX70-FX43组合中的菌株除产生胞外抑菌物质外，同时具有竞争性强的优势，组合后都产生优于单个菌株的防病效果。其组合复配是否增加活菌浓度，提升了抑菌物质的产生量、活性及稳定性还有待分析。因此，不同或相似作用机制的拮抗菌组合复配使用时，其防病作用不是简单的累加，而是具有一定的协同增效作用。本研究结果与陈志谊等[18]及蓝星杰等[19]的研究结果相似。

本研究对筛选出的3个拮抗菌组合，通过室内试验测定对梨火疫病菌的抑制作用及其防病效果，组合菌株在植株上定殖性能、田间防效及稳定性等都需进一步试验验证，为梨火疫病生防潜力菌株的进一步开发应用提供参考。

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Determination of" Affinity for Combination of Antagonistic Bacteria against

Fire Blight Pathogen Erwinia amylovora and Their Biocontrol Effect

Abstract In the pursuit ofantagonistic bacterial combinations exhhibiting high inhibitory activity and efficacious disease prevention effect against Erwinia amylovora， strains isolated from the the fragrant pear enzyme solution at the early stage in the laboratory were used as materials.The affinity between these strains was assessed via plate confrontation culture， while their combined inhibitive activity were measured using punching-inhibition circle method. The antagonistic bacterial combination demonstrating substantial affinity and potent inhibition of" E.amylovora were identified and further evaluated through in vitro spraying fragrant inflorescence and potted Birchleaf Pear seedlings. The results showed that combinations FX1-FJ20， FX74-FN12 and FX70-FX43， exhibited affinity and achieved inhibition rates more than 83% in both combined strains fermentation broth and" combined strains" filtered fermentation broth， significantly higher than that of the single strains. The average protective efficacy of the three antagonistic bacterial combinations on fragrant pear inflorescences ranged from 56.26% to 73.16% for"" combined strains" fermentation broth and 72.02% to 82.66% for" combined strains" filtered fermentation broth over 3 to 7 days，similarly，on potted Birchleaf Pear seedlings， protective efficacy ranged from 67.38% to 77.73% for"" combined strains" fermentation broth and 71.78% to 80.11% for"" combined strains" filtered fermentation broth over 7 to 15 days， with therapeutic efficacy ranging from 64.53% to 75.01% and 69.09% to 79.03%， respectively.Overall， the combined strains consistently exhibited enhanced efficacy compared to the single strains， with filtered fermentation showing good results to fermentation alone in terms of protective and therapeutic effects. Particularly， combination FX74-FN12 demonstrated the highest efficacy， achieving protective efficacies of" "73.16% and 82.66% in fermentation broth and filtered fermentation， respectively， during the initial" "3-5 days against fragrant pear blossom rot-an increase of 12.90% and 22.40%， respectively， compared to single-strain efficacy averages. Moreover， average protective and therapeutic efficacies on potted Birchleaf Pear seedlings over 7-15 days were more than 75% and 79%， respectively， showing increases of 15.12% and 11.02% compared to single-strain averages. These findings have the potential of FX74-FN12 for effective prevention of Birchleaf Pear fire blight.

Key words Erwinia amylovora; Antagonistic bacterial combination; Affinity; Antibacterial activity; Control effect determination