一例鸭疫里默氏杆菌病的病原分离鉴定及治疗

摘 要：为确诊广西田东县某肉鸭场疑似鸭浆膜炎的发病原因，无菌采集发病鸭的脑、肝脏及心脏组织，开展细菌分离培养与鉴定，并进行药敏试验和致病性试验。结果显示，分离菌在鲜血琼脂平板上呈表面平滑、略微凸起、边缘规则整齐、具有光泽且半透明的奶油状菌落；革兰氏染色、镜检为阴性短小杆菌，瑞氏染色则呈现两极浓染特征。生化试验鉴定结果与鸭疫里默氏杆菌的生化特性相符，致病性试验表明其具有较强致病性，药敏试验显示该菌对氟苯尼考、多西环素、红霉素高度敏感。试验结果表明，引发该鸭场发病的病原为鸭疫里默氏杆菌，通过采取相应治疗措施，病情得到了有效控制。

关键词：鸭疫里默氏杆菌；分离鉴定；药敏试验；治疗

中图分类号：S858.32 文献标识码：C 文章编号：1673-1085（2024）11-0016-05

鸭疫里默氏杆菌病又称鸭传染性浆膜炎，是一种由鸭疫里默氏杆菌（Riemerella" anatipestifer，RA）引起鸭、鹅的接触性传染性疾病，多发生于1～8周龄雏鸭，发病率和死亡率极高[1]。肉鸭感染RA后表现眼鼻有分泌物、头颈歪斜、腿翅瘫软、走路摇摆、仰翻卧地、两腿呈划水状、共济失调和抽搐、腹泻、肛门周围羽毛粘有粪便等症状，剖检可见典型的心包炎、肝周炎和气囊炎的病变[2]。RA血清型众多，全球已发现至少21种，国内流行至少13种[3]，因不同血清型间缺少交叉免疫保护，疫苗保护效力有限，抗生素仍为治疗RA感染的常用手段。但由于抗菌药物的过度使用，导致RA对其它病原菌的耐药性增加，并且RA在临床上经常与其它病原菌发生混合感染，已成为影响养鸭业的一种重要细菌性疾病。

2023年4月，田东县平马镇某养鸭场饲喂的2 500只25日龄肉鸭突然发病，发病后每天死亡约65只，病死率高达53%。病鸭临床上表现精神抑郁、走路不稳、摇头等症状，剖检可见心包膜增厚、混浊，表面有灰黄色纤维素性渗出物，心包液增多。肝脏肿大，表面覆盖略带黄色纤维素性薄膜。气囊混浊增厚，气囊壁上附有纤维素性渗出物。根据以上临床症状、病理变化，初步诊断为鸭疫里默氏杆菌病。为进一步确诊，无菌采集发病鸭的脑、心脏及肝脏等组织样本，开展RA的分离鉴定工作，并对RA的耐药性及致病性进行评估，以期为田东县鸭疫里默氏杆菌病的治疗和防控提供科学依据。

１" 材料与方法

1.1" 材料

1.1.1" 试验动物" 5只发病鸭来自广西田东县平马镇某养鸭场，25日龄；12只14日龄健康雏鸭，购于田东县家禽交易市场。

1.1.2" 主要试剂" 巧克力培养基、普通营养琼脂培养基、麦康凯培养基、鲜血琼脂培养基、胰蛋白酶大豆肉汤（TSB）、革兰氏染色试剂盒、瑞士染色试剂盒、抗菌药敏纸片、生理生化鉴定试剂，均购自杭州微生物试剂有限公司。

1.2" 方法

1.2.1" 病理剖检" 解剖发病鸭，观察腹腔内器官的病理变化，同时填写解剖记录单。

1.2.2" 细菌分离纯化及形态观察" 剖检发病鸭，无菌采集脑、肝脏、心脏组织各20 g，分别存放到无菌EP管中，冷藏保存备用。鲜血琼脂培养基、普通琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基分别划线接种脑、心、肝组织，鲜血琼脂培养基置CO2培养箱培养12 h，普通营养琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基置37 ℃恒温培养箱培养12 h。挑取单个典型菌落，接种到巧克力琼脂培养基中纯化培养，随后将纯化后的单菌落接种到TSB进行增菌培养，并保存菌种。

1.2.3" 分离菌的生化试验" 挑取分离菌的纯化单菌落接种于乳糖、枸橼酸盐、七叶苷、蔗糖、甘露醇、麦芽糖、吲哚、葡萄糖、尿素、赖氨酸、硫化氢、氧化酶、M-R、V-P、触酶15种生化鉴定管中，接种后的生化管置于37 ℃、5%CO2恒温培养箱中培养24～48 h，按照生化鉴定试剂说明书对各种生化鉴定管的试验结果进行判定。

1.2.4" 药敏试验" 按《兽医微生物学实验指导》纸片扩散法进行药敏试验[4]，取分离菌纯化后的菌液150 L，均匀涂抹在鲜血琼脂培养基上，待菌液吸收后，无菌操作将氟苯尼考、庆大霉素、新霉素、卡那霉素、阿米卡星、头孢噻肟、阿莫西林、红霉素、复方新诺明、多西环素、恩诺沙星、环丙沙星、多黏菌素13种抗菌药物的药敏纸片贴在鲜血琼脂培养基表面上，置37 ℃培养24 h。最后测量抑菌圈并记录结果，按说明书判定药物敏感性。

1.2.5" 动物回归试验" 将分离菌接种于巧克力培养基上，37 ℃恒温条件下培养36 h。然后刮取菌落，加入生理盐水，制成细菌混悬液，调整菌浓度至10 CFU/mL。12只14日龄麻鸭分为2组，即试验组、对照组，每组6只。试验组鸭腹腔注射分离菌混悬液0.5 mL/只；对照组鸭腹腔注射生理盐水0.5 mL/只。各组鸭分别饲养，密切观察其发病及死亡状况。剖检死亡的雏鸭，无菌采集脑、肝脏、心脏组织，细菌分离培养与鉴定。

2" 结果

2.1" 病理剖检

心外膜覆盖一层黄白色的纤维素性包膜，见图1A；肝脏体积明显增大，表面有黄白色纤维素性渗出物，见图1B；气囊浑浊且增厚，气囊壁上可见针尖大小类似蛋黄的物质。除此之外，还有个别病例脾脏呈现斑点样肿胀，肾脏间质明显可见，小肠壁较薄，肠腔内有黄色液体聚集。

2.2" 细菌分离纯化及形态观察

在麦康凯平板和普通平板未见菌落生长，在鲜血琼脂平板上生长表面平滑、略微凸起、边缘规则整齐、具有光泽且呈现半透明的奶油状菌落。挑取单菌落进行染色、镜检，可见革兰氏阴性的单个存在或呈链状排列的无芽胞短小杆菌；瑞士染色两极浓染，符合RA形态特征。将成功分离出的菌株命名为TDRA-01。

2.3" 生化试验

生化试验结果显示，分离菌对尿素、氧化酶和触酶反应阳性，不分解任何糖类，见表1。分离菌的生化反应结果均与RA的生化特征一致。结合培养特性、菌体形态和生化反应结果，初步判定该株分离菌为RA。

2.4" 药敏试验结果

药敏试验结果见表2。13种抗生素中，分离菌株对氟苯尼考、红霉素、多西环素3种药物高度敏感（3/13），对庆大霉素、新霉素、卡那霉素、头孢噻肟、环丙沙星5种药物中度敏感（5/13），对阿米卡星、阿莫西林、复方新诺明、恩诺沙星、多黏菌素5种药物耐药（5/13）。

2.5" 分离菌的动物回归试验

接种后1～3 d，试验组的雏鸭表现出与发病鸭相似的临床症状，精神沉郁、食欲减退或废食，眼、鼻有浆液性的分泌物、呼吸困难、斜颈、转圈、倒退、扎堆聚集，排黄色或黄绿色粪便等，一般2～3 d内就会死亡，而对照组雏鸭未发现异常。解剖病死鸭，可见心脏有石灰样的纤维素性渗出物包裹；肝脏肿大且质地脆弱，表面有纤维素性渗出物；气囊浑浊，脾脏略肿大，呈红灰色斑驳状，表面有灰白色坏死点；脑膜及脑实质血管扩张、淤血。这与发病鸭的剖检变化极为相似。病死雏鸭的脑、肝、脾组织无菌接种于巧克力琼脂培养基上，培养24 h后，经染色镜检和生化试验，所得结果均与接种菌株一致。

3" 防治措施

根据诊断及药敏试验结果，采取以下防治措施：（1）按照发病前每天350 kg饲料量计算用药剂量，10%多西环素700 g与10%氟苯尼考700 g联合拌入饲料中饲喂，持续5 d；（2）濒死鸭、病死鸭作深埋无害化处理，防止感染假定健康鸭群；（3）加强饲养管理，认真做好卫生清洁和消毒，确保通风良好，防止扎堆，降低鸭群应激反应。用药第5天，鸭群再无发病，病情得以有效控制。

4" 讨论

养鸭业在田东县发展庭院经济模式中占据着重要地位，为群众带来了明显的增收效果。但随着鸭养殖密度不断增大，养殖环境差等问题日益凸显，鸭疫里默氏杆菌病等细菌性疾病频繁发生。鸭疫里默氏杆菌（RA）属于革兰氏阴性菌，有荚膜，不形成芽孢，无内孔且不能运动，归属于黄杆菌科里默氏杆菌属，它能通过呼吸道和皮肤伤口水平传播，也可垂直传播[5]。当前，多种病原微生物混合感染的情况极为常见，且临床症状和病理变化极为相似甚至相同，临床上区分RA与大肠杆菌、沙门氏菌和多杀性巴氏杆菌感染十分困难[5]，因此对病原微生物进行实验室检测很有必要。现阶段，细菌分离纯化、形态观察、生化试验是基层兽医工作者对临床分离菌株初步鉴定的常用实验室诊断方法。本试验通过对发病鸭剖检、细菌分离鉴定与生化试验，初步判断分离菌株TDRA-01为鸭疫里默式杆菌。需要注意的是，已有研究表明不同来源的RA在生化特性上存在部分差异，大部分RA不发酵碳水化合物，只有少数菌株能够发酵葡萄糖、果糖和麦芽糖等[6]，单靠生化试验结果诊断会出现偏差。这提示基层兽医工作者面临实验室条件限制时，对病例的诊断除结合临床症状、细菌分离鉴定、生化实验等常用方法外，还可以利用动物回归试验、商品化的PCR诊断试剂盒等方法确诊。

RA血清型较多，国际已报道有21种，且各种血清型之间不产生交叉保护，投喂抗菌药物是当前普遍采用的防治手段[7]。使用抗生素防治RA感染的同时，也增加了耐药菌株的出现和传播，这给鸭疫里默氏杆菌病的防治带来很大困难。从RA耐药性来看，不同地方不同时间分离的RA耐药性差异较大[8]。本次药敏试验结果显示，分离菌对5种抗生素产生了耐药性，高度敏感药物仅有氟苯尼考、红霉素、多西环素3种。由此可见，分离菌TDRA-01耐药性较强、耐药范围比较广泛。目前临床上用于治疗RA的常规药物种类相对有限；一些药物在较低浓度时，其疗效作用已经微乎其微，这也使得临床药物防治该病的难度进一步增加。穿梭用药、联合用药和高价药品的使用，不仅导致畜禽养殖成本的上升，也将进一步加剧RA对个别药品产生耐药性。因此，建议将敏感药物选为该病例的临床治疗药物，避免因耐药性带来经济损失。

鸭传染性浆膜炎是鸭的一种接触性、急性或慢性、败血性传染病，其主要对1～8周龄雏鸭影响较大，以2～3周龄的雏鸭最易感。本病的发生、流行与环境因素有着极为紧密的关联。卫生条件较差、饲养密度过高、饲料营养不均衡或缺乏维生素、微量元素等，都易造成本病的继发或并发病毒性肝炎、大肠杆菌等混合感染。养殖过程中，应认真做好饲养管理工作，这是预防鸭疫里默氏杆菌病的重要关键环节[9]。

参考文献：

[1]" 刁有祥.禽病学[M].北京：中国农业科学技术出版社，2010.

[2]" 孔桂慧，王方昆，孙淑红，等.一株鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及其免疫原性研究[J].中国预防兽医学报，2020，42（5）：451-456.

[3]" 刘闯，陈锋，廖理克，等.鸭疫里默氏杆菌血清型的研究进展[J].湖北农业科学，2008（3）：355-357．

[4]" 姚火春.兽医微生物实验指导（第2版）[M].北京：中国农业出版社，2002：43-44.

[5]" 杨希川.山东省临沭县鸭疫里默氏杆菌分离鉴定及生物特性分析[J].中国动物检疫，2024，41（2）：15-21.

[6]" 胡洋，黄书伦，程方俊，等.鹅源鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及药敏试验 [J]. 黑龙江畜牧兽医，2018（2）：112-115.

[7]" 刘传辉，韩楠.鸭疫里默氏杆菌商丘流行株的分离鉴定及耐药性分析[J].中国兽医杂志，2022，58（8）：

64-68.

[8]" 关椿久，朱寅初，郑雪，等.鸭疫里默氏杆菌耐药现状及耐药机制研究进展[J].中国家禽，2022，44（2）：

87-95.

[9]" 陈翠腾，程龙飞，傅光华，等.一例鸭１型甲肝病毒和11型鸭疫里默氏杆菌混合感染的诊断及其病原的分离鉴定[J].中国畜牧兽医，2016，4（11）：3053-3058.

收稿日期：2024-05-09

第一作者：陆璐（1970—），男，本科，兽医师，从事动物疫病防控和畜牧兽医技术推广工作，E-mail：LZF18977635113@163.com

通信作者：班雪花（1975—），女，本科，高级兽医师，从事动物疫病防控工作，E-mail： 1071511569@qq.com