广西小花老鼠簕可培养细菌多样性及促生、防病、产酶活性分析

摘要：【目的】分析广西小花老鼠簕可培养细菌多样性及促生、防病、产酶活性，为小花老鼠簕种群恢复及筛选可 利用菌种资源提供参考依据。【方法】采用稀释涂布法对小花老鼠簕根、茎、叶及根际土壤可培养细菌进行分离、纯化； 对菌株的16S rRNA序列进行PCR扩增，测序结果经EzBioCloud比对确定菌株的分类地位；通过功能培养基对菌株的促生[溶磷、固氮、产吲哚乙酸（IAA）和分泌铁载体]、防病（香蕉枯萎病）及产酶（蛋白酶、淀粉酶和纤维素酶）活性进行分析。【结果】从小花老鼠簕根、茎、叶及根际土壤共筛选获得细菌159株，根据菌落形态及16SrRNA测序结果排除重复后为65株，隶属于8目7科14属，其中芽孢杆菌属（Bacillus）为优势菌属，占分离菌株的64.62%，同时发现1株潜在新种（Gxun-T66），与已发现菌株相似性仅为98.49%；植物促生防病活性结果显示，溶磷菌株34株、固氮菌株31株、产 IAA菌株20株、分泌铁载体菌株17株，其中北澳伯克霍尔德氏菌（Burkholderia territorii）Gxun-T33的溶磷和分泌铁载 体能力最强；29株对香蕉枯萎病尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum f.sp.Cubense）有明显抑制作用，其中暹罗芽孢杆 菌（Bacillus siamensis）Gxun-T25的抑菌效果最好，抑菌率达69.67%；产酶活性结果显示，产蛋白酶菌株56株，产淀粉 酶49株，产纤维素酶48株，同时产3种酶活性的菌株有34株，占分离菌株的52.31%。【结论】红树植物小花老鼠簕富含 微生物资源且具备促生、防病及产酶活性，同时发现1株潜在新种。

关键词：小花老鼠簕；可培养细菌；促生；拮抗菌；酶活性

中图分类号：S567

文献标志码：A

文章编号：2095-1191（2024）04-0973-12

Diversity of culturable endophytic bacteria in Acanthus ebracteatus of Guangxi and their growth-promoting， biocontrol effect and enzyme production activity

YIN Dou-dou1， HUANG Hong-zhi1， SONG Chao-dong1， LIU Rui1， LIANG Ying1， LU Jun-ming1， XIE Jun-jie1， YAN Bing2， SHEN Nai-kun1， ZHANG Hong-yan1*

（1School of Marine Sciences and Biotechnology， Guangxi Minzu University/Guangxi Key Laboratory for Polysaccharide Materials and Modifications， Nanning， Guangxi 530006， China; 2Guangxi Mangrove Research Center， Guangxi Academy of Sciences/Guangxi Key Lab of Mangrove Conservation and Utilization ，Beihai， Guangxi 536007， China）

Abstract：【Objective]The aim was to analyze the diversity of culturable bacteria of Acanthus ebracteatus in Guangxi and their growth-promoting， biocontrol effect and enzyme production activity， so as to provide reference for the recovery of A. ebracteatus ilicifolius population and the screening of available strain resources. 【Method】The culturable bacteria in the roots， stems， leaves and rhizosphere soil were isolated and purified by dilution coating method. The 16S rRNA se- quence of the strain was amplified by PCR， and the sequencing results were compared by EzBioCloud to determine thetaxonomic status of the strain. The growth-promoting [phosphate solubilization， nitrogen fixation， indoleacetic acid （IAA） production and siderophore secretion 1， disease prevention （banana fusarium wilt） and enzyme production （protease， amylase and cellulase） activities of the strains were analyzed by functional medium. 【Result ]A total of 159 strains of bacteria were screened from the roots， stems， leaves and rhizosphere soil of A. ebracteatus. According to the colony mor- phology and the 16S rRNA sequencing results， 65 strains were excluded after duplication， belonging to 8 orders，7 fami- lies and 14 genera. Among them， Bacillus was the dominant genus， accounting for 64.62 % of the isolated strains. At the same time， a potential new species （Gxun-T66） was found， and the similarity with the discovered strains was only 98.49%. The results of plant growth-promoting and biocontrol effect showed that 34 strains were phosphorus-solubilizing strains， 31 strains were nitrogen-fixing strains， 20 strains were IAA-producing strains and 17 strains were siderophore- secreting strains. Among them， strain Burkholderia territorii Gxun-T33 had the strongest ability to dissolve phosphorus and to secrete siderophore; 29 strains had obvious inhibition effect on Fusarium oxysporum f. sp. Cubense ，among which strain Bacillus siamensis Gxun-T25 had the best inhibition effect， with an inhibition rate of 69.67%. The results of the en- zyme activity showed that there were 56 protease-producing strains，49 amylase-producing strains，48 cellulase-producing strains and 34 strains producing three kinds of enzyme activities at the same time， accounting for 52.31% of the isolated strains. [Conclusion]The mangrove plant A. ebracteatus is rich in microbial resources and has the activities of promoting growth， biocontrol effect and enzyme production. At the same time， a potential new species has been.

Key words： Acanthus ebracteatus; culturable bacteria; growth-promoting; antagonistic bacteria; enzyme activity

Foundation items： National Natural Science Foundation of China （32060020） ; Guangxi discoverved Key Research and Development Project （Guike AB21220020， Guike AB21196019） ; Guangxi College Students' Innovation and Entrepreneurship Training Project（S202210608156）

0 引言

【研究意义】红树植物小花老鼠簕（Acanthusebracteatus）别名海簕根、黄鱼簕等，是爵床科（Acan-一thaceae）老鼠簕属（Acanthus）常绿亚灌木，其味微甘、性凉，含多种黄酮类物质，有较大的药用价值（陈玫伶等，2019）。目前小花老鼠簕已被列入濒危（EN）级别，仅在我国海南、广东和广西有天然分布，广西仅分布于防城港市江山半岛西南侧及黄竹江中游潮滩，总数量不足2000株（黄丽艳等，2020；张颖等，2021）。红树植物内生及根际土壤微生物多样性丰富，是理想促生、防病及产酶菌株的资源库（王钰，2019；吴秋雷，2020；朱天才等，2023）。因此分析广西小花老鼠簕可培养细菌多样性及促生、防病活性，对小花老鼠簕种群恢复及筛选可利用菌种资源具有重要意义。【前人研究进展】Cheng等（2019）研究表明红树林生态系统蕴藏着丰富且极具特色的海洋微生物资源，该生态系统的特殊性造就了其植物根际土壤中微生物物种的多样性。李喆等（2023）对海南红树植物小花老鼠簕的可培养细菌进行研究，从小花老鼠簕的根、茎、叶、花以及根际土壤中分离获得144株细菌，隶属于18目26科37属66种。韩敏敏等（2020）从海南西海岸4种真红树植物根际土壤中分离获得23株细菌，隶属于10目11科12属，并发现2株潜在新种。孙超等（2021）对漳州九龙江河口红树林沉积物中细菌多样性进行分析，共筛选出202株厌氧细菌（82株专性厌氧细菌，120株兼性厌氧细菌），包括4个疑似新属和4个疑似新种。黎芳婷等（2022）从3种真红树植物及其生境中分离获得可培养细菌35株，隶属于23科28属，并发现11株潜在 的新菌。李王靖等（2023）从红树植物根际土壤样 品中分离获得120种可培养细菌，隶属于35科47属， 并发现5种潜在新菌株。植物根际促生菌（Plant growth-promoting rhizobacteria，PGPR）具有固氮、溶磷、产生嗜铁素和植物激素等多种能力，能促进植物 营养吸收，帮助植物抵抗生物与非生物胁迫，对植物 生长具有促进作用（田婧等，2016）。目前，有关红树 林PGPR在国内外已有较广泛研究，何雪香等（2012） 从不同红树植物根际分离出固氮菌和解磷菌，率先 探讨了这些菌株对秋茄（Kandelia candel）幼苗的促 生效果，研究发现固氮菌和解磷菌之间存在一定的 协同增效作用。Castro等（2018）从红树林中共分离 获得细菌115株，并对其固氮、溶磷、产吲哚乙酸 （IAA）等促生特性进行分析，发现了1株兼具固氮及 溶磷活性的肠杆菌属（Enterobacter sp.）MCR1.48， 该菌株能显著促进植树造林常用树种——金合欢 （Acacia polyphylla）的生长。林钰栅等（2022）从红树林根际土壤中筛选到1株高效解磷真菌Penicil-lium sp.PSF-FJ1，可有效促进桐花树幼苗生长。杨 淼冷等（2022）从红树林根际土壤中分离获得1株兼 具促生防病效果的菌株Klebsiella aerogenes S2，可 促进番茄种子萌发及幼苗生长。此外，红树林生态 系统中生物活性物质如淀粉酶、纤维素酶和蛋白酶 也逐渐被挖掘，马军等（2016）从红树林根际土壤中 筛选出1株高产纤维素酶的枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis JCHL0207；吴秋蕾（2020）从海南省文昌市月 亮湾红树林土壤样品中分离获得79株产淀粉酶菌株；符亚楠等（2023）从海南文昌红树林一海草床复合生态系统表层沉积物中共分离出111株产蛋白酶细菌，由此可见红树植物共生细菌及根际土壤细菌多样性丰富，是潜在酶活性物质重要来源。在香蕉种植中，由尖孢镰刀菌（Fusarium oxyspormm f.sp.Cubense）引起的香蕉枯萎病对香蕉危害最为严重，生物防治具有高效、安全、绿色等特点，已成为香蕉枯萎病主要防治措施之一，因此高效拮抗菌株的筛选尤为重要（万青等，2021）。Fan等（2021）从云南香蕉产区分离出2株对香蕉枯萎病菌有较强拮抗作用的芽孢杆菌YNO904和YN1419，其对病原菌抑制率分别为79.6%和81.3%，在温室试验中对香蕉枯萎病的防治效果分别为82.6%和85.6%。Shen等（2022）从香蕉根围土壤中筛选出1株高效尖孢镰刀菌拮抗菌Bacillus siamensis Gxun-6，在盆栽条件下，该菌株对香蕉枯萎病的防治效果可达88.26%，同时可增加香蕉植株鲜重。杨迪等（2023）从不同作物根围土壤中筛选获得7株对香蕉枯萎病菌具有较强拮抗活性菌株，抑菌率最高达72.65%，其中菌株Burk-holderia cepacian Bc11盆栽试验防治效果最佳，可达68.89%。【本研究切人点】目前对红树植物小花老鼠簕的研究多集中于药用价值、地理分布及其保护措施，而有关广西地区小花老鼠簕内生及根际可培养细菌多样性及相关功能的研究尚未见报道。【拟解决的关键问题】全面解析广西地区小花老鼠筋可培养细菌多样性及相关功能，发掘菌种资源，为小花老鼠簕种群恢复及筛选可利用菌种资源提供参考依据。

1材料与方法

1.1试验材料

1.1.1样品来源广西防城港市江山半岛西南侧 （21°30'59.62\"N，108°13'35.24\"E）和黄竹江中游潮滩（21°38'98.94\"N，108°12'00.18\"E）小花老鼠簕植 株及其根际土壤。

1.1.2供试病原菌

香蕉枯萎病尖孢镰刀菌由广 西多糖材料与改性重点实验室前期分离获得。

1.1.3 培养基

LB培养基、Zobell 2216E培养基和CAS检测培养基购自青岛海博生物技术有限公司。YIM171培养基、NBRIP培养基、Ashby无氮培养基和含L-色氨酸的LB培养基参考李慧颖等（2021）的 方法配制；蛋白酶、淀粉酶检和纤维素酶检测培养基 参考杨桂柳（2015）的方法配制。 1.2试验方法

1.2.1样品处理

土壤样品处理：去除小花老鼠簕

根表面的大块土壤后使根系暴露，轻轻抖动收集附着于根系的土壤为根际土壤（Edwards et al.，2015）。将2个采样地样品混匀后取3g根际土加入含27 mL无菌水的50 mL三角瓶中，180 r/min振荡1 h，再用无菌水进行梯度稀释获得10、102、103和 10-稀释液，采用稀释涂布法取各梯度稀释液 100 μL 分别涂布于YIM171培养基、LB培养基和Zobell 2216E培养基上。

根、茎和叶样品处理参照刘鲁峰等（2019）的方法并稍作改动，将2个采样地小花老鼠觞根、茎和叶组织混匀后洗净，无菌水反复冲洗3次。75%酒精处理根组织3 min，茎和叶组织2 min，无菌水冲洗3 次。质量体积比为0.15%的升汞溶液浸泡根组织3 min，茎和叶组织2 min，无菌水冲洗3次，用移液枪吸取最后一次冲洗样品的无菌水50 μL涂布于配制好的YIM171培养基、LB培养基和Zobel1 2216E培养基上作为对照组，验证表面消毒效果。将处理好的样品各取0.2 g加入1.8 mL无菌水，用研磨仪研磨至匀浆，制成10'稀释液，再用无菌水进行梯度稀释，得到102和 103稀释液，采用稀释涂布法取各梯度稀释样品 100 μL分别涂布于YIM171 培养基、LB培养基和Zobell 2216E培养基上。

1.2.2可培养细菌的分离、纯化及保藏

将涂布好 的培养基置于30°℃培养箱中倒置培养3～5d，适时 挑取单菌落进行纯化。根据菌落形态和生长特征排 除重复后，用体积比为40%甘油，按照甘油：菌液= 1：1的比例接入冻存管中放入-20℃冰箱长期保藏。

1.2.3DNA提取与菌株鉴定

参照周双清等（2010）的方法提取细菌DNA，使用细菌通用引物27F（5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3'）和1492R（5'-AAGGAGGTGATCCAGCC-3'）作为16S rRNA序 列扩增的上、下游引物，PCR反应体系50.0μL：2×Tag mix 25.0μL，上、下游引物各1.0μL，DNA模板1.0μL，ddH2O补足至50.0μL。扩增程序：95℃预 变性4min；95℃1min，55℃1min，72℃2min，进行32个循环；72℃延伸10min。

PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测后，委托武汉奥科生物技术有限公司进行16SrRNA测序。测序结果经EzBioCloud比对，将相似性小于98.65%定义为潜在新种（Kim et al.，2014），根据比对结果判断 分离菌株的种属。

1.2.4PGPR菌株筛选

将纯化后的菌株挑取单菌落接种于LB液体培养基中活化1～2d，利用无菌水调整0D6o0=1，以此作为种子液。

溶磷菌株筛选：吸取3μL种子液接种于NBRIP 固体培养基上，30℃恒温倒置培养1～5d，若在菌株 周围出现透明圈，则证明该菌株具备溶解无机磷能 力，测量透明圈直径（D）与菌落直径（d），用D/d表示 解磷菌溶磷指数（赵龙飞等，2015）。

固氮菌株筛选：吸取3μL种子液接种于无氮 Ashby固体培养基上，30℃恒温倒置培养1～5d，观 察其生长情况和菌落周围是否出现透明圈，如菌落 生长良好且在菌落周围出现透明圈说明该菌株具有 固氮能力。

产IAA菌株筛选：采用Salkowski比色法（Glick- mann and Dessaux，1995），将菌株接种于含0.5 g/L色氨酸的液体LB培养基中，于30°℃下180r/min振荡培养2～3d。取1mL菌悬液经12000r/min离心2 min后取上清100 μL，加入100 μL Salkowski比色 液，室温下避光反应30min，观察颜色变化，出现红 色或粉红色为阳性，即该菌株具备产IAA能力。在波长为530nm下测量反应液OD值，代入标准曲线（配制浓度梯度为5、10、20、40、60、80和100mg/L的IAA溶液，在530nm下测量OD值，绘制标准曲线）计算菌株产IAA浓度。阳性对照采用100μL50mg/L的IAA标准品与等体积比色液混合，空白对照为100μL液体培养基与等体积比色液混合。

分泌铁载体菌株筛选：吸取3μL种子液接种于 CAS检测培养基上，30C恒温倒置培养1～5d，观察 培养基颜色变化，若在菌落周围出现橙黄色晕圈，即 为阳性，表明该菌株具备分泌铁载体能力（朱芝宜 等，2020）。

1.2.5病原菌拮抗菌株筛选

采用平板对峙法（桑 建伟，2018）筛选对尖孢镰刀菌具有拮抗作用的菌 株，取尖孢镰刀菌菌饼置于PDA培养基中央，在距离中央2.5cm处接种子液3μL，每个培养基对称选取4个点，每组3个重复。以只接尖孢镰刀菌的PDA 培养基为对照，28℃恒温培养3～5d。观察分离菌 株对尖孢镰刀菌抑制效果，待对照组病原菌铺满培 养皿时，用游标卡尺测量处理组及对照组菌落直径， 计算抑菌率。抑菌率（%）=（对照组菌落直径-处理 组菌落直径）/对照组菌落直径×100。

1.2.6酶活性菌株筛选

取3μL种子液分别接种 于蛋白酶、淀粉酶和纤维素酶检测培养基上，30℃ 下倒置培养3～5d，通过观察透明圈有无及大小判断 菌株产蛋白酶能力，并计算透明圈直径（R）与菌落直径（Rg）的比值K（K=R/R2），K值越大表明菌株产蛋白酶能力越强（冉丽媛，2014）。将接种后的淀粉酶检测培养基置于30°℃培养箱中培养3d，待菌落长势良好后刮掉菌体，往培养基上滴加卢戈式（Lugol）碘液，观察菌落周围不被碘液染色的水解透明圈情况和大小，出现水解圈即为阳性，表明该菌株具备产淀粉酶能力。将接种后的纤维素检测培养基置于30℃培养箱中培养5d，待菌落长势良好后刮掉菌体，往培养基中添加体积比为0.3%刚果红溶液，观察菌落周围不被刚果红溶液染色的水解圈情况和大小，出现水解圈即为阳性，表明该菌株具备产纤维素酶能力。

2结果与分析

2.1小花老鼠簕可培养细菌多样性分析结果

经分离纯化共筛选出细菌159株，其中根际土壤细菌78株，内生菌81株。内生菌中44株来自根部、25株来自茎部、12株来自叶部，根、茎和叶分离的内生菌数目呈递减趋势。根据菌落形态、菌株活性、16SrRNA序列测序结果排除重复后，共得到功能不同、形态不同的细菌65株（表1），其中根际细菌40株，内生菌25株，隶属于8目7科14属，其中芽孢杆菌属（Bacillus）为优势菌属，占分离菌株的64.62%。

2.2小花老鼠簕可培养细菌促生、防病及产酶活性分析结果

如表2所示，在排除重复后的65株细菌中，溶磷菌株34株，占比52.31%；固氮菌株31株，占比47.69%；产IAA菌株20株，占比30.77%；分泌铁载体菌株17株，占比26.15%。至少具备1种促生作用的菌株有54株，阳性率达83.08%，其中芽孢杆菌属细菌有34株，占阳性菌株的62.96%，同时具备3种促生活性的菌株15株，芽孢杆菌属菌株最多，占比66.67%。有29株对供试香蕉枯萎病病原菌尖孢镰刀菌的生长表现出抑制作用，其中根际土壤细菌17株，占总数26.15%；内生菌12株，占总数18.46%。产蛋白酶菌株有56株，占总数86.15%；产淀粉酶菌株有49株，占总数75.38%；产纤维素酶菌株有48株，占总数73.85%。至少具备1种酶活性的菌株有64株，阳性率达98.46%；同时具备产蛋白酶、淀粉酶和纤维素酶能力的菌株有34株，占分离菌株的52.31%。除此之外，本研究从小花老鼠簕根际土壤中分离获得1株喜盐芽孢杆菌属（Halobacillus）细菌（Gxun-T66），与已发现菌株相似性仅为98.49%，推测为潜在新种有待进一步研究。

2.3小花老鼠簕内生细菌及根际细菌促生活性分析结果

在排除重复后的65株细菌中，菌株Gxun-T33溶磷能力最强，溶磷指数为4.50，其次是菌株Gxun-T28-2，溶磷指数为3.23（表3和图1-A1～图1-A3）；菌株Gxun-T33分泌铁载体能力最强，其橙黄色晕圈直径可达28.71mm，其次是菌株Gxun-T14，其橙黄色晕圈直径可达20.15mm（表3和图1-B1～图1-B3）；菌株Gxun-T25固氮能力最强，菌落直径为10.49mm，其次是菌株Gxun-T70，其菌落直径为9.13mm（表3和图1-C1～图1-C3）；菌株Gxun-T27产IAA能力最强，接种到含色氨酸的LB培养基中3d后，IAA浓度为23.30mg/L，其次是菌株Gxun-T25，接种3d后，IAA浓度为22.63mg/L（表3）。因此，北澳伯克霍尔德氏菌（Burkholderia territorii）Gxun-T33的溶磷和分泌铁载体能力最强；暹罗芽孢杆菌（Bacillus sia-mensis）Gxun-T25固氮能力最强，产IAA能力较强，该类菌株有望成为优势促生菌株。

2.4小花老鼠簕可培养细菌抑菌活性分析结果

平板对峙试验表明，有29株菌株对供试香蕉枯萎病病原菌尖孢镰刀菌的生长表现出抑制作用，其抑菌率在60%以上的菌株有6株，分别为菌株Gxun-T25、Gxun-T24、Gxun-G3、Gxun-Y4、Gxun-T65和Gxun-G6，其中菌株Gxun-T25抑菌率最高，为69.67%；其次是菌株Gxun-T24，抑菌率为68.19%（表4和图2）。

2.5小花老鼠簕可培养细菌产酶活性分析结果

65株细菌中，菌株Gxun-Y4产蛋白酶能力最强，K值达4.36；其次是菌株Gxun-G27，其K值为3.88（表5和图3-A1～图3-A3）；菌株Gxun-J10产淀粉酶能力最强，R为36.31mm，其次是菌株Gxun-T16，R为34.49mm（表5和图3-B1～图3-B3）；菌株Gxun-T48-1产纤维素酶能力最强，R为31.82mm，其次是菌株Gxun-T16，R1为31.70mm（表5和图3-C1～图3-C3）。

3讨论

红树林生境同时兼备海陆特质，具有高湿、高盐及潮汐等环境特征，独特的环境特征造就红树林生境中丰富的微生物资源。本研究对广西防城港市2个地区小花老鼠簕内生菌及其根际土壤细菌进行多样性分析，结果表明根际土壤可培养细菌多样性较为丰富，其次是根部，猜测原因在于红树植物凋落叶和细根为土壤积累有机质，有机质的积累为微生物生长和繁殖提供营养（刘秀，2018）。在分离获得的细菌中，芽孢杆菌属处于优势地位，与赵雅慧等（2018）对25个红树林样品进行可培养细菌多样性分析的结果相似。本研究分离菌株多样性与李喆等（2023）报道的海口市东寨港红树林保护中心的小花老鼠簕及其生境中可培养细菌多样性存在较大差异，可能原因是采样地点不同，红树林生境会有所差别，也可能与选取的植物组织数量及分离培养基的种类有关，具体原因有待进一步深入研究。

PGPR的促生作用机制可分为直接和间接2种形式，直接促生作用主要包括溶磷、固氮、产铁载体和产植物激素等（朱天才等，2023）。在分离菌株中，至少具备1种促生作用的菌株有54株，阳性率达83.08%，其中芽孢杆菌属细菌有34株，占阳性菌株的62.96%。同时具备3种促生活性的菌株有15株，隶属于希瓦氏菌属、沙雷氏菌属、微球菌属、芽孢杆菌属、碱卤杆菌属和土壤芽孢杆菌属，芽孢杆菌属菌株最多，占比66.67%，芽孢杆菌属细菌在植物促生方面具有重要作用。就分离菌株的应用潜力而言，本研究分离获得的菌株Gxun-T33溶磷指数达4.50，溶磷能力高于赵龙飞等（2021）从地黄中分离得到的菠萝泛菌Pantoea ananatis DH92。与溶磷等促生特征相比，IAA和铁载体生成是植物促生菌株筛选的优选特征，本研究筛选获得2株同时具备产IAA和铁载体能力辣椒芽孢杆菌（B.zanthoxyli）Gxun-T28-1和褪色沙雷氏菌（Serratia marcescens）Gxun-T14，且前者兼具固氮活性。有关辣椒芽孢杆菌在植物促生方面的研究较多，孔亚东（2022）、刘泽（2022）研究表明辣椒芽孢杆菌对玉米和油菜植株具有促生作用。孟丽媛等（2022）从菜园土壤中分离得到1株高效固氮菌GN7经鉴定为辣椒芽孢杆菌（B.zanthoxyli）。但褪色沙雷氏菌在植物促生方面的报道较少，因此菌株Gxun-T14的促生作用及促生机制有待进一步研究。综合菌株的促生效果，本研究筛选获得的优势菌株Gxun-T33、Gxun-T28-1和Gxun-T14，后续将进行盆栽试验，进一步研究其对小花老鼠簕的促生作用、定殖状况及对根际土壤生境的影响，为开发小花老鼠簕专用生物菌肥奠定基础，促进 濒危植物小花老鼠簕的繁育和保护。

PGPR的间接促生作用主要包括诱导植物产生 抗性、产生抗真菌代谢产物等。本研究以香蕉枯萎 病尖孢镰刀菌为供试病原菌，筛选获得到29株抑制 病原菌生长的拮抗菌株，且抑菌率均大于40.00%。 其中菌株Gxun-T25（B.siamensis）抑菌作用最好， 抑菌率达69.67%，林志楷和林文珍（2019）报道表 明B.siamensis具有广谱抑菌效果，对尖孢镰刀菌、 火龙果炭疽病菌（Colletotrichum gloeosporioides）、 水稻稻瘟病原菌（Magnaporthe grisea）等均具有较 好抑制效果，在植物病害生物防治方面具有广阔的 应用前景，但B.siamensis在香蕉枯萎病防治方面的 应用并不多见。前人研究表明，细菌能通过竞争生 态位和营养位置、诱导宿主系统产生耐药性（Induc- tion of systemic resistance，ISR）及群体效应信号干扰 等多种方式抑制病原菌生长（徐志周等，2019）。本 研究仅对抑制香蕉枯萎病尖孢镰刀菌的拮抗菌株进 行筛选，对于拮抗菌株的抑菌活性物质和抑菌机制 有待进一步研究。

在分离的 65 株细菌中至少具备1种酶活性的有64 株，阳性率达98.46%;同时具备产蛋白酶、产淀粉酶、产纤维素酶能力的菌株有 34 株，占分离菌株的52.31%。本研究分离获得的菌株普遍具有分泌多种功能酶的能力可能与其生境有关，红树林易受间歇性潮水浸淹，导致大量海洋动植物残体和落叶聚集，可富集到大量具有降解蛋白质、淀粉、纤维素等有机物的菌株（尹雁玲等，2022）。拮抗活性研究表明，多数（75.86%）对香蕉枯萎病尖孢镰刀菌具有拮抗作用的细菌均具有产蛋白酶、淀粉酶和纤维素酶3种活性，由此猜测拮抗菌株不仅能通过产生化合物抑制病原菌，还可通过产生水解酶破坏真菌细胞壁，从而对病原菌起到抑制作用，与王卉等（2016）、Syed-Ab-Rahman 等（2018）、Trinh 等（2019）的研究结果一致。综上所述，本研究分离获得的部分菌株具有促生、防病及产酶等多种生物活性，可为农业种植及生物防治提供菌株资源，也为红树植物小花老鼠觞种群恢复提供促生菌株。

结论

植物小花老鼠簕富含微生物资源且具备促生、 防病及产酶活性等生物活性，发现1株潜在新种。

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（责任编辑李洪艳）