松茸粗多糖的提取工艺优化、单糖组成及体外抗氧化活性

摘要： 【目的】提高松茸粗多糖提取率，探究松茸多糖纯化组分及抗氧化作用。【方法】采用超声波辅助水提醇沉法提取松茸粗多糖，优化提取工艺，使用DEAE-Sepharose Fast Flow 离子柱分离纯化粗多糖，采用离子色谱法分析单糖成分，并测定体外抗氧化活性。【结果】最优提取工艺参数为：浸提时间2.25 h，料液比1∶31（g∶mL），浸提温度83.50 ℃，该条件下多糖提取率为8.67%。松茸粗多糖经分离纯化后收集到3 种多糖组分（TMP-1、TMP-2、TMP-3），主要由岩藻糖、盐酸氨基葡萄糖、半乳糖、葡萄糖和甘露糖组成，其中TMP-1 存在鼠李糖，TMP-2 和TMP-3 存在葡萄糖醛酸。松茸粗多糖和3 种纯化多糖组分均具有一定的抗氧化活性且存在量效关系，抗氧化能力强弱为：松茸粗多糖gt;TMP-2gt;TMP-3gt;TMP-1。【结论】松茸多糖有一定的抗氧化活性，且松茸粗多糖效果最好，分离纯化后的多糖组分抗氧化活性有所降低。本研究为松茸多糖的开发利用提供了理论基础，对其功能食品研发具有重要意义。

关键词： 松茸多糖；提取工艺；分离纯化；单糖组成；抗氧化活性

中图分类号： S646.150.1 文献标志码： A 文章编号： 1004–390X （2024） 02−0108−11

松茸[Tricholoma matsutake （S.Ito et lmai） Sing]又称松口蘑、松簟等，属担子菌门（Basidiomycete）伞菌目（Agaricales） 口蘑科（Tricholomataceae）口蘑属（Tricholoma） 大型真菌[1]，在中国主要分布于吉林、四川、云南、西藏等地。松茸是世界上最珍贵的大型真菌之一，具有独特的风味和药理学特性[2]。其含有多种营养物质，如多糖、蛋白质、矿物质、维生素、低脂肪等，具有抗氧化、治疗糖尿病、抗癌等功效[3]。多糖是松茸的主要活性成分，也是目前研究最多的组分。临床研究证明：松茸提取物（多糖） 具有美白、抗肿瘤、提高免疫力、抗病毒活性、抗炎、降血糖等作用[4]，在保健食品和医药领域具有广阔的开发前景。目前，有关松茸多糖的研究多集中于松茸粗多糖或提取分离的部分多糖，如：YIN 等[5]比较了热水提取法、酶辅助提取法、超声波清洗器提取法、静态探针超声波提取法和连续相微萃取法提取松茸多糖的差异；陈炼红等[6]采用复合酶法从松茸中提取了多糖；吴杨洋等[7]对比了热水浸提、超声提取、酶提取和微波提取法的松茸多糖提取率。但是，对于松茸多糖分离纯化后各组分单糖组成及结构、生物活性及其结构作用机制之间的关系尚不清楚。不同来源的松茸多糖结构可能存在差异，阻碍了松茸多糖的充分利用[8]。基于此，本研究采用超声波辅助水提醇沉法提取松茸多糖，利用响应曲面试验优化其提取工艺；对多糖进行分离纯化，对纯化后的组分进行单糖组成研究；测定松茸多糖对DPPH 自由基和ABTS 自由基的清除率、金属螯合离子能力以及还原能力，以评价其抗氧化活性。研究结果将为松茸多糖的进一步开发利用提供理论参考。

1 材料与方法

1.1 主要材料与试剂

松茸购自易门县山里香食品有限公司（产自云南省玉溪市易门县）；2，2′-联氮双（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸） 二铵盐（ABTS）、1-1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH） 购自天津市风船化学试剂科技有限公司；抗坏血酸（Vc）、乙二胺四乙酸二钠盐（EDTA-2Na） 购自上海源叶生物科技有限公司；16 种单糖标准品（岩藻糖、鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、甘露糖、果糖、核糖、半乳糖醛酸、葡萄糖醛酸、氨基半乳糖盐酸盐、盐酸氨基葡萄糖、N-乙酰-D 氨基葡萄糖、古罗糖醛酸、甘露糖醛酸） 购自上海博睿糖生物技术有限公司。以上试剂均为分析纯。

1.2 主要仪器与设备

A360 紫外分光光度计（上海美普达仪器有限公司）；LGJ-10N 真空冷冻干燥机（北京亚星仪科发展有限公司）；H2-16RK 台式高速离心机（湖南可成仪器设备有限公司）；SCQ-9201B 超声波清洗器（上海声彦超声仪器有限公司）；ICS5000 离子色谱仪（美国ThermoFisher 公司）。

1.3 试验方法

1.3.1 松茸粗多糖提取

准确称取松茸粉末5 g （精确至0.001） 于烧杯中，以超纯水为提取溶剂，溶解后放入超声波提取仪（功率600 W，频率40 kHz） 超声20 min，之后按照一定浸提时间、料液比和浸提温度进行提取；以6 500 r/min 离心20 min，收集上清液，滤渣复提2 次，合并上清液；旋转蒸发至1/4 体积，加入上清液体积3 倍的无水乙醇，醇沉（4 ℃，24 h）；静置24 h 后，以4 000 r/min 离心15 min，沉淀物加入超纯水复溶，以6 500 r/min 离心20 min；冷冻干燥后置于−80 ℃ 保存，得到松茸粗多糖。以葡萄糖为标准，采用苯酚—硫酸法测定松茸粗多糖的含量，绘制葡萄糖标准曲线，并计算松茸粗多糖提取率。松茸粗多糖提取率=松茸粗多糖质量/松茸预处理干粉质量×100%。