国标《食品中合成着色剂的测定》历次修订浅析

李广 顾敏 张锋

人工合成着色剂是通过化学反应人工合成的一种有机染料，具有着力强、色彩鲜亮、易调色、成本低廉等特点，被广泛应用于食品行业。合成着色剂主要由苯、萘等有机化合物制成，人体吸收后会在体内积蓄、分解，对人体有潜在致癌性。因此，我国出台了相关规定对合成着色剂的使用进行规范，也颁布了国标《食品中合成着色剂的测定》，规定了食品中合成着色剂的检测方法。经查询，国标《食品中合成着色剂的测定》最早于1985年颁布，随后于1996年、2003年、2016年、2023年进行了四次修订。1985年颁布的标准由于年代较久，未能查到相关版本。本文以1996年的标准为初始版本，从标准名称、适用范围、检测方法、原理等方面进行逐条分析和比较，以期为标准使用者快速、详细地了解标准历次修订内容和变化情况，准确应用新修订标准对食品中合成着色剂进行检测提供参考。

一、标准名称

1996版的标准名称为“GB/T 5009.35-1996《食品中合成着色剂的测定方法》”，2003版修改为“GB/T 5009.35-2003《食品中合成着色剂的测定》”，无显著区别。2016版标准名称修改为“GB 5009.35-2016《食品安全国家标准 食品中合成着色剂的测定》”，标准代号由推荐性的GB/T修订为具有强制性含义的GB，使其具有法律属性，必须贯彻执行。2023版除年号改变外，其余与2016版一致，未有变化。

二、检测方法

1996版检测方法有“高效液相色谱法”“薄层色谱法”两种方法；2003版在1996版的基础上增加了第三法“示波极谱法”；2016版和2023版则删除了“薄层色谱法”和“示波极谱法”，只保留了“高效液相色谱法”。因此，本文主要针对“高效液相色谱法”进行标准历次修订情况的比较分析。

三、范围

1996版标准的标题为“主题内容与适用范围”，后三版均修订为“范围”。在具体内容方面，2003版在1996版标准的基础上，于此处列出了各着色剂的检出限和定量限，这部分内容在1996版中是在“原理”部分列出，2016版、2023版则是在标准结尾部分“其他”这一标题下列出，内容结构有所调整。

2016版标准以2003版为基础，删除了此处的检出限和定量限内容，规定了此标准具体的适用产品；2023版则又删除了具体适用产品，以食品代替。因为2023版除代替旧标2016版外，还替代了GB/T 21916-2008、GB 5009.141-2016、GB/T 9695.6-2008，即水果罐头中合成着色剂、食品中诱惑红、肉制品中胭脂红的测定，基本囊括了各种类别食品中合成着色剂的测定。

四、原理

1996版、2003版、2016版标准的原理一致，均是经过聚酰胺吸附法或液-液分配法提取、制成水溶液，微孔濾膜过滤后进高效液相色谱仪进行分析。2023版修订为乙醇-氨水溶液提取、固相萃取净化，浓缩后用pH=9.0的乙酸铵缓冲液溶解，微孔滤膜过滤后进高效液相色谱仪测定，对前处理方法进行了修改，这也是2023版标准最大的变化之一。

五、试剂和材料

2003版与1996版标准的标题均为“试剂”，将实验中用到的试剂、试剂溶液和标准溶液的配制等合放在了一起，内容几乎完全一致。2016版标准标题改为“试剂和材料”，增加了分级标题“试剂”“试剂配制”“标准品”“标准溶液配制”，还增加了试剂的级别和分子式、标准品和CAS号，使标准结构更有层次性，简洁明了，标准使用者能很快明确进行此项实验要用到的试剂和相关标准物质。2023版标准增加了喹啉黄、靛蓝、酸性红、诱惑红4种合成着色剂标准物质；2016版标准的标准溶液配制分为“标准贮备液”“标准使用液”两步；2023版标准则将“标准使用液”改为“混合标准中间液”，增加了“标准系列工作液”这一步，整体修订为“标准储备液”“混合标准中间液”“标准系列工作液”。在标准储备液配制中，2023版标准将前三版中的标准物质溶解稀释液pH=6的水修改为纯水，不用再调节水的pH，还列出了标准系列工作液的配制浓度和配制方法，标准溶液的配制过程更为明确，使用者更易掌握。

六、仪器和设备

1996版、2003版标准的标题名称均为“仪器”，2016版、2023版修订为“仪器和设备”。在内容方面，1996版、2003版标准均为“高效液相色谱仪，带紫外检测器，254nm波长”。2016版在2003版的基础上补加了“天平、恒温水浴锅、G3垂融漏斗”主要仪器设备，这些设备在2003版和1996版标准的实验中均有用到，但在“仪器”标题下并未列出。2016版标准还在紫外检测器基础上增加了“二极管阵列检测器”，但实验中用到的一些仪器、器皿还是未列全，如100mL烧杯、分液漏斗、蒸发皿、抽滤装置等。2023版标准的结构层次与2016版一致，因修改了前处理方法，所以仪器设备也进行了更换，除了50mL具塞离心管、50mL容量瓶未列出外，基本列全了实验中用到的所有仪器和其他一些小装置。

七、分析步骤

此标题下设置有不同级别的标题，本文以1996版标准为参照进行比较分析。

（一）样品处理

在4个版本中，标题名称各不相同，分别为“样品处理”“试样处理”“试样制备”“样品前处理”。其中，前三版的下一级标题名称（三级标题）与内容几乎完全一致，均为不同类别样品的称量、二氧化碳或乙醇的驱除、样品或着色剂溶解过程。不同之处在于，1996版、2003版标准中的三级标题“橘子汁、果味水、果子露汽水等”在2016版标准中修改为“果汁饮料及果汁、果味碳酸饮料等”，对样品类型名称进行了修改，但样品类别未发生变化，还是果汁、汽水类的食品。称量精度在1996版、2003版标准中为0.1g或0.01g，2016版标准中统一为0.001g，更为精确。与前三版比，2023版标准二级标题“样品前处理”下设三级标题“试样制备”，内容为不同状态（液体、半固体、固体）样品的制备方法和保存条件，即试样的混匀、保存，而非样品的称量、着色剂溶解过程。

（二）提取

1996版、2003版、2016版标准的标题名称均为“色素提取”，2023版修改为“试样提取”。1996版、2003版、2016版标准不仅二级标题名称一样，三级标题名称也相同，均为“聚酰胺吸附法”“液-液分配法”，内容也基本一致。不同之处在于，1996版、2003版标准“液-液分配法”中的“加60mL正己烷”，在2016版中修订为“加10mL正己烷”，其他内容除了个别标点符号和字词稍有改动外基本一致，均为试样中色素的提取、纯化、过微孔滤膜、进高效液相色谱仪分析。2023版标准中，二级标题名称为“试样提取”，三级标题分别为“液体类试样”“固体类试样”“含油量较大的试样”，内容对应前三版中“样品处理”和“色素提取”中的部分内容，为样品的称量、着色剂的提取。前三版中样品的纯化过程则放在了二级标题“试样净化”中，“试样净化”下又增设三级标题“活化”（对固相萃取柱进行活化）、“上样”（待净化液过萃取柱）、“淋洗”（淋洗液清洗固相萃取柱）、“洗脱”（待测合成着色剂的解吸、浓缩、溶解、过滤、上机）。

（三）仪器参考条件

1996版、2003版标准的标题名称为“高效液相色谱参考条件”，2016版、2023版为“仪器参考条件”。在内容上，1996版和2003版一致；2016版与前两版比，10μm粒径的色谱柱替换为了5μm粒径；柱温在前两版中未做规定，默认为室温，2016版规定为35℃；流动相缓冲液均为0.02mol/L的乙酸铵溶液，但前两版调节pH为4，2016版、2023版不再调节pH，前两版梯度比例相同，后两版均进行了改动；检测波长在前两版中均为紫外254nm，2016版在紫外254nm基础上增加了二极管阵列检测400-800nm最大值检测。2023版与2016版相比，柱温由35℃修订为30℃；因新增了着色剂检测种类，流动相梯度也相应做了调整，分离检测时間变长；检测波长删除了紫外254nm检测，保留了二极管阵列400-800nm范围检测，但区别在于，2023版根据各着色剂最大吸收波长进行了检测波长的归类，把最大吸收波长相近的着色剂归为一类确定一个波长，进行最大波长多波长采集。

（四）测定

4个版本基本一致，2023版在此标题前面多了平行标题“标准曲线的制作”，具体描述了曲线的制作方法。

（五）结果的计算

1996版、2003版标题名称分别为“计算”“结果计算”，2016版、2023版修改为“分析结果的表述”。内容均为着色剂含量的计算，包括计算公式和公式中各字母注释，4个版本均有不同。1996版与2003版基本一致，不同之处为2003版将1996版“m1——样液中着色剂的质量”中的字母“m1”修正为公式中的字母“A”。2016版、2023版将前两版计算公式中的“样液中着色剂质量”修订为“质量浓度”，对计算公式进行了相应的修改。在结果保留有效数字方面，前三版均为保留2位有效数字，2023版修订为保留3位有效数字。

（六）精密度

1996版标准为“允许差”，内容为“相对相差≤10%”；2003版、2016版、2023版修改为“精密度”，要求为“两次独立结果的绝对差值不超过算术平均值的10%”。虽然表述不同，但要求相同。

（七）其他

1996版、2003版于此处将着色剂的色谱分离图列出，且色谱图相同。2016版、2023版列出了各着色剂的检出限和定量限，色谱图则是作为附录A另起一页单独列出，且均对色谱图进行了相应的修改。

需要指出的是，上述标题（五）（六）（七）在1996版、2003版中为一级标题“分析步骤”下的二级标题，在2016版、2023版标准中则作为独立的一级标题列出。

基金项目：甘肃省属科研院所创新能力建设专项（21JR7RA765）。

作者简介：李广（1981-），男，汉族，山东肥城人，助理研究员，硕士研究生，研究方向为食品安全、生物次生代谢。

*通信作者：张锋（1981-），男，汉族，高级工程师，大学本科，研究方向为食品安全。