血浆microRNA对血瘀型急性非ST段抬高型心肌梗死的诊断价值

陈艳俏，杨翠，陈少军

摘要目的：分析特定microRNA在血瘀型急性非ST段抬高型心肌梗死病人血浆中的分布特点。方法：入选北京中医医院怀柔医院心血管科2018年12月—2020年12月住院的40例中医辨证为血瘀型病人，入院后诊断为急性非ST段抬高型心肌梗死者32例为观察组，未诊断为急性非ST段抬高型心肌梗死病人8例为对照组，收集两组病人血清肌钙蛋白I（cTnI）、B型钠尿肽（BNP）及左室射血分数（LVEF）等资料，并对两组病人血浆中特定microRNA进行检测分析比较。结果：与对照组相比，观察组cTnI及BNP明显升高，LVEF 低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；观察组病人血浆miR-133 aRNA、miR-208 RNA、miR-1 RNA表达水平上调，差异有统计学意义（P＜0.05），而观察组病人血浆miR-21RNA与对照组相比，差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：血浆miR-133a、miR-208、miR-1在血瘀型急性非ST段抬高型心肌梗死病人中表达水平显著升高，其可能成为预测急性非ST段抬高型心肌梗死及辅助评估心功能的潜在指标。

关键词急性非ST段抬高型心肌梗死；血瘀型；血浆microRNA；血清肌钙蛋白I；B型钠尿肽；左室射血分数

doi：10.12102/j.issn.1672-1349.2024.08.026

随着生活方式及人口结构的改变，急性心肌梗死发病率逐年升高，并有向低龄化发展的趋势，因其致死率高、预后差，成为当今人类健康的头号杀手。急性非ST段抬高型心肌梗死（non ST-segment elevation myocardial infarction，NSTEMI）属于非ST段抬高型急性冠脉综合征的一种，最新版《2020年欧洲心脏病学会非ST段抬高型急性冠状动脉综合征管理指南》［1］指出，胸痛症状、体征、心电图、肌钙蛋白检测用于NSTEMI早期诊断，血浆脑钠肽（BNP）或者N末端B型脑钠肽前体（NT-proBNP）用于风险或预后评估。同时，越来越多研究发现，microRNA在急性心肌梗死的病理发生发展过程中起到关键作用，心肌梗死发生时，特定的microRNA能以稳定的形式释放至循环血液中，可能成为新型的生物标志物而具有潜在的临床应用价值［2-3］。本研究以血浆 microRNA 为切入点，观察中医辨证属血瘀型非 ST 段抬高型心肌梗死病人发病阶段特异性血浆microRNA的表达特征，初步探索了血浆microRNA对血瘀型NSTEMI的诊断价值。

1资料与方法

1.1临床资料

选择2018年12月—2020年12月入住北京中医医院怀柔医院心血管科的32例辨证属血瘀证的NSTEMI病人为观察组，8例中医辨证属血瘀证的未诊断为NSTEMI病人为对照组。观察组，男20例，女12例，年龄37～79（63.59±10.18岁）；对照组，男5例，女3例，年龄37～74（57.63±11.99）岁。两组病人均患有高脂血症，观察组与对照组年龄、性别、合并基础病等基线资料比较差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。详见表1。所有参与研究病人均按照相关指南获得相应干预及对症治疗。本研究已获得北京中医医院怀柔医院伦理委员会批准，所有参与研究的病人或病人家属均对本研究内容充分知情，并签署了知情同意书。

1.2诊断标准

1.2.1NSTEMI診断标准

参考 2018 年第4版心肌梗死全球统一定义［4-5］制定。血清心肌标志物（主要是肌钙蛋白）升高，并至少伴有以下一项临床指标：1）缺血症状；2）新发生的缺血性心电图改变（新的ST-T改变或左束支传导阻滞）；3）心电图病理性Q波形成；4）影像学证据显示有新的心肌活性丧失或新发的局部室壁运动异常；5）冠状动脉造影或尸检证实冠状动脉内有血栓。结合心电图ST-T改变，除外急性ST段抬高型心肌梗死。

1.2.2血瘀证诊断标准

参考 2018 年《急性心肌梗死中西医结合诊疗指南》［6］制定标准。气虚血瘀：胸部刺痛、闷滞，活动后加重，可伴身体乏力，气短，出汗，心悸，查体可有四肢肌肤瘀斑或甲错，舌质暗淡或有瘀点瘀斑，舌苔薄白，脉虚无力或弦细无力。气滞血瘀：心胸满闷，刺痛阵发，痛有定处，常欲叹息，情志不遂时易诱发或加重，查体可见面色黧黑，唇甲青紫，皮肤出现瘀斑，舌质紫暗，可见紫点或紫斑，舌底静脉曲张，舌苔薄，脉弦涩。痰阻血瘀：剧烈胸痛，胸闷如窒，气短，形体沉重肥胖，咳嗽痰多，纳呆恶心，可伴头昏目眩，脑胀，舌紫暗或暗红，可有瘀斑，舌下瘀筋，舌苔厚腻，脉滑或涩。

1.3纳入与排除标准

1.3.1纳入标准

1）年龄 18～80岁；2）符合NSTEMI急性诊断标准；3）中医辨证属血瘀证。

1.3.2排除标准

1）严重感染或自身免疫性疾病者；2）严重心功能不全者，左室射血分数（LVEF）＜35%；3）未控制的严重高血压或1型糖尿病病人；4）严重瓣膜性心脏病者；5）合并严重肝、肾或造血系统及精神疾病、恶性肿瘤者；6）依从性差；7）妊娠期或哺乳期妇女；8）拒绝签署知情同意书者。

1.4研究方法

1.4.1一般情况

记录入组病人的一般情况及急性心肌梗死相关危险因素情况，包括性别、年龄及合并疾病情况。观察指标：血清BNP、血清肌钙蛋白I（cTnI）等指标由我院检验科检测；LVEF数据由我院超声科提供。

1.4.2目标基因microRNA检测

1）使用EDTA 血浆分离管采集符合入组标准的病人静脉血样，以二次离心法获得血浆样本后，置于－80 ℃条件保存；2）使用Trizol 法分别提取各组标本的总 RNA，经过反转录后制备目标 cDNA 模板；3）设计目标基因上游引物，选择合适的内参基因，应用通用引物的 SYBR Green 染料法对备选目标基因进行实时荧光定量反转录聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测，检测重复进行3次，取3次检测结果的平均值。4）根据qRT-PCR原始检测结果，计算出各样品的目的基因相对定量结果，即其他各个样品相对于对照样品，目的microRNA基因转录水平的差异。

1.5统计学处理

血浆microRNAs表达采用2－△△Ct相对定量计算公式，其中△△Ct＝（观察组目的基因平均Ct值—观察组内参基因平均Ct值）—（对照组目的基因平均Ct值—对照组内参基因平均Ct值）。定量资料为正态分布且方差齐时，采用两独立样本t检验，用均数±标准差（x±s）表示；定性资料两组间比较应用χ2检验。采用SPSS25.0软件对数据进行分析处理，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1两组TNI、BNP及LVEF比较

与对照组相比，观察组cTnI及BNP明显升高，LVEF明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。详见表2。

2.2两组血浆目标基因microRNA表达结果比较

对microRNA在NSTEMI病人中的表达特点进行分析，选定4个目标microRNA（miR-133a、miR-208、miR-21及miR-1）进行转录水平测定。本研究结果显示，观察组病人血浆miR-133a RNA、miR-208 RNA、miR-1 RNA表达水平显著高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05），而观察组病人血浆miR-21 RNA与对照组相比，差异无统计学意义（P＞0.05）。详见表3。

3讨论

NSTEMI是临床常见的心血管疾病，现代医学研究认为，其发病机制与冠状动脉粥样斑块不稳定、斑块破裂、血栓形成、血液微循环障碍、心肌供氧不足及失衡等诸多因素密切相关。本病发病率及致死率高，对其早期鉴别诊断有助于及时选择个体化的抗栓或血运重建等干预措施，对本病的发展趋势及预后评估有着重要的意义，快速而准确的诊断一直以来都是研究的热点。大量研究发现，microRNA在许多心血管疾病的发生发展过程中起到关键的作用，不仅在心肌组织中特异性表达，而且还能以稳定的形式存在于循环血液中，其异常表达与组织损伤或病理变化呈现出明显的动态相关性，可能成为新一代生物标志物［2，7-9］。

NSTEMI属于中医学“胸痹”“心痛”范畴，中医认为，本病为本虚标实之证，以心气、心阳虚衰为本，气滞、血瘀、痰饮、寒凝为标。心气、心阳虚损，无力鼓动血脉，导致瘀血痹阻心脉，血瘀贯穿胸痹心痛疾病发展病理过程的始终。血瘀证是非ST段抬高型心肌梗死的最为常见的证型，是众多心血管中医药现代化研究的方向。故本研究选取中医辨证属血瘀证的NSTEMI病人为研究对象，探讨特定microRNA在血浆中的分布规律。

心血管疾病发生时，心肌细胞或内皮细胞受到损伤，特异性microRNA可由受刺激的细胞释放至血液循环中而被检测到，是潜在的新型诊断标志物［7-9］。有研究发现在胸痛后早期肌酸磷酸肌酶和肌钙蛋白T还未升高时，血清miR-1 RNA和miR-133a RNA就已经升高［10］。另有研究对急性冠脉综合征病人血浆心肌相关性microRNAs进行检测，发现心肌梗死病人血浆miR-208b RNA和miR-499-5p RNA明显高于非心肌梗死病人，ST段抬高型心肌梗死病人血浆miR-208b RNA和miR-499-5p RNA明显高于NSTEMI病人［11］。Olivieri等［12］對92例NSTEMI心肌梗死病人、81例急性心力衰竭病人和99名健康对照老年人血浆miR水平进行qRT-PCR检测，急性心肌梗死病人与健康对照组相比，血浆miR-1 RNA、miR-21 RNA、miR-133a RNA和miR-423-5p RNA水平上调3～10倍，而miR-499-5p RNA上调超过80倍，此外，在区分NSTEMI和急性充血性心力衰竭时，血浆miR-499-5p诊断的精确度高于心肌肌钙蛋白T，其可能是NSTEMI敏感的生物标志物。国内有研究表明，循环miRNA-21是急性冠脉综合征病人经皮冠状动脉介入（PCI）术后预后的独立危险因素［13］。

本研究在前期研究基础上，通过查阅大量文献，检索国内外数据库，收集、分析和研究microRNA在NSTEMI病人中的表达特点，选定4个目标microRNA（miR-133a、miR-208、miR-21及miR-1）进行测定。研究结果显示，相比对照组，观察组病人血浆miR-133a RNA、miR-208 RNA、miR-1 RNA表达水平显著上调，差异有统计学意义（P＜0.05），而观察组病人血浆miR-21 RNA与对照组相比，差异无统计学意义（P＞0.05）。结果表明，血浆miR-133a、miR-208、miR-1在血瘀型NSTEMI病人中表达水平显著升高，其可能成为预测NSTEMI病人及辅助评估心功能的潜在指标。

综上所述，在血瘀证人群的临床诊疗工作中，血浆miR-133a RNA、miR-208 RNA、miR-1 RNA检测可对NSTEMI病人进行早期的、更有针对性的诊断，从而进行快速介入治疗或药物干预，降低病人心肌梗死进一步加重的风险。血瘀证是中医基础证候之一，本研究作为一项探索性研究，检测了血瘀证NSTEMI病人的microRNA表达特点。在下一步工作中，将扩大研究的样本量，检测气滞血瘀证、气虚血瘀证、痰瘀互结证等以血瘀证为基础的复合证候NSTEMI病人的microRNA表达特点，为microRNA检测对NSTEMI病人的诊断提供更多依据。

参考文献：

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（收稿日期：2022-10-24）

（本文编辑王雅洁）