自拟参麦加味汤抑制FOXM1的表达发挥抑制气阴两虚非小细胞肺癌的临床作用分析

吴玉英,林惠琴,周艺军,刘文捷

(泉州市第一医院全科医学科,福建 泉州 362000)

近年来,非小细胞肺癌的发病率和死亡率呈现明显上升的趋势。这与多种因素密切相关。首先,不健康的生活方式如吸烟、饮食不平衡等习惯成为主要风险因素。探究治疗非小细胞肺癌的更有效方法一直是临床研究重点。研究显示,FOXM1在肿瘤发展中起促进作用。因此,抑制FOXM1对治疗非小细胞肺癌至关重要[1]。临床发现,自拟参麦加味汤对非小细胞肺癌有疗效,推测其通过抑制FOXM1表达发挥治疗作用。这对非小细胞肺癌的靶向药物治疗具有突破价值,为免疫治疗提供参考。本文通过对比试验,研究自拟参麦加味汤抑制FOXM1表达与非小细胞肺癌的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

2021年8 月至 2022年 8 月在我科住院的52例非小细胞肺癌患者作为本次试验研究对象,采用随机平均分组法分为观察组和对照组,各有26例,统计得出观察组中男14例,女12例,年龄为58～80岁,平均年龄(69.02±4.13)岁;对照组病患中男13例,女13例,年龄为56～81岁,平均年龄(69.16±4.61)岁。纳入标准:①年龄>55岁;②经病理组织学检查确诊的非鳞非小细胞肺癌患者,病理组织学类型参照2015年版WHO肺肿瘤组织学四期分型标准[2-3];③ECOG评分0～2分;④预估生存期大于3个月以上;排除标准:①具备肺结核典型影像学表现,但缺乏病理学金标准依据;②合并其他恶性肿瘤;③合并艾滋病、巨细胞病毒和乙肝病毒感染;④合并自身免疫性疾病;⑤12月内曾接受过放化疗及细胞免疫治疗;⑥依从性差。

1.2 方法

1.2.1 常规治疗

首先对老年肺癌患者给予常规的西药和化疗治疗,化疗药物选择培美曲塞二钠+注射用卡铂,给药方法:在治疗的第一天给药培美曲塞二钠500mg/m2(四川汇宇制药股份有限公司),将培美曲塞二钠采用0.9%的氯化钠注射液稀释到100mL,静脉滴注给药。注射用卡铂(齐鲁制药有限公司)AUC=5与5%葡萄糖注射液混合,静脉滴注。

1.2.2 自拟参麦加味汤治疗的方法

老年肺癌患者治疗方法:在常规治疗的基础上给予患者自拟参麦加味汤治疗。以7天为一个疗程,观察2～3个疗程。治疗期间观察和记录患者的体征变化以及临床上的表现,及时对患者进行呼吸道检查,胸片的拍摄,观察患者呼吸道改善的情况。通过体外培养并取处于对数生长期的A549细胞用于实验,肺癌气阴两虚证患者在生脉饮的基础上自拟参麦加味汤,主要的处方药有:人参15g、麦冬15g,五味子10g;辨证加减痰浊甚者加干姜、细辛温肺化饮,咳嗽甚加紫苑蜜百部润肺止咳气喘甚者加杏仁、厚朴降气平喘;气喘欲脱者加白芍、诃子肉、蛤壳纳气平喘。将药材取水煎煮,取400mL的汁水,给予患者早晚两次服下。

自拟参麦加味汤治疗以7天为一个疗程,培美曲塞联合卡铂治疗为21天一个疗程,两组患者均治疗3个疗程。治疗期间严密监测患者,观察和记录患者的体征变化以及临床上的表现,观察患者呼吸道改善的情况。

1.2.3 调控FOXM1基因及蛋白的表达对非小细胞肺癌治疗方法

运用Annexin-V-FITC/PI双染法检测自拟参麦加味汤对人非小细胞肺癌FOXM1的表达水平作用;采用逆转-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测各组细胞中FOXM1相关基因的表达;采用Westernblot方法检测FOXM1的表达水平相关蛋白表达水平的变化。

1.3 观察指标

1.3.1 疗效分析

完全缓解(CR):所有目标病灶消失,并且非目标病灶消失或肿瘤标志物恢复正常。部分缓解(PR):目标病灶最长径之和与基线状态相比至少减少30%,并且非目标病灶未发生明显进展或肿瘤标志物稳定。病变进展(PD):目标病灶最长径之和与治疗开始之后所记录到的最小目标病灶最长径之和相比增加20%,或者出现一个以上新病灶,同时非目标病灶可能持续存在或出现进展。病变稳定(SD):介于部分缓解和疾病进展之间,目标病灶未满足部分缓解的定义,但也未达到疾病进展的标准。非目标病灶可能稳定或有轻微变化。总治疗有效率=(CR+PR)/总例数×100%,对患者的呼吸道症状的改善情况进行观察和记录,对这52例病患的调查结果,并进行汇总,制成表格。

1.3.2 FOXM1的组织表达水平对比

FOXM1的表达水平的测定使用组织,做完治疗有CR的取组织工作运用活检针从患者身体特定部位取下一小块组织进行病理学检查。在某些情况下,可能需要进行切除手术来获取更大的组织样本,采用标准的组织学方法,如固定、切片和染色等,用于进一步的检测和研究。选择手术切除或者穿刺取样的方式采集组织样本。在手术过程中或穿刺过程中,采用盐酸普鲁卡因或盐酸利多卡因进行局麻,并采用梭形切口,并确保与皮肤纹理垂直下刀,用于进一步的检测和研究。统计两组患者治疗前后FOXM1的表达水平。比较不同样本或实验组之间FOXM1基因的相对表达水平。这可以通过实时定量聚合酶链反应(qPCR)或基因芯片等技术来进行。通过比较对照组和观察组中FOXM1蛋白的表达水平,判断其高低表达状态。通过统计分析,以7.0%作为cut-off值,以区分FOXM1的高低表达状态,并且与其他临床、生物学或分子特征具有关联性。

1.3.3 对比两组患者外周血T淋巴细胞水平情况以及患者外周血T淋巴细胞水平情况

(1) 收集两组研究对象的外周空腹静脉血,约6mL。使用EDTA作为抗凝剂,以1∶1的比例与PBS(磷酸盐缓冲盐水)混合后,将其轻轻加入同体积的淋巴细胞分离液的上层。然后,进行2000g的离心过程,持续20min,使淋巴细胞沉淀到中层。接下来,使用巴氏管轻柔地吸取中层淋巴细胞层,然后用PBS清洗3次,以去除离心过程中的杂质。在洗涤完毕后,向淋巴细胞中加入CD45、CD71和TER119的流式细胞学抗体。将试管放置于避光的室温摇床上,孵育20min,让抗体与细胞充分结合。之后,再次使用PBS进行三次清洗,以去除未结合的抗体。为了检测CD45+红系祖细胞的存在,采用流式细胞检测仪进行分析。将处理后的细胞样品放入流式细胞仪中,根据设备的设置和操作指南进行相应的检测。

(2) T淋巴细胞亚群检测:在室温下,分别向已编号的试管中加入20mL的CD3、CD8、CD45、CD4抗体试剂。这些抗体试剂应来自CD3、CD8、CD45、CD4检测试剂盒,根据试剂盒的说明书来确定添加的顺序。在已做好标记的流式管管底部加入相应的抗体试剂。使用流式细胞仪对这些样品进行检测。该仪器可以根据细胞的荧光信号和特定的抗体结合情况,准确地确定T淋巴细胞亚群的存在和比例。

1.4 统计分析

2 结果

2.1 两组患者临床疗效对比

总缓解率对比,观察组92.50%高于对照组72.50%,观察组和对照组治疗有效率存在统计学差异(P<0.05)。见表1。

表1 两组患者的临床疗效对比

2.2 两组患者治疗前后FOXM1的表达水平对比

治疗前两组患者组织FOXM1的表达水平无任何高表达和低表达差异,治疗后,观察组高表达仅剩10.0%,低于对照组的50.0%,P<0.05。见表2。

表2 两组患者治疗前后FOXM1的表达水平对比

2.3 两组患者红细胞免疫功能对比

本研究结果表明,观察组患者RBC-C3bRR、RBC-ICR低于对照组,RBC-CaR高于对照组(P<0.05)。见表3。

表3 两组患者红细胞免疫功能对比

2.4 两组患者CD3、CD8、CD45、CD4 水平的情况

观察组的CD3、CD45、CD4水平均小于对照组,而观察组CD8水平高于对照组,因此观察组和对照组具有一定统计学差异(P<0.05)。见表4。

表4 两组患者CD3、CD8、CD45、CD4 水平的对比

3 讨论

非小细胞肺癌是目前临床常见疾病,在许多引起非小细胞肺癌发生的原因中,病人自身免疫功能的降低也是一种十分关键的因素。临床上证实FOXM1表达与肿瘤转移密切相关,FOXM1表达水平越高,肿瘤细胞发生转移的概率越大[3]。之前的研究报道 FOXM1在肿瘤的发生中起到重要作用[4]。然而,鲜有研究利用大量NSCLC患者组织标本研究FOXmL的表达是否可以影响肿瘤的发展、转移及预测预后等[5]。中医角度看,肺癌属于肺积、息贲范畴,气阴两虚型最常见。治疗目标是扶正祛邪、标本兼治。早期化痰软坚、利湿解毒、行气活血;晚期正虚扶正。人参为主的自拟参麦加味汤对FOXM1表达的影响受关注。本文研究此汤剂对非小细胞肺癌FOXM1表达的影响,探索其治疗效果。治疗效果观察显示,观察组患者效果优于对照组(P<0.05)。治疗后,观察组患者FOXM1高表达低于对照组,低表达比例高于对照组(P<0.05)。FOXM1表达水平与治疗效果成反比,高表达提示病情严重,低表达则提示病情稳定[5]。FOXM1在促进肿瘤生长和转移中起重要作用。自拟参麦加味汤是健脾和胃的药方,可增强抗病能力。该汤用于治疗中医肺癌辨证施治分型中的气阴两虚证,具有补益肺气、育阴养血等功效[6]。在使用自拟参麦加味汤干预后,观察组治疗效果更好,在癌症发展中可能促进癌细胞增生和转化。肿瘤细胞逃避和抵抗免疫攻击,CD8细胞过度活跃可能限制免疫细胞对癌细胞的杀伤效应[7]。本研究结果表明,比较了观察组和对照组的CD3、CD45、CD4和CD8水平。根据结果显示,观察组的CD3、CD45、CD4水平均小于对照组,而观察组的CD8水平高于对照组。这表明观察组与对照组在CD4和CD8细胞的含量上存在一定统计学差异(P<0.05)。可见非小细胞肺癌患者相较于健康患者,红细胞免疫功能异常,且自身抵抗力也更低。本研究结果表明,自拟参麦加味汤治疗后,各项指标得到改善,FOXM1表达强度可作为预测NSCLC患者预后的生物标志物,有助于筛选高转移风险患者,为非小细胞肺癌的治疗方案制定提供指导[8]。

综上所述,自拟参麦加味汤可作为非小细胞肺癌能量阻断剂,对患者FOXIM1的表达进行抑制,发挥抑制非小细胞肺癌发展的作用。