茶多酚对老龄蛋鸡生产性能、蛋品质、肝脏脂质代谢及细胞因子的影响

高赛甲 孙相俞

摘  要：为了考察茶多酚对老龄蛋鸡生产性能、蛋品质、肝脏脂质代谢及细胞因子的影响，本试验选择360羽50周龄的海兰灰蛋鸡，随机分为2组，每组9个重复，每个重复20羽（5羽/笼），分别饲喂对照日粮和基础日粮中添加500 mg/kg茶多酚后制成的试验日粮，试验为期10周。结果显示：日粮中添加500 mg/kg茶多酚对蛋鸡的生产性能、蛋品质、肝脏重量、肝脏相对重量、肝脏脂质代谢相关基因的表达及肝脏细胞因子基因的表达无显著影响（P＞0.05）；茶多酚可以显著降低肝脏甘油三酯（triglyceride，TG）的含量（P＜0.05），显著提高血浆TG含量（P＜0.05）。試验表明，日粮中添加茶多酚可通过增加肝脏中脂肪的向外转运，降低肝脏中脂肪的积累，从而降低蛋鸡肝脏的健康风险。

关键词：茶多酚；蛋品质；脂肪代谢；细胞因子；蛋鸡

中图分类号：S816.79 文献标志码：A 文章编号：1001-0769（2024）02-0078-06

鸡的肠道、肝脏、生殖系统和骨骼的健康是蛋鸡高产的保障。肝脏是蛋鸡合成和贮存脂肪的主要器官，大量脂肪在肝脏中沉积会引发脂肪肝，增加脂质氧化损伤的风险。蛋鸡，特别是老龄蛋鸡易发生氧化应激导致的产蛋率下降过快[1]以及脂肪肝等问题，给养殖企业造成不小的经济损失。人类医学和营养学的研究表明，脂肪的过度沉积会导致自由基生成增加，肝脏细胞ATP生成减少，引起细胞凋亡，而且自由基还会直接或间接诱导促炎细胞因子基因的表达，反过来促炎细胞因子会进一步诱导活性氧类（reactive oxygen species，ROS）的生成[2]。茶多酚是从绿茶叶中提取的一种天然多酚类活性物质，占茶叶的12％以上。已有不少研究考察了茶多酚对蛋鸡生产性能[3-4]、蛋品质[3-10]、抗氧化能力[4，11-12]和脂质代谢[3，10]的影响。茶多酚具有抗氧化的生物学活性，其作用机制可能是对超氧阴离子自由基、羟自由基、单线态氧及过氧化氢等的清除，从而阻止脂质自由基的传播扩散[2]。研究表明，在日粮中添加绿茶粉可以降低蛋鸡的腹脂率，下调脂肪合成相关基因[脂肪酸合酶（fatty acid synthase，FAS）、乙酰辅酶A羧化酶（acetyl CoA carboxylase，ACC）、硬脂酰辅酶A去饱和酶1（stearyl coenzyme A dehydrogenase-1，SCD1）]的表达水平，上调脂肪分解相关基因[酰基辅酶A氧化酶1（acyl coenzyme A oxidase-1，ACOX1）]的表达水平[10]。然而，何俊金等[3]发现在饲料中添加大剂量的茶多酚（666、1 333和2 666 mg/kg）虽然降低了老龄蛋鸡（65～75周龄）血浆甘油三酯（triglyceride，TG）含量，但对肝脏FAS、低密度脂蛋白受体（low-density lipoprotein receptor，LDLR）和极低密度脂蛋白受体（very low density lipoprotein recepto，VLDLR）基因的表达无显著影响。Yuan等[5，11]还发现，添加茶多酸可以缓减饲料中钒引起的氧化应激和炎症反应。由于直接参与肝脏脂肪代谢的基因较多，且现有研究结果之间存在差异，有必要进一步研究茶多酚保护蛋鸡肝脏健康的具体机制。

1  材料与方法

1.1 试验材料

茶多酚纯度≥60％，购自湖南美可达生物资源股份有限公司。

1.2 试验动物及日粮

试验动物为50～60周龄的海兰灰蛋鸡，参照蛋鸡场商品饲料的营养水平配制基础日粮。基础日粮配方及营养水平见表1。

1.3 试验设计与饲养管理

试验采用单因子完全随机试验设计。对照组蛋鸡饲喂基础日粮，试验组即茶多酚组蛋鸡喂给在基础日粮中添加500 mg/kg茶多酚（以有效成分计）后配制成的试验日粮。将360羽海兰灰蛋鸡（50周龄）随机分为2组，每组9个重复，每个重复20羽（5羽/笼），初始产蛋率基本一致。饲养管理程序按蛋鸡场相关规定进行。

1.4 生产性能指标

产蛋性能、平均蛋重、料蛋比等指标的测定参考NY/T 823—2004《家禽生产性能名词术语和度量统计方法》[13]推荐的方法进行。

1.5 蛋品质指标

试验开始和60周龄时，每个重复选择3枚鸡蛋，测定蛋壳强度、蛋重、蛋白高度、哈夫单位、蛋黄比色、蛋黄重、蛋壳重和蛋壳厚度。

1.6 样本收集

60周龄时，每个重复选择1羽体重接近群体平均值的蛋鸡，翅静脉采血5 mL，肝素钠抗凝，分离血浆，－20 ℃保存备用。采血后颈椎脱臼处死，取肝脏称重，并于肝脏左叶中部取肝脏组织保存于灭菌离心管中，液氮冷冻，于－80 ℃保存备用。

1.7 肝脏和血浆中TG含量的测定

肝脏及血浆中TG含量的测定参照万建美[14]的方法进行。

1.8 肝脏炎性细胞因子及脂质代谢基因相对表达量的测定

肝脏总RNA的提取、cDNA的合成及real-time PCR均采用大连Takara公司的试剂盒，并按使用说明书操作。基因及引物序列参考     万建美[14]推荐的方法。PCR扩增反应及定量采用Applied Biosystems 7 900 HT Real Time PCR系统进行，程序如下：95 ℃ 30 s；40个循环（95 ℃ 5 s，60 ℃ 34 s）；95 ℃ 15 s，60 ℃ 1 min，95 ℃ 15 s。采用384孔板，每个样本测定3个平行。采用2-ΔΔCt法计算基因的相对表达水平（以对照组为1），数据标准化的参照为内参基因β-ACTIN和GAPDH的Ct的几何平均数[15-16]。

1.9 数据处理

结果以“平均值±标准差”表示，数据统计分析采用SPSS Vol.22.0统计软件的一般线性模型进行，以P＜0.05作为显著性差异判断标准。

2  结果

2.1 茶多酚对蛋鸡生产性能的影响

茶多酚对蛋鸡生产性能的影响见表2。由表2可知，日粮中添加500 mg/kg的茶多酚对老龄蛋鸡的产蛋率、蛋重和料蛋比均无显著影响    （P＞0.05）。

2.2 茶多酚对蛋品质的影响

茶多酚对蛋品质的影响见表3。由表3可见，添加茶多酚对蛋品质指标无显著影响（P＞0.05）。

2.3 茶多酚对肝脏和血浆TG含量的影响

茶多酚对肝脏和血浆TG含量的影响见表4。由表4可见，日粮中添加茶多酚极显著降低了肝脏TG含量（P＜0.01），极显著增加了血浆TG含量，但对肝脏重量和肝脏相对重量无显著影响（P＞0.05）。

2.4 茶多酚对肝脏脂肪代谢相关基因及细胞因子基因表达的影响

茶多酚对肝脏脂肪代谢相关基因表达和细胞因子基因表达的影响分别见图1和图2。由图1和图2可知，日粮中添加茶多酚不会显著影响肝脏脂肪代谢相关基因的表达水平（P＞0.05），也不会显著影响肝脏中的促炎细胞因子的表达水平（P＞0.05）。

3  讨论

3.1 茶多酚对蛋鸡生产性能和蛋品质的影响

有关茶多酚对蛋鸡生产性能和蛋品质影响的研究结果并不一致。本研究的结果表明，日粮中添加茶多酚对老龄蛋鸡的生产性能（产蛋率、蛋重和料蛋比）和蛋品质（蛋壳厚度、蛋壳强度、哈夫单位和蛋黄比色）无显著影响。汪小红等[4]也发现，日粮中添加茶多酚（40、80、200或400 mg/kg）对产蛋率、料蛋比、蛋壳厚度、蛋壳强度、哈夫单位和蛋黄比色无显著影响，但是添加400 mg/kg茶多酚可显著降低蛋重，添加200 mg/kg苯多酚能够显著降低料蛋比。赖兴富等[17]通过荟萃分析发现，茶多酚对蛋鸡的使用效果受茶多酚添加量、蛋鸡周龄及所处生理状态的影响。当茶多酚的添加量在200 mg/kg左右时，产蛋率提高的结果居多，但随着添加量的进一步提高，可能会对蛋鸡生产性能产生不利影响。另外，茶多酚的添加效果还受蛋鸡的周龄、机体自由基稳态状况和脂肪代谢状况的影响。茶多酚添加量过高及蛋鸡肝脏脂肪含量并不是特别高可能是本试验中添加茶多酚对老龄蛋鸡产蛋性能无显著影响的原因。

3.2 茶多酚对蛋鸡肝脏脂质代谢及细胞因子基因表达的影响

肝脏是家禽合成和贮存脂肪的主要器官。综合前人的研究可以证实，氧化应激是造成老龄蛋鸡产蛋性能衰退[1]和肝脏健康问题的主要原因。本试验表明，日粮中添加500 mg/kg茶多酚，可显著降低老龄蛋鸡肝脏TG含量，增加血浆TG含量。卢垚[18]的研究也表明，日粮中添加                                    300 mg/kg的茶多酚可以降低蛋鸡肝脏TG含量，同时也能降低血清的TG水平。另一项研究也表明，在饲料中添加1 333或2 666 mg/kg茶多酚，可降低血清低密度脂蛋白和TG的含量，通过激活AMPK途径调节胆固醇的代谢，调节鸡蛋中胆固醇的含量[3]。在调控血清TG含量方面，本研究的结果与前人结果并不一致。在基因表达层面，有的研究发现茶多酚上调了调节脂质代谢的相关转录因子的表达水平[18]，下调了脂肪合成酶等脂肪合成相关基因的表达水平，同时上调了脂肪分解相关基因的表达水平[10]。然而，本研究却发现茶多酚对老龄蛋鸡肝脏脂肪代谢相关基因的表达水平并无显著影响，这与何俊金等[3]的研究结果是一致的。另外，由于脂肪沉积与ROS及促炎细胞因子之间存在密切的相互联系，但是未见有研究考察茶多酚对肝脏促炎细胞因子的影响。然而，本研究的结果并未发现日粮中添加茶多酚对老龄蛋鸡肝脏促炎细胞因子基因的表达有显著的影响，这可能与试验中蛋鸡并未处于明显的肝脏健康问题或氧化应激状态有一定的关系。由此看来，茶多酚对蛋鸡肝脏脂质代谢的影响可能仍是以抗氧化作用为主，对脂质合成或分解、脂肪转运的调节和肝脏炎性因子的调节因生理状态不同而存在差异。

4  结论

茶多酚可通过降低肝脏中脂肪的积累，增加肝脏中脂肪的向外转运，从而降低蛋鸡肝脏因氧化应激导致的健康风险，但对肝脏脂肪代谢和炎症状态的影响存在条件性。

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