三阴性乳腺癌组织miR-495、HMGA2 表达变化及其与临床病理特征和预后的关系

向超，李哲

1 重庆市万州区妇幼保健院乳甲外科，重庆 404100；2 陆军军医大学西南医院江北院区乳甲外科

三阴性乳腺癌（TNBC）是一种特殊类型的乳腺癌，占所有乳腺癌的10%～20%［1］，通常发生于50 岁以下女性［2］。与其他类型乳腺癌相比，TNBC 恶性程度高，易转移和复发，预后往往较差［3-5］。而尽早诊断并及时治疗对提高TNBC 患者预后至关重要［6］。微小RNA（miRNA）是一类长度为20～25 个核苷酸的非编码单链小RNA 分子，它们可通过调控靶基因的表达来参与肿瘤细胞的增殖、凋亡以及侵袭和迁移等生物学过程。miR-495 是miRNA 家族成员之一，其在胃癌、肺癌、肝癌等实体肿瘤中表达下调，发挥着类似抑癌基因的作用［7］。高迁移率族蛋白A2（HMGA2）是一种调控基因转录的结构性转录因子，也是目前研究较多的促癌基因之一，可在多种恶性肿瘤组织中高表达。有研究报道，miR-495 能够靶向HMGA2 调控肿瘤细胞的恶性生物学行为［8-9］。但目前miR-495、HMGA2 表达与TNBC 患者临床病理特征和预后的关系尚不完全清楚。鉴于此，本研究观察了TNBC 组织miR-495、HMGA2 表达变化，并探讨二者表达变化与患者临床病理特征和预后的关系。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2018 年1 月—2020 年1 月重庆市万州区妇幼保健院收治的TNBC患者83例。所有患者经术后病理检查明确乳腺癌诊断，经免疫组化检查，ER、PR、HER2均阴性，符合TNBC 诊断。纳入标准：①符合原发性TNBC 诊断标准，单侧病灶；②初诊，入院前未接受任何抗肿瘤治疗；③入院后接受乳腺癌根治术+腋窝淋巴结清扫术治疗；④年龄＞18 岁；⑤临床病理资料和术后随访资料完整。排除标准：①合并其他部位恶性肿瘤者；②既往有恶性肿瘤病史者；③男性；④妊娠期或哺乳期妇女。患者年龄32～59 岁，其中≥50 岁50 例、＜50 岁33 例；月经状态：绝经48 例，未绝经35 例；肿瘤直径：≥2 cm 40 例，＜2 cm 43 例；病理类型：浸润性导管癌69 例，其他14 例；组织分化程度：中高分化41 例，低分化42 例；临床分期：Ⅰ期45 例，Ⅱ期38 例；有淋巴结转移30例，无淋巴结转移53例。本研究经重庆市万州区妇幼保健院医学伦理委员会批准（审批编号：20170915），所有研究对象或其家属知情同意并签署书面知情同意书。

1.2 miR-495、HMGA2 mRNA 表达检测 采用RT-qPCR法。将术中切除的乳腺癌组织及其配对的癌旁组织（距肿瘤组织边缘超过2 cm 并经术后病理检查证实为正常乳腺组织），液氮下速冻，迅速转移至研钵中研磨成粉末。采用TRIzol 法提取组织总RNA，经超微量紫外可见分光光度计鉴定，OD260/OD280为1.8～2.1。按PrimeScriptTMRT Master Mix 说明将总RNA 逆转录合成为cDNA，逆转录条件：42 ℃15 min、85 ℃ 5 s。以cDNA 为模板，按Green®PrimeScriptTMRT-PCR Kit 说明进行PCR 扩增。引物序列由广州锐博生物技术有限公司设计合成。引物序列：miR-495 上游引物5'-GCGAAACAAACATGGTGC-3'、下游引物5'-GCAGGGTCCGAGGTATTC-3'，内参U6 上游引物5'-CTCGCTTCGGCAGCACA-3'、下游引物5'-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3'；HMGA2 上游引物5'-GCCAAGAGGCAGACCTAGGAAA-3'、下游引物5'-CATGGCAATACAGAATAAGTGGTCA-3'，内参GAPDH 上游引物5'-TGTTCGTCATGGGTGTGAAC-3'、下游引物5'-ATGGCATGGACTGTGGTCAT-3'。反应体系共25 µL：cDNA 模板2 µL，上下游引物各1 µL，2 × One Step TB Green RT-PCR Buffer Ⅲ 12.5 µL，ddH2O 8.5 µL。所有操作在Applied Biosystems 7500 型荧光定量PCR 仪上完成。PCR扩增反应结束，绘制熔解曲线，收集循环阈值（CT）数。以U6 或GAPDH 为内参，采用2-ΔΔCT法计算目的基因相对表达量。

1.3 随访 TNBC 患者出院后通过电话或门诊复查形式定期随访，随访截至2023年1月，统计患者生存情况，计算患者3年累积生存率。

1.4 统计学方法 采用SPSS22.0 统计软件。符合正态分布的计量资料以±s表示，结果比较采用独立样本t检验。计数资料比较采用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 乳腺癌组织与癌旁正常组织miR-495、HMGA2 mRNA表达比较 见表1。

表1 乳腺癌组织与癌旁正常组织miR-495、HMGA2 mRNA相对表达量比较（± s）

表1 乳腺癌组织与癌旁正常组织miR-495、HMGA2 mRNA相对表达量比较（± s）

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2.2 乳腺癌组织miR-495 表达与HMGA2 mRNA 表达的关系 乳腺癌组织miR-495 相对表达量与HMGA2 mRNA 相对表达量呈负相关关系（r=-0.503，P＜0.01）。

2.3 乳腺癌组织miR-495、HMGA2 mRNA 表达与临床病理特征的关系 见表2。

表2 乳腺癌组织miR-495、HMGA2 mRNA表达与临床病理特征的关系

2.4 乳腺癌组织miR-495、HMGA2 mRNA 表达与患者预后的关系 随访截至2023年1月，其间死亡17例，TNBC患者术后3年存活率为79.52%（66/83）。以乳腺癌组织miR-495、HMGA2 mRNA 相对表达量的均值为临界值，将患者分为miR-495 高表达者44 例与低表达者39 例，HMGA2 mRNA 高表达者38 例与低表达者45例。生存分析发现，miR-495低表达者与高表达者术后3年累积生存率分别为69.2%、88.6%，miR-495低表达者术后3年累积生存率低于其高表达者（Log-rankχ2=4.780，P＜0.05）；HMGA2 mRNA低表达者与高表达者术后3年累积生存率分别为91.1%、65.8%，HMGA2 mRNA 低表达者术后3 年累积生存率高于其高表达者（Log-rankχ2=8.111，P＜0.05）。

3 讨论

TNBC 是一种特殊类型的乳腺癌，占所有乳腺癌的10%～20%［1］。与其他类型乳腺癌相比，TNBC恶性程度高，早期易侵犯淋巴结和肝、肺、骨等组织或器官［10］，并且无特效治疗药物，治疗后易复发，预后往往较差［3-5］。而尽早发现并采取有效治疗可明显改善预后［11］。目前，TNBC 的确切发病机制尚不完全清楚。因此，深入研究TNBC 发病的分子机制，对其早期诊断和靶向治疗具有重要意义。

miRNA 是一类长度为20～25 个核苷酸的非编码单链小RNA 分子，它们可通过调控靶基因的表达来参与肿瘤细胞的增殖、凋亡以及侵袭和迁移等生物学过程。miR-495 是miRNA 家族成员之一，其在胃癌、肺癌、肝癌等实体肿瘤中表达下调，发挥着类似抑癌基因的作用［7］。HMGA2是一种非组蛋白染色体蛋白，能够通过改变DNA 的结构来调控某些基因的转录与表达。HMGA2 是目前研究较多的促癌基因之一，可在多种恶性肿瘤组织中高表达。在乳腺癌组织中HMGA2过表达与肿瘤侵袭、转移和患者预后不良密切相关。有研究报道，miR-495可能通过直接或间接方式调控HMGA2表达，从而影响肿瘤细胞的恶性生物学行为［8-9］。这种复杂的调控关系使得miR-495、HMGA2成为TNBC潜在的生物标志物和治疗靶点。因此，深入探索二者功能及其相互作用将有助于更好地了解TNBC 发病的分子机制并制定更有效的治疗策略。本研究结果发现，乳腺癌组织miR-495 相对表达量低于癌旁正常组织，HMGA2 mRNA 相对表达量高于癌旁正常组织。结果表明，miR-495、HMGA2 可能参与TNBC 的发生、发展。有研究发现，miR-495 可通过靶向HMGA2 调控肿瘤进程［8-9］。miR-495 表达下调会导致HMGA2 过表达，而HMGA2过表达则可促进肿瘤细胞的增殖、侵袭和迁移，从而促进肿瘤的发生、发展［12-13］。此外，miR-495还可通过调节其他转录因子和抑癌基因的表达，参与肿瘤的发生、发展。

miR-495、HMGA2 均可通过调控与肿瘤生长和转移相关的基因或信号通路来促进TNBC 进展。二者可能通过调控肿瘤细胞的增殖、侵袭、迁移以及血管生成等生物学过程，从而参与肿瘤的发生、发展。本研究结果显示，miR-495、HMGA2表达变化与TNBC侵袭和转移等临床病理特征有关。miR-495 表达下调可导致HMGA2 过表达，而HMGA2 过表达则可促进肿瘤细胞的增殖、侵袭和迁移。本研究结果还发现，乳腺癌组织miR-495 相对表达量与HMGA2 mRNA 相对表达量呈负相关关系，提示miR-495、HMGA2 能够负协同参与TNBC 的发生、发展。究其原因，miR-495 能够靶向HMGA2 并抑制其表达，从而调控多个相关信号通路蛋白表达，继而影响TNBC的发生、发展。本研究结果发现，miR-495低表达者术后3 年累积生存率低于其高表达者，HMGA2 mRNA 低表达者术后3 年累积生存率高于其高表达者。结果提示，miR-495、HMGA2 表达变化与TNBC患者预后不良有关。HMGA2是一个与细胞增殖、侵袭和迁移相关的基因，其高表达可促进TNBC 进展。miR-495 可直接靶向HMGA2 而促进其降解或抑制其翻译，从而发挥负性调控作用。当miR-495 低表达时，其对HMGA2 的抑制作用减弱，导致HMGA2 mRNA 表达上调，从而增强肿瘤细胞的增殖、侵袭和迁移并有助于其免疫逃逸。因此，miR-495 低表达、HMGA2高表达预示着患者预后相对较差［14-15］。

综上所述，TNBC 组织miR-495 低表达、HMGA2高表达，二者表达变化与肿瘤直径、临床分期、淋巴结转移等临床病理特征以及患者预后密切相关。