肿瘤标志物血清miR-429、CEA、AFF3、CA199联合诊断胰腺癌的价值

刘永生

（内蒙古自治区精神卫生中心检验科，内蒙古 呼和浩特，010010）

胰腺癌在全球范围内的发病率在所有恶性肿瘤中的位置虽然不在前列，但是病死率一直居高不下，严重影响患者的身心健康。胰腺癌发病早期无典型症状，早期诊断率比较低，往往错过最佳诊治阶段[1]。同时由于肿瘤灶体积、范围等还较小，难以通过影像学与临床症状进行确认[2]。研究表明，除基础疾病、职业暴露、年龄、性别、遗传因素，生活行为也是胰腺癌的重要危险因素之一，与胰腺癌的发病率有关[3]。尽管手术切除、化学疗法和放射疗法在胰腺癌的治疗中应用较广泛，但是由于肿瘤频繁的复发和转移，其总体的治疗效果有限，为此进行早期诊断具有重要价值[4-5]。肿瘤标志物是临床诊疗恶性肿瘤的重要参考，也是胰腺癌诊疗的重要实验室指标[6]。癌胚抗原（CEA）、糖类抗原199（CA199）是由胎儿、胎盘、消化道、支气管黏膜等产生的糖蛋白。正常人中血清癌胚抗原与糖类抗原199的含量很低，但是在炎症性疾病、肿瘤患者的血清中呈现高表达状况，尤其是在恶性肿瘤患者中的含量非常高。AFF3的全名为AF4/FMR2 家族成员3，具有调节DNA转录等作用，对于一些肿瘤定位的判断具有重要价值[7]。miRNAs是当前研究的重点，miRNAs是真核生物中不具有编码功能的小分子物质，主要发挥表观遗传学的功能[8]。miR-429与胰腺癌症患者的转移状态高度相关，由此推测miR-429在胰腺癌的增殖、侵袭转移中也应该发挥着重要的生物学功能[9]。本文具体探讨与分析了肿瘤标志物血清miR-429、CEA、AFF3、CA199联合诊断胰腺癌的价值，以促进胰腺癌的早期检出，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018年8月—2022年12月内蒙古自治区精神卫生中心接受检验的105例胰腺癌患者作为胰腺癌组，同期选取在内蒙古自治区精神卫生中心接受检验的105例胰腺良性结节作为良性组。在胰腺癌组中，平均肿瘤最大直径（4.10±0.21）cm；病理类型：鳞癌80例，腺癌25例；淋巴结转移35例；组织学分化：高分化35例，低分化25例，中分化45例；临床分期：Ⅰ期55例，Ⅱ期35例，Ⅲ期15例。胰腺癌组与良性组患者的一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性，见表1。本研究经内蒙古自治区精神卫生中心医学伦理委员会批准。患者知情同意本研究并签署知情同意书。

表1 胰腺癌组与良性组一般资料比较 [（）/n（%）]

表1 胰腺癌组与良性组一般资料比较 [（）/n（%）]

注：1 mm Hg≈0.133 kPa。

组别例数（n）性别年龄（岁）空腹血糖（mmol/L）男女身体质量指数（kg/m2）收缩压（mm Hg）心率（次/min）舒张压（mm Hg）胰腺癌组10555（52.38）50（47.62）58.21±4.5522.82±2.86123.11±12.3882.47±5.6975.38±5.675.69±0.21良性组10554（51.43）51（48.57）58.58±4.5722.19±3.19123.87±11.2782.76±6.3575.20±4.695.62±0.66 t/χ20.0190.5881.5070.4650.3490.2511.036 P 0.8900.5570.1330.6420.7290.8020.132

1.2 纳入与排除标准

纳入标准：①年龄在30～70岁；②胰腺癌组符合胰腺癌的病理学诊断标准[2]；③良性组病理诊断为胰腺结节良性；④临床、病理资料完整。

排除标准：①合并严重心脑血管疾病的患者；②伴有基因疾病的患者；③合并肝组织、肾组织等器官疾病的患者；④合并严重自身免疫系统疾病患者；⑤合并有血液系统疾病的患者；⑥合并其他恶性肿瘤的患者；⑦妊娠与哺乳期妇女；⑧合并有遗传代谢性疾病的患者。

1.3 血清miR-429、CEA、AFF3、CA199检测

清晨抽取胰腺癌组与良性组患者的空腹外周静脉血4 mL，静置20 min后，采用离心机在4 ℃ 离心后（3 000 r/min离心10 min），取上层血清，采用酶联免疫法检测血清CEA、AFF3、CA199含量，分别由上海西唐生物科技有限公司、上海酶联公司、大连TAKARA公司提供试剂盒（批号分别为20838114、20448914、34149821），按照说明书操作。

1.4 观察指标

（1）调查胰腺癌组与良性组患者的性别、年龄、身体质量指数、收缩压、心率、舒张压、空腹血糖。（2）重点调查胰腺癌组患者的临床病理特征，包括病理类型、组织学分化、临床分期、淋巴结转移等。（3）CEA正常参考范围0.0～10.0 ng/mL，AFF3参考范围0.0～40.0 μg/L，CA199参考范围0.0～50.0 U/mL。同时，提取血清的DNA，采用荧光定量PCR方法检测血清miR-429相对表达水平，阳性标准为miR-429相对表达水平为健康人群的3倍及以上。联合检测阳性的判断标准：血清miR-429、CEA、AFF3、CA199任一一项判断为阳性。

1.5 统计学分析

以EXCEL 2022整理数据，采用SPSS 22.00统计学软件进行数据分析。符合正态分布的计量资料以（）表示，采用t检验；计数数据以[n（%）]表示，采用χ2检验；相关性分析采用Pearson相关分析，诊断价值分析采用受试者操作特征（ROC）曲线分析，0.5＜ROC曲线下面积（AUC）≤0.7有较低准确性，在0.7＜AUC≤0.9有一定准确性，0.9＜AUC＜1.0有较高准确性。数据一致性分析采用Kappa检验，Kappa值越大，表示一致性越好，Kappa≤0.2为差，0.2＜Kappa≤0.4为一般，0.4＜Kappa≤0.6为中等，0.6＜Kappa≤0.8为好，Kappa＞0.8为非常好，检验水准为α=0.05。

2 结果

2.1 血清miR-429、CEA、AFF3、CA199表达水平比较

胰腺癌组的血清CEA、AFF3、CA199含量显著高于良性组，差异有统计学意义（P＜0.05），血清miR-429相对表达水平与良性组相比也显著增加，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 胰腺癌组与良性组血清miR-429、CEA、AFF3、CA199表达水平比较 （）

表2 胰腺癌组与良性组血清miR-429、CEA、AFF3、CA199表达水平比较 （）

注：CEA，癌胚抗原；CA199，糖类抗原199。

组别例数CA199（U/mL）CEA（ng/mL）AFF3（μg/L）miR-429胰腺癌组10590.43±4.1163.44±4.03 89.47±13.586.77±0.26良性组10528.66±2.43 3.79±0.3425.36±3.351.98±0.17 t 132.566151.133 46.967158.003 P＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001

2.2 血清miR-429、CEA、AFF3、CA199表达阳性率比较

胰腺癌组的血清miR-429、CEA、AFF3、CA199表达阳性率为74.29%、80.00%、84.76%、90.48%，显著高于良性组的4.76%、5.71%、3.81%、6.67%，差异有统计学意义（P＜0.05）,见表3。

表3 胰腺癌组与良性组血清miR-429、CEA、AFF3、CA199表达阳性率比较 [n（%）]

2.3 相关性分析

在胰腺癌210例患者中，Pearson相关分析显示血清miR-429、CEA、AFF3、CA199表达水平与组织学分化、临床分期、淋巴结转移等存在相关性（P＜0.05），见表4。

表4 胰腺癌患者血清miR-429、CEA、AFF3、CA199表达水平与病理特征的相关性 （n=105）

2.4 联合诊断价值

在胰腺癌组与良性组210例患者中，肿瘤标志物血清miR-429、CEA、AFF3、CA199判断为胰腺癌104例，肿瘤标志物血清miR-429、CEA、AFF3、CA199鉴别诊断胰腺癌的敏感度与特异度分别为98.10%（103/105）、99.05%（104/105），阳性预测值为99.04%（103/104），阴性预测值为98.11%（104/106），Kappa检验分析联合诊断的一致性为0.874，ROC分析显示肿瘤标志物血清miR-429、CEA、AFF3、CA199联合诊断胰腺癌的最大曲线下面积为0.920，具体情况见表5与图1。

图1 肿瘤标志物血清miR-429、CEA、AFF3、CA199联合诊断胰腺癌的曲线下面积

表5 肿瘤标志物血清miR-429、CEA、AFF3、CA199联合诊断胰腺癌的敏感度与特异度 （n=210）

3 讨论

3.1 胰腺癌患者多伴有血清miR-429、CEA、AFF3、CA199的高表达

胰腺癌的病死率一直比较高，胰腺癌的发病风险与一些遗传和环境因素有关，手术、放疗和化疗是目前胰腺癌患者的主要治疗方法。胰腺癌患者的5年生存率很低，因为复发的风险很高[10]。此外，促进胰腺癌的发生、发展的遗传机制目前还没有得到很好的理解[11]。因此，迫切需要寻找新的胰腺癌早期诊断的生物学标志物。肿瘤标志物的血清学检测具有动态性、方便性、快速性、简便性、非介入性等优势，能对肿瘤的早期诊断及鉴别做出判断[12]。本研究显示胰腺癌组的血清CEA、AFF3、CA199含量显著高于对照组（P＜0.05），血清miR-429相对表达水平与对照组相比也显著增加（P＜0.05）；胰腺癌组的血清miR-429、CEA、AFF3、CA199表达阳性率为74.29%、80.00%、84.76%、90.48%，显著高于对照组的4.76%、5.71%、3.81%、6.67%（P＜0.05），表明胰腺癌多伴有血清miR-429、CEA、AFF3、CA199的高表达。从机制上分析，CEA是很早开始应用于恶性肿瘤鉴别诊断的标志物之一，在胰腺癌患者中的应用也比较高，是存在于恶性肿瘤组织中的一种基因编码于19号染色体上胎儿性糖蛋白[13]。CA199是一种哺乳动物组织中普遍存在的糖蛋白，可作为胰腺癌特异性较强的肿瘤标志物[14]。AFF3属于高度保守的核转录因子laf4/mllt2基因家族，在多种肿瘤的发生与淋巴系统发育中发挥重要作用。miRNA抑制肿瘤相关基因的转录，通过与靶基因mRNA的3'-UTR区碱基位点特异性配对引起靶基因mRNA的降解或翻译抑制，从转录后水平调控靶基因的表达。miR-429也是多种恶性肿瘤的生物标志物，在恶性肿瘤中表达上调与不良预后明显呈正相关[15]。

3.2 肿瘤标志物血清miR-429、CEA、AFF3、CA199联合诊断胰腺癌具有很高的价值，与患者的病理特征存在相关性

肿瘤标志物是当前诊断癌症的有效标志物，CA199是多种肿瘤的重要特异性标志物。CA199是一种糖链抗原，含有大量的糖基，在多种恶性肿瘤中的含量明显升高[16]。AFF3广泛存在于在人类的生殖系统上皮细胞、上呼吸道黏膜细胞、肾远曲小管细胞中，当机体发生恶性肿瘤，AFF3可显著表达上升。在所有类型的恶性癌症肿瘤中，miRNAs都被发现在机体内表达调控失调，发挥致癌或肿瘤抑制功能[17-18]。目前大量研究分析表明，机体内多种癌症肿瘤细胞的增殖、发生发展进程及患者预后生存率等均与microRNA密切相关[19-20]。本研究显示，在胰腺癌210例患者中，Pearson相关分析显示血清miR-429、CEA、AFF3、CA199表达水平与组织学分化、临床分期、淋巴结转移等存在相关性（P＜0.05）；依据肿瘤标志物血清miR-429、CEA、AFF3、CA199判断为胰腺癌104例，肿瘤标志物血清miR-429、CEA、AFF3、CA199鉴别诊断胰腺癌的敏感度与特异度分别为98.10%（103/105）、99.05%（104/105），阳性预测值为99.04%（103/104），阴性预测值为98.11%（104/106），Kappa检验分析联合诊断的一致性为0.874，ROC分析显示肿瘤标志物血清miR-429、CEA、AFF3、CA199联合诊断胰腺癌的最大曲线下面积为0.920，表明肿瘤标志物血清miR-429、CEA、AFF3、CA199联合诊断胰腺癌具有很高的价值。由于经费问题与一定的伦理问题，本次研究没有纳入健康人群进行分析，调查人数过少，分析的指标比较少，没有进行单一指标的诊断学分析，也没有进行影像学判断分析，结果存在一定的偏倚，将在后续研究中增加样本和分组，深入探讨血清miR-429、CEA、AFF3、CA199在胰腺癌的诊断价值。

综上所述，胰腺癌多伴随有血清miR-429、CEA、AFF3、CA199的高表达，与患者的病理特征存在相关性，肿瘤标志物血清miR-429、CEA、AFF3、CA199联合诊断胰腺癌具有很高的敏感度与特异度。