重症脑梗死患者血清中miR-206和miR-210的表达变化及临床意义

郭发瑞,郭 囡,兀瑞俭,柴晓波,刘世福

(黄河三门峡医院 重症医学科,河南 三门峡472000)

急性脑梗死(ACI)是一种常见的临床疾病,近年来重症ACI的发病率急剧增加,约占所有脑血管疾病的80%[1]。由于神经元的不可再生性质,重症ACI具有非常高的致残率,给家庭带来了沉重的负担[2]。因此,早期诊断重症ACI,恢复脑组织血液供应减缓脑损伤非常重要。miRNA可以通过减少巨噬细胞中的脂质形成来减少泡沫细胞的形成,还可以通过影响炎症因子的产生来调节动脉粥样硬化。研究显示,动脉粥样硬化组织样本中miR-206的表达降低[3-4]。与正常对照组相比,ACI患者血清中miR-210的表达显着增加[5],循环miR-210具有作为ACI早期诊断新型生物标志物的潜力[6]。目前,影像技术主要用于ACI患者的诊断和治疗,扫描成像需要很长时间,患者在检测过程中长时间保持相同的姿势,活动会造成运动伪影,从而给ACI疾病的诊断和治疗带来的影响[7]。本研究通过探究miR-206和miR-210在重症ACI患者血清中的水平变化,旨在探讨二者在重症ACI中的临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2021年6月至2022年6月在黄河三门峡医院收治的重症ACI患者96例为重症ACI组,男性56例,女性40例,年龄在30～65岁之间,平均年龄为(45.00±5.32)岁,体质指数(BMI)为(22.46±3.41)kg/m2。同期收集在医院治疗的轻型ACI患者90例为轻型ACI组,男性50例,女性40例,年龄在28～68岁之间,平均年龄为(45.50±5.64)岁,BMI为(22.57±3.57)kg/m2。选择同期在医院体检健康的志愿者94例为对照组,男性52例,女性42例,年龄在31～65岁,平均年龄为(46.00±5.54)岁,BMI为(22.48±3.73)kg/m2。三组一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)。纳入标准:(1)符合《中国急性缺血性脑卒中诊治指南2014》有关重症脑梗死的诊断标准[8]。(2)均为首次发病的患者且发病时间≤24 h。排除标准:(1)患有恶性肿瘤的患者;(2)患有传染性疾病的患者;(3)处于妊娠期或者哺乳期的患者;(4)患有免疫性疾病的患者;(5)肝脏、肾脏功能障碍的患者;(6)无法正常交流的患者。本研究已通过本院伦理委员会审核批准,患者及其家属对本研究均知情并自愿签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1脑梗死体积计算 对所有患者入院时进行头颅CT检测,计算脑梗死体积,脑梗死体积=长×宽×CT阳性层数×层厚×1/2。

1.2.2美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分 对所有患者入院时进行NIHSS评分统计[9]。

1.2.3miR-206和miR-210的表达水平测定 抽取所有患者入院当天就诊和对照组体检当天清晨静脉血10 mL,静置20 min,以4 500 rpm/min离心15 min,离心半径为10 cm。收集上清液放置于-20℃冰箱内待用。使用TRIzol试剂(赛默飞世尔科技公司)提取总RNA,然后将总RNA逆转录合成cDNA(上海研卉生物科技有限公司)。qRT-PCR检测miR-206和miR-210的相对表达水平(U6作为内参),引物由南京擎科生物科技有限公司合成,见表1,采用2-ΔΔCt算法计算miR-206和miR-210表达水平。

表1 qRT-PCR引物序列

2 结果

2.1 一般资料比较

与轻型ACI组相比,重症ACI组NIHSS评分、脑梗死体积显著升高(P<0.05)。3组性别、年龄、BMI比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 一般资料比较

2.2 三组miR-206和miR-210的表达水平比较

重症ACI组miR-206的表达水平显著低于轻型ACI组及对照组,轻型ACI组显著低于对照组;重症ACI组miR-210的表达水平显著高于轻型ACI组及对照组,轻型ACI组显著高于对照组(P<0.05)。见表3。

表3 三组miR-206和miR-210的表达水平比较

2.3 miR-206和miR-210相关性分析

相关性分析显示,重症ACI患者血清中miR-206和miR-210表达水平呈负相关关系(r=-0.366,P<0.001)。见图1所示。

图1 miR-206和miR-210相关性分析

2.4 ROC曲线分析血清miR-206和miR-210对重症ACI的诊断价值

ROC曲线显示,miR-206和miR-210诊断重症ACI发生的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.841(95%CI:0.782～0.900)和0.892(95%CI:0.874～0.950),截断值分别为0.826和1.325,敏感度分别为75.00%和81.25%,特异性分别为80.00%和77.78%。两者联合诊断重症ACI的AUC为0.946(95%CI:0.917～0.975),其敏感度、特异性分别为89.58%和66.67%,其中二者联合诊断的AUC高于miR-206和miR-210单独诊断的AUC值(Z=21.203,P<0.001;Z=35.634,P<0.001),见表4、图2。

图2 ROC曲线分析血清miR-206和miR-210对重症ACI的诊断价值

表4 血清miR-206和miR-210对重症ACI的诊断效能

2.5 影响重症ACI发生的Logistic多因素回归分析

将重症ACI是否发生作为因变量,将NIHSS评分、脑梗死体积、miR-206和miR-210表达水平作为自变量纳入Logistic回归分析。分析结果显示,NIHSS评分、脑梗死体积、miR-206和miR-210表达是重症ACI发生的影响因素(P<0.05)。见表5。

表5 影响重症ACI发生的Logistic多因素回归分析

3 讨论

重症ACI是一种由大脑血液供应受阻引起的脑损伤,患者通常突然发作,会在短时间内出现症状,其高致残率严重影响了患者的生活质量[10]。在大多数状况下,重症ACI的发病突然,脑梗进展迅速,如果没有早期诊断并给予及时的治疗,患者会错过最佳抢救时间,因此,积极寻找能够早期诊断重症ACI疾病的标志物具有重要意义。

研究表明,miRNA是神经发育和各种神经系统疾病的重要介质[11]。MiR-206具有500多个靶基因,主要参与信号传导和生物合成调控等生物过程[12]。研究发现,冠心病患者的内皮祖细胞和血浆中miR-206低表达,心脏病患者循环血液中miR-206表达降低,这与肺动脉收缩压升高相关[13-14]。血管平滑肌细胞参与斑块稳定和血管重塑,在动脉粥样硬化的形成中起重要作用,miR-206的降低会降低平滑肌细胞的相对存活率[15]。此外,miR-206在糖尿病和高脂血症大鼠的肾动脉组织中表达降低[16]。本次研究中,重症ACI组miR-206的表达水平显著低于轻型ACI组及对照组,轻型ACI组显著低于对照组,表明miR-206的表达水平在一定程度上能够反映ACI患者的病情发生过程,miR-206表达水平能够反映神经系统疾病的发展。Logistic回归分析显示,miR-206表达是重症ACI发生的影响因素,提示miR-206可能参与重症ACI的整个病理过程,对重症ACI是否发生的判断有一定的临床意义。

miR-210是一种缺氧诱导的miRNA,在脑缺血中起多种作用[17]。目前发现用miR-210抑制剂预处理显著减轻缺氧缺血诱导的脑梗死面积大小,表明miR-210在脑损伤的病理生理学中具有重要意义[18]。研究表明,miR-210的上调诱导促凋亡基因半胱天冬酶3表达并增加内皮细胞凋亡[19]。缺血性卒中和缺氧大脑或培养的神经细胞中miR-210水平急剧升高[20]。本次研究中,重症ACI组miR-210的表达水平显著高于轻型ACI组及对照组,轻型ACI组显著高于对照组,表明miR-210参与重症ACI的发生发展过程,miR-210的表达水平与脑梗死大小有关。Logistic回归分析显示,miR-210表达是重症ACI发生的影响因素,提示miR-210在脑损伤中发挥重要作用。 相关性分析显示,重症ACI患者血清中miR-206和miR-210表达水平呈负相关关系,表明二者共同参与重症ACI的病情变化。二者联合诊断重症ACI的AUC高于miR-206和miR-210单独诊断的AUC值,二者联合诊断ACI发生的敏感度高于单一指标,表明监测miR-206和miR-210的表达水平有助于重症ACI的早期诊断。

综上所述,重症ACI患者血清中miR-206呈低表达,miR-210呈高表达,二者可以作为监测病情严重程度的指标,有潜力成为诊断重症ACI的生物标志物,具有重要的临床价值。但本次研究纳入样本数量较少,后续需要加大样本量更深一步进行研究。