超高效液相色谱串联质谱法测定鸡蛋中金刚烷胺和氟虫腈的含量

◎ 刘 璐，毛 震，崔倩倩，朱欣欣，贾松涛，赵林萍

（河南中标检测服务有限公司，河南 郑州 450001)

金刚烷胺是一种廉价、高效的抗病毒药物，曾用于禽流感的防治，但是过量使用金刚烷胺会对环境和人体产生严重危害[1]。氟虫腈是一种广谱杀虫剂，曾在国内被广泛使用，但氟虫腈会通过生物链富集最终对人体健康产生威胁[2]。金刚烷胺和氟虫腈的常用检测方法有液相色谱法、液相色谱串联质谱法、酶联免疫法和免疫层析法等[2-3]。本文采用超高效液相色谱串联质谱法检测鸡蛋中的金刚烷胺和氟虫腈的含量，研究出同时提取鸡蛋中金刚烷胺和氟虫腈的前处理方法。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

1.1.1 样品

鸡蛋，绞碎并均质，-18 ℃保存。

1.1.2 试剂

乙腈（色谱级）、氯化钠（分析纯）、无水硫酸钠（分析纯）、金刚烷胺标准物质（Dr.Ehrenstorfer GmbH）、金刚烷胺-D6（上海安谱璀世标准技术服务有限公司）和4 种氟虫腈及其代谢物混标溶液（100 μg·mL-1，Fint Standard）。

1.1.3 仪器

TSQ vanquish 超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱仪：配有电喷雾离子源；天平：感量为0.01 g 和0.000 01 g；涡旋混合器；振荡器；离心机；QuEChERS净化管（COQ01002 型，深圳逗点生物科技有限公司）；0.22 μm 微孔有机相滤膜。

1.2 实验方法

1.2.1 溶液的配制

（1）金刚烷胺标准储备液（100 μg·mL-1）。精密称取10 mg 标准物质用乙腈溶解并定容至100 mL，-18 ℃保存。

（2）金刚烷胺内标工作液（1 μg·mL-1）。精密量取100 μg·mL-1的金刚烷胺标准储备液100 μL 用乙腈溶解并定容至10 mL，-18 ℃保存。

（3）混合标准工作液（1 μg·mL-1）。准确吸取100 μL 金刚烷胺标准储备液（100 μg·mL-1）和4 种氟虫腈及其代谢物混标溶液（100 μg·mL-1）用乙腈溶解并定容至10 mL，-18 ℃保存。

（4）标准溶液的配制。吸取混合标准工作液0.02 mL、0.05 mL、0.10 mL、0.20 mL、0.50 mL、1.00 mL和2.00 mL 于100 mL 容量瓶中，再分别加入金刚烷胺内标工作液0.50 mL，用乙腈定容，配制成浓度为0.20 ng·mL-1、0.50 ng·mL-1、1.00 ng·mL-1、2.00 ng·mL-1、5.00 ng·mL-1、10.00 ng·mL-1和20.00 ng·mL-1的系列标准溶液，含内标浓度为5.00 ng·mL-1，供液相色谱-串联质谱仪测定。

1.2.2 测定步骤

①提取。称取样品5.00 g（精确到0.01 g）于50 mL离心管中，加入100 μL内标工作液，涡旋1 min，加入20 mL乙腈，2 g 氯化钠，6 g 无水硫酸钠，振荡10 min，8 000 r·min-1离心5 min，取上清液，备用[4-6]。②净化。取1 mL 备用液，加入QuEChERS 净化管，涡旋混匀1 min，8 000 r·min-1离心3 min，取上清液，过0.22 μm微孔滤膜，供液相色谱-串联质谱仪测定。将试样溶液注入仪器中，以保留时间和离子丰度比双重定性，以金刚烷胺与金刚烷胺-D6峰面积的比值带入标准曲线定量，以氟虫腈峰面积带入标准曲线定量。

1.3 仪器条件

1.3.1 色谱条件

（1）金刚烷胺色谱条件。色谱柱：BEH C18柱（2.1 mm×50 mm，1.7 µm）；流动相：0.1%甲酸水溶液（A）+0.1%甲酸甲醇溶液（B）；梯度洗脱：0 ～0.50 min，80%A+20%B；1.25 ～3.25 min，15%A+85%B；4.00 ～5.00 min，80%A+20%B；流速：0.2 mL·min-1；柱温：25 ℃；进样量：2 μL。

（2）氟虫腈色谱条件。色谱柱：BEH C18柱（2.1 mm×50 mm，1.7 µm）；流动相：水（A）+乙腈（B）；梯度洗脱：0 ～0.5 min，80%A+20%B；1.0 ～3.0 min，5%A+95%B；3.5 ～5.0 min，80%A+20%B；流速：0.25 mL·min-1；柱温：25 ℃；进样量：2 μL。

1.3.2 质谱条件

电喷雾离子源，金刚烷胺为正离子扫描，氟虫腈为负离子扫描，多反应监测方式；毛细管温度：350 ℃；喷雾器温度：350 ℃；鞘气压力：40 Arb；辅助气压力：15 Arb；喷雾电压：3 500 V；监测离子对、碰撞气能量和去簇电压参数见表1。

表1 待测物定性离子对，定量离子对、碰撞能量、锥孔电压参数表

2 结果与分析

2.1 质谱条件的优化

质谱条件优化了待测物及对应内标物，提高了灵敏度，得到了最优离子对以及碰撞能（见表1）和离子色谱图（见图1）。

图1 金刚烷胺离子对、氟虫腈、金刚烷胺-D6 离子对色谱图

2.2 标准曲线和检出限

在1.3.2 质谱条件下测定，结果表明金刚烷胺、氟虫腈在0.20 ～20.00 ng·mL-1有良好的线性关系。相关系数R均大于0.999 0。本方法的金刚烷胺定量限为2 μg·kg-1；氟虫腈定量限为5 μg·kg-1。金刚烷胺、氟虫腈线性方程和相关系数见表2。

表2 金刚烷胺和氟虫腈的线性方程和相关系数表

2.3 回收率以及精密度实验

准确称取空白鸡蛋样品，加入混合中间工作液，分别添加浓度水平为2 μg·kg-1、5 μg·kg-1、20 μg·kg-1的金刚烷胺、氟虫腈溶液，进行6 次平行实验，计算加标回收率和精密度。由表3 可知，样品回收率在85.0%～103.3%，精密度在1.6%～8.9%。

表3 精密度和加标回收率结果表

3 结论

本研究建立了一种超高效液相色谱串联质谱法测定鸡蛋中金刚烷胺和氟虫腈的方法。通过试验优化统一前处理过程，经检测样品回收率在85.0%～103.3%，精密度在1.6%～8.9%，结果准确，灵敏度高，此方法更适合于实验室日常检测。