HPLC法检测化妆品中覆盆子酮的含量

王 菲

青蛙王子（福建）婴童护理用品有限公司，福建漳州，363005

覆盆子酮的别名：悬钩子酮。CAS为5471-51-2，化学式为C10H12O2，熔点在82～83 ℃，不溶于水，主要应用在食品香料中，也应用在化妆品及皂的香精中[1]。覆盆子酮是《已使用化妆品原料目录（2021年版）》清单中第02380号，其在淋洗类产品和驻留类产品中的最高历史使用量都为0.4%[2]，是一种粒状或白色针状结晶。

近年来，随着相关部门对化妆品防腐剂使用监管力度加大，越来越多的植物防腐剂成为配方师争先恐后研究的重点，其中覆盆子酮也进入研究者的研究目录中。朱会霞[3]的研究表明，覆盆子酮对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等具有抑制作用，并且覆盆子酮在pH值为4～8范围内时，抑菌作用是稳定的。孔秋婵等[4]的研究结果表明，覆盆子酮与1,2己二醇或苯氧乙醇复配，具有显著的抑菌效果，可以满足乳液和膏霜剂型防腐的需求。

目前，对覆盆子酮的检测方法有高效液相色谱法-荧光法[5]、气相色谱法[6]、分光光度法[7]及核磁共振内标法[8]等，但采用高效液相色谱法测定化妆品中覆盆子酮的含量还未有相关的研究。同时，覆盆子酮与4-（4-羟基苯基）-2-丁醇有相似的结构，这种结构可能会导致消费者皮肤患白斑病[9]。因此，开发一种采用高效液相色谱法测定化妆品中覆盆子酮的检测分析方法具有重要的研究意义。

1 实验部分

1.1 主要试剂与仪器

覆盆子酮，纯度≥9 8.0 0%，Stanford Analytical Chemicals Inc.；甲醇，色谱纯，西陇科学股份有限公司；纯水，实验室自制。

岛津分析天平（AUY220），岛津企业管理(中国)有限公司；HPLC（LC-15C），SHIMADZU仪器（苏州）有限公司；超声波清洗机（A K-031SD），深圳市钰洁清洗设备制造中心；混匀器（XK90-A），江苏新康医疗器械有限公司；离心机（80-1），江苏科析仪器有限公司；纯水机（ROEDI-250L），汕头市正华达环保科技有限公司。

1.2 实验方法

1.2.1 色谱条件

色谱柱：采用shim-pack GWS C18，色谱柱的规格为：250 mm×4.6 mm×5 μm；

流动相：甲醇∶水（V/V）=40%∶60%；

流速：1.0 mL/min；

检测波长：220 nm；

检测器：二极管阵列检测器（DAD）；

柱温：30 ℃；

进样量：10 μL。

1.2.2 标准溶液的配制

精密称取覆盆子酮标准品0.020 0 g用甲醇溶解并定容于25 mL容量瓶中，配制成0.8 mg/mL的标准液作为储备液，并于4 ℃ 冰箱中储存备用。覆盆子酮标准储备液用甲醇稀释成浓度为8 μg/mL、40 μg/mL、80 μg/mL、400 μg/mL、800 μg/mL系列标准溶液，现配现用。

1.2.3 样品溶液制备

将0.50～1.00 g（精确到0.000 1 g）的化妆品，精确称取于具塞比色管（刻度10 mL）中，加入适量甲醇，置于混匀器内，使试样充分的混合分散，超声提取20 min，离心，用甲醇定容到10 mL混匀后再用0.45 μm或0.22 μm滤膜过滤，供试样品溶液备用。

2 结果与讨论

2.1 流动相对测试的影响

覆盆子酮可溶于甲醇和乙腈中，且两种溶剂对不同剂型的化妆品都具有较好的溶解分散性。研究了V（甲醇）∶V（水）和V（乙腈）∶V（水）不同混合比例对分离效果及检测时间的影响，测试采用V（甲醇）∶V（水）＝30∶70、40∶60、50∶50为流动相，研究发现，当以V（甲醇）∶V（水）＝50∶50为流动相时，分离效果较差，而以V（甲醇）∶V（水）＝30∶70作为流动相时，检测时间较长，因此选择流动相为V（甲醇）∶V（水）＝40∶60。同时以V（乙腈）∶V（水）＝40∶60为流动相时，分离效果和检测时间与V（甲醇）∶V（水）＝40∶60相同，考虑到溶剂对实验者安全的影响，最终选取流动相为V（甲醇）∶V（水）＝40∶60，其在试样中的分离度可达3.167，理论塔板数可达20 558，拖尾因子可达1.120，覆盆子酮的色谱图见图1。

图1 覆盆子酮对照品和样品中覆盆子酮的色谱图

2.2 检测波长的选择

覆盆子酮标准物质在1.2.1色谱条件下进行190～800 nm范围内的全扫描，从扫描的光谱可以看出，在220 nm附近覆盆子酮具有极强的紫外吸收能力，因此覆盆子酮的检测波长选择220 nm，光谱图如图2。

图2 覆盆子酮全扫描吸收峰

2.3 溶剂和超声时间的影响

2.3.1 提取溶剂的影响

在1.2.1的色谱条件下，选择较难分散的膏霜类体系作为研究对象，将甲醇、乙腈和流动相作为溶剂来提取膏霜中的覆盆子酮，样品制备过程参考1.2.3样品溶液制备。实验结果显示，采用这三种溶剂分别有98.5%、99.0%和98.3%的提取率。这三种溶剂对膏霜中覆盆子酮的提取率相当，因此选择甲醇作为萃取溶剂。

2.3.2 提取时间的影响

由于膏霜体系的化妆品成分比较复杂，不易分散萃取，故选择研究膏霜中覆盆子酮超声萃取时间为10 min、15 min、20 min、25 min时对提取率的影响，实验结果见图3，结果显示以超声萃取20 min为宜。

图3 超声时间与膏霜中覆盆子酮的提取率的关系

2.4 绘制标准曲线

将1.2.2中配置的系列标准溶液，取10 μL测试，按每个系列标准溶液浓度和峰面积，得到线性回归方程（表1）。根据检出限（LOD）是信噪比（S/N）为3时化合物的浓度，得到该方法对覆盆子酮的检出限为2 μg/mL，定量限（LOQ）是信噪比（S/N）为10时化合物的浓度，得到该方法对覆盆子酮的定量限为8 μg/mL。因此可以满足化妆品中覆盆子酮的最大添加量0.4%的检测要求。

表1 覆盆子酮标准曲线及标准系列浓度对应的峰面积

2.5 精密度与回收率

水剂类、乳液类、膏霜类为空白加标基质，加标水平回收率和精密度实验采用3个浓度（16、66、110 μg/mL），实验结果如表2所示。由表2可知，3个浓度加标的回收率为95.3%～117.3%，相对标准偏差为0.04%～2.45%（n＝3），表明该方法准确度、精密度较好。

表2 覆盆子酮（n＝3）的回收率和相对标准偏差

2.6 重复性实验

平行制备6份浓度为40 μg/mL的供试样品溶液，按1.2.3的方法进行处理，6份平行供试品溶液对应的峰面积如表3。以6次测定值来考察方法重复性，RSD为0.2%（n＝6），说明该方法具有良好的重复性。

表3 6份浓度为40 μg/mL的供试样品溶液的相对标准偏差

2.7 实际样品检测

购买市面上标签上显示含有覆盆子酮的三种剂型的洁面泡沫、膏霜、爽肤水并测试其覆盆子酮的含量。样品按照1.2.3进行处理。测得覆盆子酮的含量分别为0.11%、0.30 %和0.12%。

3 结论

采用H P L C 法测定化妆品中覆盆子酮的含量，甲醇为萃取溶剂，超声提取20 min，分离采用shim-pack GWS C18柱，二极管阵列检测器（DAD）检测。该分析方法简单易操作，检出限、定量限、回收率、精密度等均符合检测要求。