NA-IgG、EA-IgG、CA-IgM、CA-IgG及CA-IgG亲和力对儿童EB病毒感染的评估分析

张宏斌 马清华

(1.西安大兴医院儿科,陕西 西安 710016;2.西电集团医院儿科,陕西 西安 710000)

EB病毒(EBV)属嗜B细胞类疱疹病毒,主要侵犯B淋巴细胞。当B淋巴细胞感染机体后,可对B淋巴细胞产生刺激作用,导致细胞增生、转化[1],临床将其称为传染性单核细胞增多症(IM),IM患者的典型临床症状为淋巴结肿大、扁桃体肿大、发热、肝脾肿大等淋巴结增生性症状[2],严重者可导致心肌炎、皮疹、再生不良性贫血、神经系统并发症等。临床研究[3]还显示,EB感染与鼻咽癌、B淋巴细胞恶性肿瘤以及免疫力低下的其它恶性肿瘤关系密切,因此重视EBV感染的防治是传染科面临的重要课题。本方案对疑似感染EBV的儿童检测血浆病毒早期抗体(EA-IgG)、病毒核抗原抗体(NA-IgG)、病毒衣壳抗原抗体(CA-IgM)、病毒衣壳抗原抗体(CA-IgG)及CA-IgG亲和力指标,观察其在诊断儿童EBV感染的诊断效能,现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2019年5月至2022年12月我院收治的疑似EBV感染的受试儿245例,其中男137例,女108例;年龄3～11岁,平均(6.35±1.24)岁。所有入组患儿均因出现临床症状和(或)EBV感染流行病史,接诊医师初步诊断为疑似EBV感染[4];排除合并可能影响诊断结论的其它疾病患儿。

1.2 方法所有受试儿均由同一位接诊医师初步诊断为EB感染,采集所有受试儿的静脉血,采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测血浆EBV-DNA指标,采用间接免疫荧光法测定(IIFT)检测血浆NA-IgG、EA-IgG、CA-IgM、CA-IgG及CA-IgG亲和力指标,参照EBV感染诊断的金标准诊断结论,计算采用血浆EBV-DNA载量、NA-IgG、EA-IgG、CA-IgM、CA-IgG及CA-IgG亲和力及联合诊断EBV感染的诊断效能指标:诊断灵敏度、特异度、准确度。

1.2.1 EBV血浆DNA载量检测采集受试儿外周静脉血2 mL于乙二胺四乙酸抗凝管中,保存于2～4 ℃环境,在72 h内进行检测。离心去除血细胞获取血浆作为检测标本,采用用实时荧光定量聚合酶链反应检测标本。本方案所用试剂盒由湘生物科技股份有限公司提供,检测仪器为罗氏公司生产的LightCycler480II型实时荧光定量PCR仪。检测方法及诊断标准严格按照试剂盒说明书实施。

1.2.2 EBV特异性抗体检测采集受试儿外周静脉血3 mL于抗凝,乙二胺四乙酸抗凝管中,保存于2～4 ℃环境,在72 h内进行检测。离心去除血细胞获得血浆作为检测标本,采用间接免疫荧光法对EBNA-IgG、VCA-IgG、VCA-IgM、EA-IgG 4种抗体及VCA-IgG抗体亲和力进行检测。本方案所用试剂盒购自德国欧蒙医学诊断公司,检测仪器为上海光学仪器厂生产的荧光显微镜,严格按照试剂盒说明书及设备仪器操作说明书操作。

1.2.3 EBV感染诊断金标准由医院感染科组织的小组按照相关指南对所有入组受试儿进行诊断,在排除其它病原体感染的基础上,根据受试儿流行病学资料、临床表现及症状、实验室检测指标及EB-DNA检测结果、抗原、抗体等作出综合诊断结论。

1.3 统计学方法采用四格表计算对EBV感染的诊断灵敏度、特异度、准确度及误诊率。灵敏度=综合诊断阳性且测评方法诊断阳性/(综合诊断阳性且测评方法诊断阳性+综合诊断阳性但测评方法诊断为阴性),特异度=综合诊断和测评方法诊断均为阴性/(综合诊断阴性、测评方法诊断为阳性+综合诊断和测评方法诊断均为阴性),准确度=(综合诊断阳性+综合诊断和测评方法诊断均为阴性)/总例数。

2 结 果

2.1 不同方法诊断儿童EB感染结果经临床诊断、实验室检测结果及病情随访综合诊断为EB感染的患儿共计203例;血浆EBV-DNA载量诊断EB感染共计200例,NA-IgG、EA-IgG、CA-IgM、CA-IgG及CA-IgG亲和力指标诊断EB感染分别为11例、169例、38例、182例、183例,EBV-DNA诊断为阳性200例,CA-IgM+CA-IgG+ CA-IgG亲和力诊断阳性189例。见表1。

表1 不同方法诊断儿童EB感染结果(n)

2.2 不同方法诊断儿童EB感染灵敏度、特异度、准确度分析EBV-DNA检测的诊断灵敏度及准确度均高于NA-IgG、EA-IgG、CA-IgM、CA-IgG及 CA-IgG亲和力及其联合诊断方案。见表2。

表2 不同方法诊断儿童EB感染灵敏度、特异度、准确度分析(%)

3 讨 论

目前临床对于EBV感染的诊断方法中,诊断效能最高的属EBV-DNA载量检测,其通过聚合酶介导的一系列循环反应,对血浆中的EBV基因组DNA进行扩增放大,并与EBV的核酸片段进行比对,判断血浆中是否存在EBV;可敏感反应EBV的感染和复制增殖情况[5]。一般情况下,病毒载量超过500拷贝,可明确诊断感染EBV。但该检测方法耗时长,操作复杂,对检测人员的技术要求较高。且该检测方法所反映的情况对采样时是否感染进行判断,即临床所谓的活动性感染诊断,对既往的感染史难以做出判断。这对患者来说具有较高的临床价值,但对于传染病的防治所能提供的信息尚存缺陷[6]。EBV三项抗体检测也是临床应用较为广泛的诊断EBV感染的方案。三项抗体指标包括EBV衣壳抗原(VCA)、EBV核抗原(EBNA)、EBV早期抗原(EA)的抗体检测[7]。这些抗体出现在EBV感染的不同阶段,据此可对感染情况作出判断。虽然EBV三项抗体检测具有上述优点,但其诊断的灵敏度、准确度也应达到较高的水平,方能尽可能降低医疗资源的无谓损耗[8]。

本方案对初诊医生诊断为疑似EBV感染的儿童分别检测EBV-DNA载量、EBV抗体:NA-IgG、EA-IgG、CA-IgM、CA-IgG及CA-IgG亲和力指标,结合临床患儿临床症状及体征、实验室数据等资料,由感染科资深医师组成的小组对受试儿童的上述指标进行综合分析并作出诊断结论,并对数据进行分析。结果显示,以综合诊断为金标准,采用EBV的特异性抗体NA-IgG、EA-IgG、CA-IgM、CA-IgG及 CA-IgG亲和力及其联合方案诊断儿童EBV感染,不同抗体体现出来的诊断灵敏度、特异度和准确度存在较大的差异,其中EA-IgG、CA-IgG、CA-IgG亲和力、CA-IgM+CA-IgG+CA-IgG亲和力具有较高的诊断效能,而NA-IgG、VCA-IgM抗体的诊断效能非常差,与临床其它文献资料的结论存在较大的差异,这可能与儿童尤其是年龄较小的儿童其免疫功能不成熟,感染病毒后,自身免疫系统不能及时产生抗体,而未能检出,导致诊断效能较差[9]。由于NA-IgG、EA-IgG、CA-IgM、CA-IgG及CA-IgG亲和力所反映的EB感染阶段特征较为明显,通过分析上述检测指标的诊断结论,可以知晓受试儿童当下及既往是否存在EBV感染,为临床EBV感染防控提供客观数据。尤其是采用CA-IgM+CA-IgG+ CA-IgG亲和力检测联合诊断,其基本涵盖了当前感染、既往感染的全过程,不仅能保证较高的诊断效能,同时还为病情评估提供客观数据[10]。

综上所述,NA-IgG、EA-IgG、CA-IgM、CA-IgG及CA-IgG亲和力检测作为诊断儿童EBV感染虽然诊断效能方面稍差于血浆EBV-DNA载量检测诊断方法,但其可显示既往感染情况,且操作简便、快速,作为儿童大规模EBV感染筛查及完善病情资料的有益补充。

利益冲突说明/Conflict of Intetests

所有作者声明不存在利益冲突。

伦理批准及知情同意/Ethics Approval and Patient Consent

本研究通过西安大兴医院伦理委员会批准,患儿家属均知情同意。