高效液相色谱法在建昌帮酒制白芍无糖颗粒药用组分芍药苷、氧化芍药苷测定中的应用研究

邹立君，杨莎，吴娟娟

（江西中医药高等专科学校，江西抚州，344000）

0 前言

白芍具有养血调经、平抑肝阳、柔肝止痛等多重中医临床疗效，因此在中医临床领域得到了广泛应用。临床上，除白芍根茎中药饮片外，白芍配方颗粒亦是常用药剂之一。白芍配方颗粒指以白芍饮片为加工原料，经过提取、浓缩药用组分后，再经过干燥和制剂加工工序制成的可供临床治疗中直接使用的配方颗粒。不少研究者对白芍配方颗粒加工工艺、药用机理及药用组分检测方法等领域进行研究，并取得了诸多成果，有效推动了包含白芍在内的中医药领域高速发展。江西建昌帮作为中药领域的重要药帮之一，其中医炮制工艺对各类中药原材料炮制加工和饮片进一步炮制等领域的发展具有重要推动作用［1，2］。本研究以建昌帮炮制工艺为基础，提出建昌帮酒制白芍无糖颗粒炮制生产工艺，并通过高效液相色谱法测定配方颗粒中芍药苷、氧化芍药苷两种药用组分含量。

1 实验仪器和材料

1.1 主要实验仪器

本研究主要实验仪器：高效液相色谱仪（安捷伦1260，江西某高校课题组实验设备）、旋转蒸发仪（上海予华仪器设备有限公司，RE-2000A）、微量分析天平（ES1035B，LICHEN/力辰科技）、超声波清洗器（PS-40A，JARCON/臻洁康牌）、喷雾干燥器（浚和仪器科技有限公司，ADL311-A）等。

1.2 主要实验药品试剂

本研究主要实验药品试剂：白芍饮片（3 批，购于当地同仁堂药店，产地安徽省），芍药苷（CAS：号23180-57-6，成都钠钶锂生物科技有限公司，纯度≥98.0%，产品编码：nkl-00284））、氧化芍药苷（CAS号：39011-91-1，成都钠钶锂生物科技有限公司，纯度≥99.42%，产品编码：nkl-00334）、乙腈（CAS 号75-05-8，阿拉丁品牌，梯度色谱级≥99.9%）、甲醇（CAS号67-56-1，阿拉丁品牌，色谱纯，产品编码M116118-1L，纯度≥99.9%）、黄酒（购于四特京东自营旗舰店，酒精度数52.0°，无糖型）、磷酸（CAS 号7664-38-2，阿拉丁品牌，色谱级85%～90%）等。

2 实验方法和结果

2.1 白芍中药炮制

2.1.1建昌帮酒制白芍加工工艺

检查白芍中药饮片质量，确定无质量问题后，依据《建昌帮炮制规范》，准确称取白芍中药饮片100.0g，缓慢加入白酒20g，在干净容器中缓慢搅拌，后经文火加热慢炒加工，炒至白芍饮片表面出现微黄色后即炒制结束，将炒制后的白芍取出放凉，即得建昌帮酒制无糖白芍。

2.1.2提取加工工艺

称取炮制所得建昌帮酒制无糖白芍100g，加入1kg 纯净水，浸泡1.0h，煎煮提取2.0h，过筛（300目）；药渣加入8 倍纯净水，继续煎煮2.0h，过筛（300 目）；合并两次煎煮过筛所得滤液。

2.1.3浓缩加工工艺

将2.1.2 所得滤液加入旋转减压蒸发浓缩系统（真空度-0.06MPa，温度65℃）中进行浓缩加工，浓度至液体密度为约为1.08mg/L 即止，最后所得液体即为研究所需浓缩液。

2.1.4干燥加工工艺

搅拌2.1.3 所得浓缩液，热风干燥（进风温度约为180℃，出风温度约为80℃），送至料泵（35r/min）进行喷雾干燥，最后得干膏粉。

2.1.5制粒加工工艺

在2.1.4 所得的干膏粉中加入适量药用糊精，缓慢搅拌至均匀，采用干法进行制粒加工，控制轧轮转速10r/min，保持压力7.5MPa 左右，控制水平送料速度为30r/min，对所得料粒进行粉碎，过筛（100 目），最终得建昌帮酒制白芍无糖颗粒。

2.2 测定方法

2.2.1对照溶液制备

精密称取芍药苷、氧化芍药苷两种试剂适量，分别加入10mL 容量瓶中，缓慢滴加甲醇（70%）进行溶解，定容至刻度线，分别配制得芍药苷、氧化芍药质量浓度为21.12μg/mL、199.60μg/mL 的混合对照品溶液。

2.2.2待测样品溶液制备

准确称取以2.1.1 方法制备的建昌帮酒制无糖白芍和以2.1.5 方法制备的建昌帮酒制白芍无糖颗粒各0.1g，加入25mL 容量瓶中，加入乙醇溶液定容至刻度线，超声处理1h（功率200w，频率50kHz），反应液放凉，真空抽滤，所得滤液即为待测样品溶液。

2.2.3高效液相色谱仪条件

色 谱 柱Diamonsil-C18（4.6mm×200mm，55μm）；流动相乙腈（A）-0.05%磷酸溶液（B），梯 度 洗 脱0～20min（5%→30%A）、20～25min（30%→95%A）；检测波长：220nm；流速：1.0 mL/min；柱温：30℃；进样量：10μL；芍药苷、氧化芍药苷检测波长分别为230nm、258nm。

2.3 研究方法学考察

2.3.1线性考察

准确称取芍药苷、氧化芍药苷两种对照品适量，加入5mL 容量瓶中，用70%甲醇溶液进行溶解并定容至刻度线。精密移取对照品样品，分别稀释至刻度线，以对照品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制芍药苷、氧化芍药苷组分标准曲线，计算回归方程和相关系数。芍药苷组分：回归方程Y=0.1110X-0.6827，r=0.9999，线性范围77.15μg/mL～771.53μg/mL；氧化芍药苷组分：回归方程Y=0.0237X-0.0166，r=0.9999，线性范围6.57μg/mL～65.71μg/mL。结果表明，线性范围内相关系数r均大于0.999，说明回归方程线性关系良好，研究方法具有可行性。

2.3.2精密度考察

取待测样品溶液，连续进样10 次，计算芍药苷、氧化芍药苷组分色谱峰峰面积RSD 值，计算结果显示芍药苷、氧化芍药苷峰面积RSD 值分别为0.14%、0.08%，即两种组分测定结果相对标准偏差（RSD）均小于1.50%，这表明本研究方法具有较高重复性，可满足本研究需求。

2.3.3重复性考察

移取待测样品溶液适量，按照2.2.2 方法平行制备待测定溶液10 份，后按照2.2.3 方法进行芍药苷、氧化芍药苷组分检测，计算RSD 值，计算结果显示芍药苷、氧化芍药苷组分质量分数检测结果的RSD 值分别为1.85%、2.56%，即待测样品检测结果相对标准偏差（RSD）均小于3.00%，这表明本研究方法具有较高重复性，可满足本研究需求。

2.3.4稳定性考察

移取带测定溶液，并分别在不同时间进样检测（t=0h、2h、4h、8h、12h、24h、36h、48h、72h）， 根据检测结果计算RSD 值。计算结果显示芍药苷、氧化芍药苷组分质量分数检测结果的RSD 值分别为0.37%、1.82%，即不同时间段待测样品检测结果相对标准偏差（RSD）均小于3.00%，这表明待测样品溶液在72h 内基本稳定，可满足本研究要求。

2.3.5加标回收试验

精密称取已知组分含量的酒制白芍饮片10 份各0.25g，按1：1 比例加入芍药苷、氧化芍药苷对照品适量，进样测定，计算加标回收率计算。结果显示芍药苷、氧化芍药苷加标回收率分别为103.56%、99.67%，RSD 值分别为0.41%、2.47%，平均加样回收率和相对标准偏差均在《药典》相关规定的可接受范围内，即满足本研究需求。

2.4 白芍药用组分含量测定

分别各取10 批建昌帮酒制无糖白芍和建昌帮酒制白芍无糖颗粒，依照2.2.2 方法进行待测定样品溶液配备，在2.2.1 条件下依照2.2.3 测定方法进行芍药苷、氧化芍药苷含量测定，记录色谱图和峰面积，分别结算不同待测定样品芍药苷、氧化芍药苷的含量，结果如下表1 所示。由表1 可知，建昌帮酒制无糖白芍芍药苷、氧化芍药苷组分含量分别为22.57mg/g～35.70mg/g、0.186mg/g～0.312mg/g，建昌帮酒制白芍无糖颗粒芍药苷、氧化芍药苷组分含量分别为22.16mg/g～30.54mg/g、0.157mg/g～0.235mg/g，结果表明建昌帮酒制无糖白芍在进行制粒加工后其药用组分芍药苷、氧化芍药苷含量变化不大。

表1 待测样品芍药苷、氧化芍药苷组分测定结果（mg/g）

3 讨论

白芍，又名白芍药，属常见中药之一，以苦、微寒等特性被广泛应用于中医临床。白芍主要药用组分包括芍药苷和氧化芍药苷在内的单帖糖苷类，药用组分主要存在于白芍根茎中。炮制加工工艺是指将药材经过加工处理，使其达到更好的药用效果。就白芍而言，最常见的炮制方法是炒制［3］。首先，炒制可以使白芍材中某些药用组分含量增加。因为在炒制过程中，药材表面水分被蒸发，使得药材内部有效组分浓度增加。同时，炒制还能够激活药材中某些酶类物质，促进药用组分合成与积累，继而达到增强其药效之作用。其次，白芍炮制加工工艺还可影响药物代谢和吸收。在中医临床上，很多情况下需要通过口服或者外用方式来使用白芍。白芍经过炮制加工后，药物代谢和吸收会发生变化，如炒制可使白芍材微生物菌群发生改变，从而影响其在肠道内的吸收与代谢。此外，炒制还可改变白芍材中某些生物活性物质结构，从而影响其药效与药物代谢［4，5］。因此，在白芍炮制加工过程中，需根据具体用途和使用方法，选择合适的加工方法和工艺，以达到最佳药效和治疗效果。另一方面，白芍炮制加工工艺还可以影响口感和外观［6］。在中药制剂中，药材口感和外观亦是非常重要的因素之一。就白芍来说，炮制可以使味道更加香甜，外观更加美观。因为在炒制过程中，药材表面会形成一层微薄的油脂层，从而增加药材的香气和口感。同时，炒制还可使白芍材颜色更加明亮，纹理更加清晰，从而提高外观品质［7-9］。综上可知，白芍药用组分变化与炮制加工工艺之间存在着密切联系。选择合适的加工方法和工艺，可提高白芍药用组分含量和药效，改善其药物代谢和吸收，同时还能够改善口感和外观品质。

本课题组通过研究证明，与白芍饮片相比，酒制白芍的某些药用组分含量更高，这同白芍中医临床应用研究结论一致［10-12］。在前期研究工作基础上，本课题组创新地提出建昌帮酒制无糖白芍炮制工艺，一改传统以含有一定糖分的黄酒作为酒制炮制辅料，炮制加工过程中不增加任何糖源，避免服用者出现龋齿、糖尿病和肥胖等病症，从而将其药用范围扩大到儿童、年老及禁糖患者等群体。建昌帮酒制无糖白芍加工成口服颗粒，优化了传统中药饮片服用不便之缺点，提高白芍制剂临床服用的便捷性和治疗高效性。本研究以白芍饮片为加工对象，按照建昌帮炮制工艺方法对白芍饮片进行酒制白芍炮制加工，并将其加工成口服颗粒。同时，通过高效液相色谱法测定建昌帮酒制无糖白芍及其颗粒药用组分芍药苷、氧化芍药苷含量，研究建昌帮酒制白芍无糖颗粒炮制加工工艺是否可行，结果表明建昌帮酒制无糖白芍与建昌帮酒制白芍无糖颗粒中芍药苷、氧化芍药苷两种药用组分含量变化不大，即建昌帮酒制白芍无糖颗粒炮制制备工艺可行，值得在临床进行深入应用与拓展。