D-二聚体和纤维蛋白(原)降解产物质控品复溶后稳定性研究

李亚军,孙 滔,余 抒

重庆邮电大学附属重钢总医院检验科,重庆 400081

质控品是用于实验室质量监测、评估并确保结果可靠的重要元素,质控品复溶后的稳定性是确保质量一致性的关键,正确的冻存方式、合适的冻存温度、冻存速率是保证质控品性能稳定的关键因素。为确保质控品的质量和可靠性,其存储和复溶方式的选择应根据每种质控品的理化性质和稳定性来决定。血浆D-二聚体(D-D)和纤维蛋白(原)降解产物(FDP)是交联纤维蛋白或纤维蛋白(原)经纤溶酶作用后的降解产物,D-D是其中最小的片段,相对分子质量约为62 ku,在人体内半衰期约为3 h,D-D与FDP是反映机体凝血及纤溶状态的重要标志物[1]。

近年来,D-D和FDP的应用价值不断被发掘,且随着检测技术精确性的不断提高,D-D和FDP在对血栓、肿瘤、脓毒症等相关疾病的诊断和治疗评估中具有至关重要的作用[2-8]。但目前D-D和FDP既无国际标准、国内外也无统一标准品,且检测位点不统一,各检测系统的方法一致性较差,导致二者的质量控制存在难度和瓶颈。为保证质控品质量稳定,多数实验室采用进口的D-D和FDP冻干质控品,但冻干质控品价格昂贵、开瓶复溶后的效期短、不能反复冻融,可使用频次受限,不仅浪费质控品,而且加大了实验室质控成本。因此,寻找质控品复溶后在一定时间均能稳定保存及使用的方法是解决质控品质量控制的技术难题。李曼辉等[9]自制的凝血3项质控品在—20 ℃保存可稳定22 d。况妮娜[10]指出,进口凝血质控品复溶后冷冻保存在—20 ℃可稳定5 d。黄新强等[11]报道商品化纤维蛋白(原)质控品复溶后在4 ℃冷藏保存时稳定性更好。吴晓华等[12]自制的D-D质控品在—20 ℃保存稳定性良好。为进一步明确D-D和FDP质控品复溶后的保存条件,本研究将D-D和FDP质控品复溶后分别保存在4 ℃和—20 ℃环境中,并对其稳定性、精密度进行了分析,以期寻找简单、实用的保存方法,为临床保存D-D与FDP提供参考依据,现报道如下。

1 材料与方法

1.1材料 仪器选用日本积水医疗生产的CP3000全自动凝血分析仪,试剂选用原装D-D、FDP检测试剂和配套耗材。质控品选择检测系统生产商配套的日本积水医疗生产的D-D与FDP质控品[13](批号:908RAT),含低值和高值两个水平。

1.2方法

1.2.1实验方法 采用胶乳免疫比浊法检测D-D和FDP水平,由固定人员采用相同操作进行实验。根据质控品说明书,开瓶配制质控品后在2～10 ℃环境可保持2周稳定,—80 ℃冻存可保持1个月稳定,复溶后冻融仅限1次。结合本实验室条件将质控品分为冷藏组和冷冻组,取两个不同水平(批号:908RAT,D-D与FDP靶值浓度低值分别为2.7 μg/mL、10.0 μg/mL,高值分别为8.4 μg/mL、30.2 μg/mL)的FDP质控品各10瓶作为研究对象,每瓶分别加入1 mL蒸馏水复溶10 min。将10瓶低值混合成一瓶并充分混匀后分装入30支EP管中,每支分装300 μL;再将10瓶高值同样处理分装为30支EP管中,每支分装300 μL。从分装好的EP管中低值和高值各取15支作为冷藏组(30支,4 ℃保存),低值和高值分别剩余的15支作为冷冻组(30支,-20 ℃保存)。从冷藏组低值和高值各取1支当日检测D-D和FDP水平各5次,剩余的放入4 ℃冷藏保存;从冷冻组低值和高值各取1支当日检测D-D和FDP水平各5次,剩余的放入—20 ℃冷冻保存。次日起,每日分别取冷藏组和冷冻组各水平EP管1支,室内自然复温平衡30 min后使用相同仪器及试剂检测D-D和FDP各5次,连续进行15 d,共检测150次。以复溶当天的检测结果作为第1天,后续每天按顺序记为第2、 3天,直至第15天,观察质控品复溶后两种保存方法的稳定性及精密度。

1.2.2记录质控品复溶分装后管间均一性 将上述复溶分装好的质控品在分组前,分别随机抽取高值和低值的30支EP管中的6支样本,每支分别检测D-D和FDP水平,各5次,对获得的数据进行分析,评价同水平各管间均一性。

2 结 果

2.1两组不同保存时间稳定性比较 冷藏组D-D和FDP低值第4～15天、D-D高值第6～15天、FDP高值第10～15天的检测值均明显低于第1天,差异均有统计学意义(P<0.05)。见图1。冷冻组D-D低值第10～15天、D-D高值第11～15天、FDP低值和高值第14～15天的检测值均明显低于第1天,差异均有统计学意义(P<0.05)。见图2。

注：与第1天比较,aP<0.05。

注：与第1天比较,aP<0.05。

表1 两组累积精密度比较

图3 两组累积精密度比较

2.3复溶分装后管间均一性比较 D-D低值、FDP低值、D-D高值、FDP高值管间均一性比较,差异均无统计学意义(F=0.134、0.399、0.157、0.188,P=0.983、0.845、0.976、0.964)。

3 讨 论

质量是检验工作的核心,质量控制是保证质量的有效手段,优质的质控品是实现质量控制的重要元素。凝血相关因子检测是法规规定必须进行室内质控的项目[15],目前凝血相关因子的质控品大多数为冻干粉制剂,其优点是瓶间差异小、性能稳定、保存时间长,但价格较贵。本实验室配备的CP3000凝血分析仪,因其精密度优、准确度高、检测线性范围宽、检测限低、携带污染低等特点[16],目前在全国实验室使用广泛。该仪器采用胶乳免疫比浊法检测D-D和FDP,配套质控品为冻干粉血浆,需复溶后使用,但不可反复冻融,若每天新溶一支质控品使用不仅浪费,而且会使质控成本飙升,不利于中小实验室质控工作开展。因此,对冻干质控品复溶后采取恰当的保存方式延长其稳定性、有效提高质控品使用效率、保证质控效能、显著降低实验室质控成本十分必要。

本研究将质控品复溶分装后分别按冷藏和冷冻的方式保存,结果显示,冷藏保存D-D和FDP的低值均在4 d就开始明显降低,高值分别在6、10 d开始降低,冷冻保存时两个水平的D-D均超过10 d,FDP均超过14 d时才开始明显降低,表明质控品复溶后低温保存可以延长其稳定时间,温度越低稳定时间越长,与武建伟等[17]研究的D-D在低温环境保存时间更长一致。D-D和FDP低值在冷藏时仅稳定保存3 d,冷冻时则可稳定保存9 d,D-D和FDP高值在冷藏时可稳定保存5 d,而冷冻时能稳定保存10 d。冷冻保存的稳定时间是冷藏的2～3倍,特别是在低值时,差距更是达到3倍,表明冷冻保存的稳定性更好。冷藏时D-D和FDP高值的稳定时间是低值的2～3倍,表明冷藏对质控品不同水平之间的影响较大,而冷冻时D-D和FDP不同水平的稳定时间基本一致,表明冷冻对质控品不同水平之间的影响较小,进一步表明冷冻保存的稳定性更好。D-D和FDP质控品复溶后会持续降解,导致结果持续降低,而低温可延缓降解速度,温度越低降解速度越慢,与凝血质控品保存效果相似[18]。

综上所述,分装冷冻法适用于D-D和FDP冻干质控品复溶后的保存,值得推广应用。