LMR、miR-21、HOPX与宫颈癌同步放化疗瘤体体积变化参数的关系及联合预测患者预后的价值

符小春,刘秀玲,王茹娜

(驻马店市中心医院 肿瘤妇科,河南 驻马店 463000)

我国宫颈癌发病率、病死率高,大部分患者确诊时已处于中晚期,临床常采用同步放化疗进行治疗,5 a生存率为60%～70%,但40%左右患者存在肿瘤复发、转移[1-2]。血清因子水平已成为临床病情评估、预测预后的重要手段,因而需寻找新型血清因子预测宫颈癌患者预后,有助于临床调整治疗方案。淋巴细胞/单核细胞比值(lymphocyte/monocyte ratio,LMR)降低与宫颈癌侵袭转移有关[3]。微小RNA(microRNA,miRNA)可调控RNA转录水平功能,参与宫颈癌发生发展过程,研究表明微小RNA-21(microRNA-21,miR-21)表达异常与宫颈癌发病密切相关[4]。转录因子含同源结构域蛋白同源盒(homeodomain-only protein homeobox,HOPX)与DNA靶定、细胞分化、蛋白复合体加工等有关,其在肿瘤组织中表达量降低,可发挥抑制肿瘤作用[5]。目前LMR、miR-21、HOPX与宫颈癌同步放化疗患者预后关系尚未明确,本研究主要探讨LMR、miR-21、HOPX与瘤体体积变化参数关系,并分析其对预后的预测效能。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2019年6月至2022年3月医院收治的108例接受同步放化疗宫颈癌患者为研究对象,收集研究对象临床资料,包括年龄、体重指数、生育史、Karnofsky功能状态(Karnofky performance status,KPS)评分[6]、肿瘤家族史、宫颈癌浸润深度、国际妇产科联盟FIGO分期、放疗剂量、合并疾病。纳入标准:符合宫颈癌诊断标准[7],且经病理检查确诊为宫颈癌;首次接受同步放化疗;无腹部手术史;无放化疗病史;签署知情同意书。排除标准:已行宫颈癌根治术;合并或继发性宫颈癌;伴有血液系统相关疾病;对本研究所用药物等过敏;合并严重感染性疾病;合并其他恶性肿瘤。本研究经医院医学伦理委员会批准。

1.2 治疗方法

采用铂类为基础的同步化疗联合外照射(external beam radiotherapy,EBRT)、腔内后装治疗(intracavitary brachytherapy,ICBT)为标准治疗方式,EBRT选用适形调强放疗(intensity- modulated radiotherapy,IMRT),依据治疗前MRI、CT图像由靶区勾画系统,定义肿瘤靶区、临床靶区(clinical target volume,CTV)、计划靶区,使用剂量为45 Gy,每次1.8 Gy,每周5次;高剂量率近距离ICBT(HDR-ICBT)。靶区处方剂量:中危靶区每次CTV 5～6 Gy,高危靶区每次CTV 7 Gy,每周2次,共4次,并统计患者放疗总剂量。化疗方案:顺铂(Hospira Australia PtyLtd,生产批号H20140372)75 mg·m-2,每3周使用1次,以21 d为1个周期,共化疗3个周期。治疗结束后通过电话、门诊复查等方式进行随访,随访时间为3个月,采用腹盆腔B超、MRI、胸片、妇科检查等评估有无宫颈癌复发或转移征象,有宫颈癌复发或转移征象纳入预后不良组,否则纳入预后良好组。

1.3 血清LMR、miR-21、HOPX水平

研究对象分别于治疗前、治疗后14 d采集空腹肘静脉血5 mL,以3 000 r·min-1离心处理10 min,获得上清液。采用Coulter LH750型血常规自动分析仪(美国贝克曼库尔特公司)检测淋巴细胞计数、单核细胞计数,并计算LMR。采用qRT-PCR法检测miR-21、HOPXmRNA表达量:采用miRNA提取试剂盒(用于检测miR-21)、Trizol试剂(用于检测HOPXmRNA)分别提取血清总RNA,参照反转录试剂盒合成cDNA,使用qRT-PCR试剂盒进行扩增,反应体系为模板cDNA 2 μL,Real-Time Master Mix 10 μL,正反向引物各1 μL,RNase-Free ddH2O补足体系至20 μL;反应条件为95 ℃2 min,95 ℃ 30 s,60 ℃ 30 s,72 ℃ 60 s(循环35次)。采用2-ΔΔCt法计算miR-21、HOPXmRNA表达量。所有引物均使用Primer 6.0设计,委托上海生工生物公司合成。miR-21:F为5’-ACGTTGTGCAGCTTATCAGACTG-3’,R为5’-AATGGTTGTTCTCCACACTCTC-3’。HOPX:F为5’-CAGATCCGTCACAGACTAAG-3’;R为5’-GACTCAAAGGGAAATGCT-3’。

1.4 检测瘤体缩减率(tumor volume reduction rate,TVRR)

治疗前行MRI检查,获取治疗前瘤体最大径、瘤体体积,经1.5 T MRI扫描,肿瘤呈现层厚5 mm图像,MRI有效图像定义为肿瘤T2加权高信号病灶且与附近组织分界清晰。由2名放疗科医师确定图片中肿瘤区面积,全部肿瘤平面面积与层高乘积即为肿瘤体积,按照美国肿瘤放射治疗协作组指南进行瘤体勾画,得到肿瘤体积数据。

1.5 统计学分析

2 结果

2.1 临床资料

预后不良组宫颈癌浸润深度≥50%、FIGO分期Ⅳ期占比高于预后良好组(P<0.05),见表1。

表1 两组临床资料比较

2.2 血清LMR、miR-21、HOPX水平及TVRR

治疗前两组血清LMR、miR-21、HOPX水平差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后14 d两组血清LMR水平、HOPXmRNA表达量高于治疗前,miR-21表达量低于治疗前;预后不良组治疗后14 d血清LMR水平、HOPXmRNA低于预后良好组,miR-21表达量高于预后良好组(P<0.05)。治疗后14 d,预后不良组TVRR(76.85±5.61)低于预后良好组(86.54±6.88),差异有统计学意义(t=7.379,P<0.001)。见表2。

表2 两组血清LMR、miR-21、HOPX水平及TVRR比较

2.3 血清各指标与TVRR相关性分析

治疗前血清LMR、HOPX与宫颈癌浸润深度、FIGO分期呈负相关,miR-21与宫颈癌浸润深度、FIGO分期呈正相关;治疗后14 d血清LMR、HOPX与TVRR呈正相关,miR-21与TVRR呈负相关(P<0.05)。见表3。

表3 血清各指标与TVRR相关性分析

2.4 宫颈癌同步放化疗患者预后影响因素的logistic回归分析

以宫颈癌同步放化疗患者预后为因变量(预后良好=0、预后不良=1),以前述单因素分析(表1、2)中P<0.05指标/因素作为自变量,所有自变量均进行两分类转化:连续数值指标参考两组均值进行分层,回归过程采用逐步后退法,以进行自变量选择、剔除。回归结果显示,LMR、miR-21、HOPXmRNA与宫颈癌同步放化疗患者预后相关(P<0.05),见表4、5。

表4 赋值情况

表5 宫颈癌同步放化疗患者预后影响因素的logistic回归分析

2.5 血清各指标联合预测预后的ROC分析

LMR、miR-21、HOPX对患者预后均有预测价值,且三者联合预测价值最高(P<0.05),见表6。

表6 血清各指标联合预测预后的ROC分析

3 讨论

宫颈癌发生发展与炎症反应、肿瘤细胞侵袭及转移有关,炎症反应可促进中性粒细胞转移至肿瘤细胞周围,增加破坏细胞核酸物质释放量,为肿瘤生长提供有利条件[8]。宫颈癌中晚期患者预后不佳,因而选择可靠指标预测患者预后,对临床调整治疗方案及个体精准化治疗具有重要意义。

淋巴细胞、单核细胞可反映全身炎症反应,并可预测肿瘤细胞侵袭、转移,研究表明LMR降低时机体免疫应答、抗肿瘤免疫能力较弱,肿瘤进展较快,且与宫颈癌患者不良预后密切相关[9-10]。本研究结果显示,预后不良组治疗后14 d LMR低于预后良好组,提示LMR降低与宫颈癌同步放化疗患者预后不良有关。由此推测LMR降低可促进肿瘤侵袭转移,降低抗肿瘤免疫细胞的攻击能力,促进肿瘤细胞增殖、黏附,影响肿瘤生长及转移,并可促使中性粒细胞转移至肿瘤细胞周围,增加活性氧释放量,造成预后不良。TVRR可反映放化疗敏感度,且与宫颈癌预后有关[11]。本研究结果显示,LMR与宫颈癌浸润深度、FIGO分期呈负相关,而与TVRR呈正相关,提示LMR降低可能促进宫颈癌发生发展,并可能作为判断患者预后的潜在指标。miR-21具有癌基因特性,可促进肿瘤细胞增殖、侵袭,抑制肿瘤细胞凋亡,进而参与肿瘤发生发展过程[12-13]。研究表明miR-21可调节激酶磷酸化水平,促进肿瘤生长,致使肿瘤患者预后不良[14]。本研究结果显示,预后不良组治疗后14 d血清miR-21表达量高于预后良好组,其与宫颈癌浸润深度、FIGO分期呈正相关,且与TVRR呈负相关,提示miR-21表达量升高可能促进宫颈癌恶性进展,增加预后不良发生风险。分析其原因可能为miR-21可通过调节磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶 B信号通路,促进肿瘤细胞增殖,抑制细胞凋亡,并可促进上皮-间质转化,增强宫颈癌细胞侵袭性,进而诱发预后不良[15]。

HOPX在多种肿瘤中呈低表达,其高表达可抑制肿瘤细胞增殖、迁移及侵袭[16]。HOPX过表达可促进p21表达,抑制细胞周期蛋白D1、CDK4表达,诱导细胞周期停滞、肿瘤细胞凋亡,抑制体内移植瘤生长[17]。本研究结果显示预后不良组治疗后14 d血清HOPX表达量低于预后良好组,且与临床病理特征、TVRR密切相关,提示HOPX可能参与宫颈癌发生发展过程,且与宫颈癌同步放化疗患者预后不良相关。由此可知HOPX低表达可能促进上皮-间质转化发生,增强宫颈癌细胞侵袭转移能力,促进细胞周期进展,进而降低同步放化疗的治疗效果,致使预后不良发生。目前LMR、miR-21、HOPX单一预测宫颈癌同步放化疗患者预后具有一定局限性,因而本研究选取联合预测模型,结果发现联合预测预后的AUC大于单一指标预测,提示早期实施联合检测血清LMR、miR-21、HOPX水平可能作为临床预测宫颈癌同步放化疗患者预后的有效辅助手段。

4 结论

血清LMR、miR-21、HOPX水平与宫颈癌同步放化疗患者TVRR及其预后密切相关,联合检测其水平对预后具有一定预测价值,可为宫颈癌同步放化疗患者诊疗提供科学指导。