830例育龄妇女MTHFR基因A1298C位点多态性研究

齐国昌,王春玮

青海红十字医院检验科,青海西宁 810000

5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)主要作用是在叶酸代谢通路中将5,10-亚甲基四氢叶酸转化为具有生物学功能的5-甲基四氢叶酸,5-甲基四氢叶酸可以进一步进入甲基传递通路,通过同型半胱氨酸的重新甲基化过程间接为DNA甲基化和蛋白质甲基化提供甲基并且使血液中的同型半胱氨酸水平保持在一个较低的水平[1]。MTHFR基因的缺陷将导致机体多个基础生化过程的紊乱,包括细胞周期调控、DNA复制、DNA以及蛋白质甲基化修饰等,进而引发神经管缺陷、癌症、心脑血管疾病等多种病症[2]。在孕妇人群中MTHFR基因的缺陷会引起神经管缺陷、先天性心脏病、唇腭裂、妊娠期高血压疾病,自发性流产[3]。CAO等[4]研究提出,叶酸摄入应该控制在一个特定的范围之内,摄入不足或者过量,对后代健康均会产生不利影响。因此,本研究通过分析830例育龄妇女MTHFR基因A1298C位点多态性分布情况,旨在了解育龄妇女人群中MTHFR基因A1298C位点的基因多态性特征,以实现育龄妇女可根据自己的遗传体质科学、合理地补充叶酸量,现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择2019年 1月至 2023 年4月在本院门诊进行孕前或孕期行优生健康检查的汉族及其他民族的育龄女性830例作为研究对象。830例中汉族590例,年龄19～46岁、平均(30.08±4.52)岁;藏族104例,年龄20～44岁、平均(30.76±5.18)岁;回族89例,年龄17～44岁、平均(27.5±5.77)岁;土族25例,年龄27～43岁、平均(30.8±3.64)岁;蒙古族22例,年龄20～40岁、平均(29.09±5.28)岁。本研究符合《赫尔辛基宣言》相关要求并得到本院医学伦理委员会批准(LW-2024-01)。

1.2方法

1.2.1标本准备和核酸提取 采集所有受试者外周静脉血2 mL于乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管中送检(若不能马上检测则置于4 ℃保存,并在1周内完成检测)。吸取200 μL进行全血DNA提取纯化,核酸浓度不少于20 ng/μL,纯度A260/A280为1.7～2.0。核酸提取与纯化试剂均购于西安天隆科技有限公司。

1.2.2多态性位点基因的检测 取待测标本核酸和质控品各4 μL加入MTHFR基因A1298C位点扩增体系中,设置反应条件：50 ℃ 2 min,1个循环;95 ℃ 10 min,1个循环;95 ℃变性15 s,60 ℃退火与延伸40 s,并在 60 ℃退火与延伸步骤收集荧光,循环数为40次。扩增结束后依据试剂说明书进行结果判读,根据报告荧光的不同分辨出标本中MTHFR基因A1298C位点的基因型。严格按照试剂说明书操作。MTHFR A1298C检测试剂购置于江西诺德医疗器械有限公司。

2 结 果

2.1Hardy-Weinberg平衡分析 将纳入研究人群的MTHFR基因A1298C位点的基因多态性分布进行Hardy-Weinberg遗传平衡检验,符合遗传平衡(P>0.05),见表1,表明标本具有本区域群体代表性。

2.2叶酸代谢相关基因的多态性分析 830例育龄女性MTHFR基因A1298C位点基因型AA、AC及CC基因型频率分别为69.64%(578/830)、27.35%(227/830)和3.01%(25/830);A等位基因频率为83.32%,C等位基因频率为16.68%。

2.3各年龄段间育龄女性MTHFR基因 A1298C位点基因多态性比较 各年龄段育龄女性MTHFR基因A1298C位点的基因型和等位基因频数和频率分布情况比较,差异均无统计学意义(χ2=6.82,P=0.34;χ2=1.91,P=0.59),见表2。

表2 各年龄段间育龄女性MTHFR基因 A1298C位点基因多态性比较[n(%)]

2.4不同民族育龄妇女间MTHFR基因A1298C位点基因型多态性数据比较 汉族、藏族、回族、土族和蒙古族育龄女性MTHFR基因A1298C位点的基因型均以AA为主,占比分别为70.85%、62.5%、60.67%、80.00%和90.91。汉族与本地其他少数民族间的MTHFR 基因A1298C 位点多态性分布比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。见表3。

表3 不同民族育龄妇女间MTHFR基因 A1298C位点基因多态性比较[n(%)]

3 讨 论

MTHFR是叶酸代谢过程的关键酶,A1298C 作为其最具有临床意义的位点之一,它的突变会导致MTHFR还原酶活性下降,进而会导致血清叶酸水平进一步降低。目前,临床上针对育龄妇女叶酸代谢相关酶基因多态性与出生缺陷不良妊娠关系的相关研究报道较多[5-6]。梅瑾等[7]研究发现有不良孕产史女性 MTHFR 基因A1298C 位点的CC突变纯合型频率均显著高于无不良妊娠史的妇女;同时,有研究报道MTHFR 基因A1298C位点的多态性基因多态性与不良孕产结局存在一定的关系[8]。因此,开展育龄妇女叶酸还原酶MTHFR基因A1298C位点多态性研究,对于根据不同基因型做个性化的叶酸补充方案、预防出生缺陷具有重要作用。

本研究显示：育龄妇女MTHFR 基因A1298C 位点突变率较低,AA基因型频率为69.64%,其纯合突变基因型频率仅为3.01%;各年龄段育龄女性MTHFR基因A1298C位点的基因型分布比较,差异均无统计学意义(P>0.05),这说明MTHFR 基因A1298C 位点多态性分布特征与年龄段无关,这一结果与吴秋红等[9]的研究结果一致。在对汉族与其他民族育龄女性MTHFR基因A1298C位点的基因型和等位基因频数和频率分布情况进行比较时,发现汉族与本地其他少数民族间的MTHFR 基因A1298C 位点多态性分布情况无明显差异,这一结果与杨玉清等[10]开展的银川市回族和汉族女性MTHFR基因 A1298C位点研究结果,以及初秀敏等[11]进行的兴安盟汉族和蒙古族女性MTHFR基因 A1298C位点研究结果一致。这说明汉族育龄女性与回族和蒙古族育龄女性之间的MTHFR 基因A1298C 位点无多态性分布特征。李君等[12]研究显示,西藏地区藏族与汉族女性MTHFR 基因A1298C 位点多态性分布特征差异有统计学意义(P<0.05),这一结果可能与同一民族不同地理分布和族裔来源存在一定关系。将本研究育龄妇女MTHFR 基因A1298C 位点基因型和等位基因频数和频率分布情况与其他地区女性比较,发现本研究与甘肃[13]、天津[14]、郑州[15]和昆明[16]之间MTHFR基因 A1298C 位点的多态性分布差异无统计学意义(P>0.05),与台州[17]、淄博[18]、武汉[19]、广州[20]和临沂[21]地区比较发现MTHFR基因 A1298C位点的多态性分布差异有统计学意义(P<0.05)。这说明育龄妇女MTHFR基因A1298C位点基因型和等位基因频数和频率分布在部分地区间存在不同的多态性分布特征。

综上所述,叶酸还原酶MTHFR基因A1298C位点的分布在不同年龄段育龄女性之间以及汉族与其他民族如回族、蒙古族和土族育龄女性之间没有明显差异,但是在部分地区间存在不同的多态性分布特征。出现这一结果可能与当地所处的地理环境、人群族裔来源、气候和饮食等相关,在不同地区如果均采用统一标准的叶酸补充量预防出生缺陷会存在一定局限性。故明确育龄妇女MTHFR基因 A1298C位点基因多态性分布特点,根据基因型判断叶酸代谢能力的强弱,针对性调整叶酸剂量进行个性化补充特别必要。