miR-92b、miR-320a表达水平与非小细胞肺癌患者临床病理及术后3年生存率的关系

朱铭君

河南科技大学第一附属医院肺肿瘤外科,河南省洛阳市 471000

非小细胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)是临床常见原发性肺癌类型,早期无特异性症状,难以被诊断,随病情发展可表现出咳嗽、咯血、胸痛、呼吸困难等体征,虽然随医疗技术进步,NSCLC患者显示近年患者生存率明显上升,但临床仍有2/3的患者在就诊时已错过最佳手术时间,预后通常较差,5年生存率仅为26.4%[1]。微小RNA(MicroRNA,mi-RNA)是一类由内源基因编码的非编码单链RNA分子,可以在翻译水平发挥调控基因表达的功能,具有高度保守性、时序表达特异性、时序表达特异性等特征[2]。近年来研究发现,mi-RNA与NSCLC发生、发展明显关联,其被认为可加强肿瘤侵袭、转移能力及化疗耐药性[3],提醒研究mi RNA在NSCLC治疗中的未来前景。基于此本研究以miR-92b、miR-320a表达水平与NSCLC患者临床病理及术后3年生存率的关系展开讨论,结果如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 回顾我院肿瘤外科2017年10月—2019年5月收治的86例NSCLC患者资料,其中男48例,女38例;年龄<60岁27例,≥60岁59例;吸烟者35例;组织学类型:鳞癌34例,腺癌52例;肿瘤TNM分期:Ⅰ期18例,Ⅱ期31例,Ⅲ期37例;淋巴结转移48例。纳入标准:(1)年龄18岁以上;(2)完善CT、MRI等检查,经病理学活检确诊为NSCLC;(3)两位高年资肿瘤科医师判定生存期在1年以上;(4)临床资料完整。排除标准:(1)合并其他器官严重器质性病变及恶性肿瘤;(2)未找到可供评价的实体瘤。所有患者及其家属均对研究知情同意,本研究符合《世界医学赫尔辛基宣言》。

1.2 检测方法 取肿瘤组织及肿瘤边缘5cm以上癌周组织,保存液氮中待检,采用定时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测miR-92b、miR-320a表达水平。取待检组织,研磨并以细胞裂解液裂解,用总RNA提取试剂盒提取总RNA,以分光光度计检测结果A260/A280在1.8～2.0判定RNA纯度。使用反转录试剂盒将RNA反转录为cDNA,按试剂盒说明扩增引物,miR-92b引物参数上游: 5’-AGGGACGGGACGCGGTGCAGTG-3’,下游: 5’-GCGAGCACAGAATTAATACGAC-3’;miR-320a引物参数上游:5’-TATTCGCACTGGATACGACTCCAGC-3’,下游:5’-GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGG-3’。RT-PCR反应参数:94℃ 2min,94℃ 30s,58℃ 30s,miR-92b循环38次,miR-320a循环40次。采用 2-ΔΔCt法计算miR-92b、miR-320a表达量。

1.3 观察指标 (1)比较患者肿瘤组织及癌周组织的miR-92b、miR-320a表达水平。(2)比较不同miR-92b、miR-320a表达水平患者的预后(术后3年累积生存率、平均生存时间),采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线。(3)收集患者临床资料,比较不同miR-92b、miR-320a表达水平患者的临床资料(性别、年龄、吸烟、组织学类型、肿瘤分期、淋巴结转移)。(4)采用COX比例风险模型分析分析影响NSCLC患者预后独立影响因素。

2 结果

2.1 肿瘤组织及癌周组织的miR-92b、miR-320a表达水平 肿瘤组织miR-92b表达水平为(2.23±0.42),高于癌周组织表达水平(1.27±0.17),差异有统计学意义(t=19.648,P=0.000);肿瘤组织miR-320a表达水平为(0.82±0.31),低于癌周组织表达水平(1.84±0.92),比较差异有统计学意义(t=9.743,P=0.000)。

2.2 不同miR-92b、miR-320a表达水平预后比较 以肿瘤组织中miR-92b、miR-320a表达水平P25值为分界分为低表达(22例)、高表达(64例)。miR-92b低表达患者术后3年累积生存率、平均生存时间分别为71.72%、(32.38±1.49)个月高于高表达患者的52.41%、(29.20±1.13)个月,差异有统计学意义(χ2=7.147、t=10.462,P=0.008、0.000),见图1。miR-320a低表达患者术后3年累积生存率、平均生存时间分别为39.64%、(26.04±2.26)个月,低于高表达患者的63.30%、(31.40±0.93)个月,差异有统计学意义(χ2=5.267、t=15.629,P=0.022、0.000),见图2。

图1 不同miR-92b表达水平对NSCLC患者预后影响的生存曲线

图2 不同miR-320a表达水平对NSCLC患者预后影响的生存曲线

2.3 不同miR-92b、miR-320a表达水平与临床病理比较 不同miR-92b、miR-320a表达水平患者性别、年龄、吸烟、组织学类型比较差异无统计学意义(P>0.05);不同miR-92b、miR-320a表达水平患者肿瘤分期、淋巴结转移比较差异有统计学意义(P<0.05),见表1。

表1 不同miR-92b、miR-320a表达水平与临床病理比较(%)

2.4 NSCLC患者预后影响因素分析 肿瘤分期、淋巴结转移、miR-92b、miR-320a表达水平为影响NSCLC患者预后独

立影响因素(P<0.05),其中肿瘤分期、淋巴结转移、miR-92b表达水平为独立危险因素,miR-320a为独立保护因素,见表2。

表2 NSCLC患者预后影响因素分析

3 讨论

NSCLC是以发病率高、死亡率高等为特点呼吸系统恶性肿瘤,占总肺癌患者的80%以上,是我国主要疾病负担之一,患者就诊时多为中晚期,预后通常较差,目前临床对其生存率预测的指标均存在一定局限性,因此探索多方面预测指标十分必要。随基因组学研究深入,发现恶性肿瘤发生、发展与癌基因的关联,而对mi-RNA作为癌症和其他病理学中重要调节剂的发现,大大扩大了肺癌管理的可能性[4]。miR-92b属于miR-106a-363基因簇成员,刘飞等[5]研究显示食管癌细胞中的miR-92b能通过调控组蛋白甲基转移酶zeste同源物增强子2基因表达水平抑制肿瘤细胞的增殖和侵袭及迁移能力,而王晓庚等[6]研究发现,miR-92b在淋巴结转移的口腔癌患者中异常高表达且表达水平与肿瘤分期密切相关。在本研究中,肿瘤组织的miR-92b表达水平均高于癌周组织(P<0.05),说明肿瘤组织中miR-92b呈现异常高表达,经比较发现不同miR-92b表达水平的NSCLC患者肿瘤分期分布及淋巴结转移情况有所差异,高表达患者通常肿瘤进展更快,TNM分期多集中于Ⅱ～Ⅲ期且多数伴随淋巴结转移。此外高表达患者术后3年累积生存率、平均生存时间分别为52.41%、(29.20±1.13)个月,预后明显较低表达患者的71.72%、(32.38±1.49)个月差,COX比例风险模型分析显示,miR-92b表达水平为NSCLC预后不良的独立危险因素(P<0.05),提醒miR-92b表达参与NSCLC疾病进展,早期检测其表达水平有助于预测预后,进行针对性疾病管理。

miR-320a是miRNA中一员,在多种恶性肿瘤中异常表达,研究显示其能通过调节PI3K/AKT、Wnt、STAT3等信号通路发挥肿瘤发展调节作用。吕晓婷等[7]研究发现miR-320a能通过阻滞肝癌细胞增殖周期发挥抑癌作用。本研究中,肿瘤组织的miR-320a水平低于癌周组织(P<0.05),且miR-320a低表达NSCLC患者疾病更严重,多伴随淋巴结转移,有更低的生存率,低表达患者术后3年累积生存率仅为39.64%,而平均生存时间为(26.04±2.26)个月,经COX比例风险模型分析显示,miR-320a表达水平为NSCLC预后不良的独立保护因素(P<0.05),推测miR-320a参与NSCLC肿瘤增殖、转移抑制过程,对患者诊断、治疗有指导作用。

综上所述,miR-92b在NSCLC患者中异常高表达,miR-320a异常低表达,二者与患者肿瘤分期、淋巴结转移相关联,均有作为预后预测指标的潜力。