HNF1β在输卵管妊娠黏膜中的表达及意义

王宇，李改改，张茜，张红兵，和娟

1山西迪安医学检验中心，太原 030032；2山西白求恩医院病理科，太原 030023

输卵管是最常见的宫腔以外妊娠部位，通常发生于输卵管壶腹部。输卵管妊娠导致的急腹症是女性最常见的病症之一，严重威胁女性的身体健康及生命安全[1-2]。关于输卵管妊娠的相关研究主要集中于临床保守治疗方面的探索，但其发生机制目前仍未可知[3]。本研究组在临床病理诊断工作中发现，在输卵管子宫内膜异位症患者中，异位的子宫内膜腺体HNF1β 呈阳性表达，而其旁的正常输卵管上皮缺失表达。受这一现象启示，我们猜想：输卵管妊娠时，输卵管上皮是否会模拟异位的子宫内膜出现HNF1β 表达？HNF1β 是否参与了输卵管妊娠的分子机制？本研究将通过免疫组织化学的方法，分别检测正常子宫内膜、输卵管上皮及输卵管妊娠组织中HNF1β 的蛋白表达情况，初步探讨HNF1β 在输卵管妊娠过程中的分子机制。

1 材料与方法

1.1 病例资料 收集2021 年6 月至2022 年5 月山西迪安医学检验中心病理诊断为输卵管妊娠的标本34例，同时收集同期育龄期女性正常输卵管组织20 例及增殖期子宫内膜组织14 例作为对照。所有病例均经2 位主治医师以上病理医师确诊。本研究符合伦理原则。

1.2 方法

1.2.1 病理制片及光镜观察 所有标本均经4%中性甲醛固定6～8 h，规范取材，组织经梯度酒精脱水、二甲苯透明、浸蜡、石蜡包埋，3 μm 厚切片，行HE染色。光镜观察。

1.2.2 免疫组织化学染色 试剂HNF1β（克隆号OTIR2E9）购自北京中杉生物有限公司。免疫组化染色采用美国罗氏公司全自动多功能组织病理检测系统（Bench Mark XT）制片。

1.3 免疫组织化学染色结果判定标准 参照文献判读标准[4]，HNF1β 阳性表达着色部位为细胞核，为棕黄色至棕褐色斑块状。染色结果由阳性细胞着色强度及百分率分别进行评分。细胞核着色强度评定：无着色为0 分，淡棕色为1 分，棕黄色为2 分，棕褐色为3 分；阳性细胞百分率由两位病理副主任级别以上医师分别计算并取平均值，高倍镜下（400×）随机取5 个不同视野，计数细胞总数及阳性细胞数，阳性细胞百分率评定：无阳性细胞为0 分，阳性细胞数≤10%为1 分，11%～50%为2 分，51%～75%为3 分，＞75%为4 分。将两项得分结果相乘：＞3 分为阳性（+）。

1.4 统计学方法 应用SPSS 21.0 统计软件进行统计分析，计数资料采用χ2检验，以P＜0.05 作为差异有统计学意义的标准。

2 结果

免疫组织化学染色结果显示，HNF1β 阳性表达部位为细胞核，在正常增殖期子宫内膜腺上皮中呈强阳性表达；在正常输卵管上皮中阴性；在输卵管妊娠组织中，HNF1β 出现异常表达。见图1。与正常输卵管上皮相比，输卵管妊娠中HNF1β 异常表达有统计学差异（P＜0.01），见表1；而与正常增殖期子宫内膜相比，HNF1β 的表达情况无统计学差异（P＞0.05），见表2。

表1 HNF1β在各组别间的表达 [例（%）]

表2 HNF1β在各组别间的表达 [例（%）]

图1 免疫组织化学染色结果

3 讨论

输卵管妊娠是最常见的临床急腹症之一，严重影响女性的健康与生命安全。有关输卵管妊娠的相关研究目前主要集中于保守治疗方面，尤其是甲氨蝶呤的临床应用[5-7]。而关于输卵管妊娠的分子机制方面的研究甚少，且更新缓慢。本研究组查阅Pubmed 官方网站，有关输卵管妊娠机制方面的文献仅63 篇，近5 年的文献仅有10 篇。因此，输卵管妊娠的机制研究成为临床亟待推进的问题。Refaat 等[8]的研究结果显示，维生素D（vitamin D，VD）相关分子及Ca2+传感受体（CaSP）在输卵管妊娠中出现异常表达，除VD 结合蛋白外，其他作用于VD 的相关蛋白酶的水平均出现下降。Wang 等[9]研究显示，肾上腺髓质素（adrenomedullin，ADM）在正常输卵管中为高表达状态，从而显著抑制巨噬细胞产生促炎因子IL-6及IL-8。在输卵管妊娠时，ADM 出现异常的缺失表达，将明显减弱对巨噬细胞的抑制作用，导致促炎因子IL-6、IL-8 水平升高，引发输卵管炎症反应，提示ADM 的缺失表达可能在输卵管妊娠过程中起重要的分子调节作用。Grudzinski 等[10]针对输卵管妊娠的研究结果显示，抗白细胞蛋白酶Elafin 在输卵管妊娠中出现低表达，可能与输卵管炎及输卵管妊娠的发生机制有相关性。而另一项有关Elafin 的研究结果显示[11]，与正常输卵管组织相比，输卵管妊娠组织中Elafin 蛋白水平及RNA 水平均出现明显上调。因此，有关输卵管妊娠的分子机制仍是临床亟待解决的科学问题。

肝细胞核因子-1β（hepatocyte nuclear factor-1β，HNF1β）基因位于17q12，是参与肝、肾、胰腺和苗勒氏管等多种组织发育的关键转录因子，又名转录因子2。该基因的杂合突变可导致青少年起病的成人型糖尿病（maturity-onset diabetes of the young，MODY）。HNF1β 基因在女性生殖器官畸形中的作用最早在1 个MODY 家族中被研究[12]。

临床病理工作中，HNF1β 在卵巢癌的诊断中起重要的辅助诊断作用，尤其是卵巢透明细胞癌和其他伴有透明细胞改变的卵巢癌的鉴别。有研究发现，HNF1β 在子宫内膜异位症上皮中表达。本研究组发现，发生于输卵管的子宫内膜异位症上皮表达HNF1β，定位于细胞核，而正常的输卵管上皮不表达HNF1β，这一现象启发我们：输卵管妊娠时，输卵管上皮是否会模拟子宫内膜上皮，出现HNF1β 的表达？HNF1β 是否参与了输卵管妊娠的发生？

本研究通过免疫组织化学的方法对输卵管妊娠组织进行了HNF1β 蛋白水平检测，结果显示，正常输卵管黏膜不表达HNF1β 蛋白，而输卵管妊娠时，输卵管上皮却呈现HNF1β 蛋白的核表达。本研究同时检测了人正常子宫内膜腺体中HNF1β 的表达情况，结果显示，HNF1β 在人正常子宫内膜腺体中表现为核表达。因此，输卵管妊娠时，输卵管黏膜中HNF1β 蛋白出现了与正常子宫内膜腺体相似的表达模式，这一研究结果提示，输卵管妊娠时，输卵管上皮模拟子宫内膜腺体，出现HNF1β 蛋白的异常表达。HNF1β 在输卵管上皮中的异常表达，可能是诱导受精卵着床，引发输卵管妊娠的分子事件。本研究结果为下一步针对输卵管妊娠的分子机制研究提供了理论基础。

利益冲突：所有作者均声明不存在利益冲突。