安徽省铜陵地区195 例宫颈癌患者宫颈癌组织15种高危人乳头瘤病毒基因检测分析

康敏，邢益祥，查风华，赵铁

安徽省铜陵市人民医院病理科，安徽铜陵 244000

宫颈癌（CC）是全球女性第二大最常见的癌症，仅次于乳腺癌，也是妇女癌症死亡的第四大原因［1］。近年来，安徽省内的CC发病率和病死率均呈上升趋势，年龄呈年轻化趋势［2］。2020 年11 月17 日，全世界在加速消除CC全球战略下，首次承诺共同努力消除CC［3］。CC 最常见的病理类型为宫颈鳞状细胞癌（SCC），其次是宫颈腺癌（ACC）、宫颈未分化癌（UCC）等，是目前惟一一种病因明确的肿瘤，即人乳头状瘤病毒（HPV）［4-5］。HPV 分高危和低危，其中高危HPV（HR-HPV）的持续感染是导致CC 发生发展的主要原因［6］。然而研究［7］表明，不同区域、检测方法对于不同年龄阶段及生活习惯的CC 患者HPV 感染阳性率、亚型及感染模式存在较大差异。本研究采用磁珠法提取安徽省铜陵地区195 例CC 患者癌组织的石蜡切片中的DNA，用基因扩增芯片技术对其进行15 种HR-HPV 基因分型的检测，并分析感染HR-HPV的亚型、模式及年龄分布。

1 材料与方法

1.1 材料 选取2020年2月—2022年12月在铜陵市人民医院就诊并经病理科诊断的195 例CC 患者癌组织的石蜡标本，均来自安徽省铜陵市所有市县。所有病理切片均经2 位高年资病理医生按照第5 版WHO（2020 年）子宫颈肿瘤诊断标准独立阅片确认。195 例CC 患者中，年龄25～85（53.67 ±11.22）岁，其中25～30 岁2 例、31～35 岁5 例、36～40 岁14 例、41～45 岁19 例、46～50 岁41 例、51～55岁49 例、56～60 岁20 例、61～65 岁12 例、65 岁以上33例；病理类型为SCC 164例，ACC 24例，UCC 7例；全部病例均符合纳入标准，即术前未进行放疗、化疗，标本蜡块保存完整，大小合适且含有足量的病变组织。本研究经医学伦理委员会审批通过，患者对本次研究知情并签署同意书。

1.2 主要仪器与试剂 石蜡切片DNA 提取试剂盒（磁珠法）购自硕士生物科技股份有限公司，HRHPV 基因分型检测试剂盒购自上海之江生物科技股份有限公司，全自动核酸提取仪9600A 型号购自江苏硕士生物科技股份有限公司生产，基因扩增仪SLAN965型号购自上海宏石医疗科技有限公司。

1.3 195 例CC 患者癌组织的石蜡切片HR-HPV 检测 DNA 的提取：采用磁珠法。手术刀去除多余的石蜡，切取一片10 μm 厚的切片，转移至1.5 mL 离心管；加入160 μL 蜡剂，激烈涡旋样本管10 s，56 ℃温浴3 min；然后加入180 μL 缓冲液AL 和20 μL 百酶K 至样品中，涡旋重悬样品，低速瞬时离心；56 ℃水浴60 min直到样品完全消化，90 ℃水浴60 min，低速瞬时离心；将消化液全部加入到试剂板AT 的第1列中，将加入样本的试剂板AT 放置在核酸提取仪中，试剂板AT的缺口朝外；最后插入八联磁棒套，关上试验仓，按下设置核酸提取程序，并选择运行；PCR 扩增及HPV 分型检测严格按照说明书进行检测操作，可检出15 种HR-HPV，包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68、82。分析入选对象感染模式，感染模式分为单一感染和混合感染（两种及以上的HR-HPV 感染）。另分析感染HR-HPV患者的年龄分布。

2 结果

2.1 CC 患者感染HR-HPV 模式 195 例CC 患者中，感染HR-HPV 186 例（阳性率95.38%），其中单一感染率为41.40%、混合感染率为58.60%；164 例SCC 患者中，单一感染率和混合感染率分别为43.40%、56.60%；24 例ACC 患者中，单一感染率和混合感染率分别为27.27%、77.27%；7 例UCC 患者中，单一感染率和混合感染率分别为40.00%、60.00%。

2.2 CC 患者感染HR-HPV 亚型 186 例感染HR-HPV 的CC 患者中，感染亚型位于前四位的分别是HPV16、HPV18、HPV66、HPV39，单一感染率分别为34.94%、9.30%、2.78%、5.88%，混合感染率分别为65.06%、90.70%、97.22%、94.12%。

2.3 CC 患者感染HR-HPV 年龄分布 CC 患者年龄均>25 岁，三个年龄高峰分布分别为46～50 岁、51～55 岁、>65 岁，感染率分别为97.56%、91.84%、100%，其中单一感染率分别为47.50%、37.78%和36.36%，混合感染率分别为52.50%、62.22% 和63.64%。

3 讨论

CC虽然严重威胁着女性健康和生存率，然而却是惟一一个可以明确病因的恶性肿瘤［4］。已有研究表明，90%以上的CC 都伴随着HPV 感染，70%的浸润性宫颈癌与HPV16、18 等HR-HPV 的持续感染相关，因此CC 被认为是感染性疾病［5-6］。然而我国地域辽阔，不同地区CC 的HPV 感染亚型不尽相同，且同一地区不同的检测方法、不同的研究对象也会导致研究结果不尽相同［7］。研究［8］表明，中国CC 患者最常见的感染亚型是HPV16型、HPV18型及HPV31型。而我国华东地区宫颈鳞状细胞癌感染亚型主要是HPV58，其次是HPV16、HPV18［9］；西部地区CC 患者主要感染亚型是HPV16、HPV18［10］。本研究对象CC 患者均来自铜陵地区所有市县，而我院是本市最大地级市综合三甲医院，妇科肿瘤的主要收治单位，故能较客观、真实、全面反应铜陵市CC 患者HPV 感染情况。本研究表明，195 例CC 患者中SCC 患者有164 例，占比84.10%，HR-HPV 总感染率95.38%，其中混合感染率占58.60%，感染的HR-HPV 亚型前四位是HPV16、HPV18、HPV66、HPV39，其单一感染率分别为34.94%、9.30%、2.78%、5.88%，混合感染率分别为65.06%、90.70%、97.22%、94.12%。以往研究［11］表明，安徽地区健康体检女性HPV 感染主要亚型分别为HPV52、HPV16、HPV53 和HPV18，而CC患者HPV 感染以HPV16、18、58型为主［12］，铜陵地区健康女性体检HPV 感染亚型分别为HPV16、HPV52、HPV58［13］。本研究结果与过往研究结果有些不同，可能与地域的差异、研究对象及研究方法的不同有关。目前全世界范围内上市的三种HPV 疫苗分别为二价HPV 疫苗（含HPV16、18）、四价HPV疫苗（含HPV16、18、11、6）和九价HPV 疫苗（含HPV16、18、6、11、31、33、45、52、58），三种疫苗均不包括本地区CC 患者最常见感染亚型的HPV66、39，后期科研者可针对本地区特殊HR-HPV 感染亚型制定特定地区第二代预防性疫苗及研发治疗性疫苗。

本研究还发现，铜陵地区CC患者年龄分布高峰分别为46～50 岁、51～55 岁和>65 岁，HPV 感染率分别为97.56%、91.84%和100%，其中单一感染率分别为47.50%、37.78%和36.36%，混合感染率分别为52.50%、62.22%和63.64%，由此可见，CC 年龄分布主要集中在围绝经期及绝经后老年妇女（>65 岁），且以混合感染为主。与以往研究［14］的宫颈上皮内病变及CC 患者年龄分布高峰主要在40～44岁和55～59 岁基本相符。原因可能是围绝经期女性性激素不稳定导致其生理功能紊乱，免疫功能低下有关［15］，>65 岁的老年女性身体机能退化，退休后生活闲适，性生活活跃，导致HPV 持续感染或者再次活跃。本铜陵地区CC 患者感染HR-HPV 的模式以混合感染为主，以往的研究［16-18］亦表明，多重HR-HPV 感染导致宫颈病变加重的风险高于单型别HPV 感染，增加了CC 前病变的发生及癌变风险，原因可能是多重感染有利于HPV 整合宿主细胞，并推测多重HPV 感染有望成为以HPV 为基础的CC 筛查的风险识别因素，笔者推测多重HPV 感染更易导致CC可能与免疫抑制有关，此推测有待后期进一步研究证实。由于我国推荐接种HPV 疫苗年龄为9～45岁，根据本研究结果，相关部门应重视围绝经妇女（>45 岁）及老年妇女（>65 岁）CC 筛查的力度，对于混合感染者应给予特别关注。

总之，铜陵地区CC患者HR-HPV 感染模式为混合感染，以HPV16、HPV18、HPV66、HPV39 亚型为主，好发年龄阶段为46～50 岁、51～55 岁、>65 岁。建议本区加强对围绝经期妇女及>65 岁老年女性的CC 筛查，临床医生对于此类人群多重HR-HPV 感染的部分应加强关注，防止进一步发展为CC，同时针对本研究结果，有关部门可考虑针对此类人群及感染HR-HPV 亚型，研发针对性的特定地区第二代预防性疫苗，或者是治疗疫苗。