HLA-DRB1,DQB1多态性联合CA-199检验大肠癌对血清AST,ALT水平变化的影响

朱秀梅,魏 锋,2*

(1.吉林大学校医院,吉林 长春130012;2.吉林大学第一医院,吉林 长春130021)

大肠癌属于恶性肿瘤,在临床较为常见,现阶段仍未明确其发病原因,主要发病部位在直肠、结肠及盲肠,会严重威胁患者生命安全,且呈老龄化的发病趋势[1]。给予大肠癌早期诊断并实行针对性治疗,可保证患者生命安全,有效提升患者生存质量[2]。HLA系统有介于功能的共显性及多基因座的等位基因,参与和介导机体的外来抗原靶细胞破坏、免疫应答与调控及抗原识别与提呈等过程,还关联肿瘤消长及疾病易感性[3]。糖类抗原19-9(Carbohydrate antigen 19-9,CA-199)在进行大肠癌诊断及临床治疗方面发挥着重要作用,但单项检查的阳性率较低,需探析更加完善的检测方法[4]。天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、丙氨酸氨基转移酶(amine aminotransferase,ALT)是给予疾病诊断的重要指标[5]。因此,本次研究选取100例大肠癌患者作为观察对象,分析HLA-DRB1,DQB1多态性联合CA-199检验对血清AST,ALT水平变化的影响,现汇报如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象

回顾性分析我院2020年6月-2022年6月收治的100例大肠癌患者作为研究组,其中男性57例,女性47例,年龄34～69岁,平均(52.35±2.48)岁,体重57～76 kg,平均(66.24±2.14)kg;另选同期收治的100名健康体检者作为对照组,其中男性58例,女性42例,年龄35-68岁,平均(52.61±2.53)岁,体重57～75 kg,平均(65.83±2.25)kg。运用统计学方法对比两组患者一般资料,因素存在可比性,但均无统计学意义(P>0.05)。

上述纳入对象均符合以下纳入标准:(1)所有患者经病理检查均符合直肠癌诊断标准[6];(2)年龄≥18岁;(3)具备清晰认知及良好理解能力者;(4)患者与家属自愿参与本次调查研究;(5)此研究经医院伦理委员会批准。排除标准:(1)合并全身感染性疾病及自身免疫系统疾病者[7];(2)合并心、肝、肾等严重脏器病变者;(3)合并严重精神疾病者;(4)不具备完整临床资料者;(5)孕妇或哺乳期;(6)中途因各种原因退出比赛者。

1.2 方法

HLA基因测定:以用聚合酶链反应-序列特异性引物(Polymerase chain reaction sequence specific primer,PCR-SSP)方法进行HLA基因检测。选用试剂:DNA快速提取试剂盒,北京普信瑞生物技术有限公司生产的PCR-SSP反应板,美国Promega公司提供的Taq酶、蛋白酶K。PCR产物检测试剂:北京海强生物技术公司生产的2%琼脂糖,溴化乙锭(EB)。选用仪器:PCR扩增仪、ECP3000电泳仪、小型高速离心机及旋涡混合器。

于两组患者入院空腹24 h内抽取6 mL静脉血,快速离心取上清液,采用上海斯欧医疗器械有限公司生产的全自动化学发光免疫分析仪及其配套试剂进行CA199水平检测。

血清AST、ALT水平变化情况:按照说明书使用ACE自动生化仪、RANDOX试剂对两组患者血清AST、ALT水平进行检测。

1.3 观察指标

①选用玻璃奶试剂盒纯化PCR-SSP增加产物,选用ABI Prism 310检测HLA关联基因。②采用全自动化学发光免疫分析仪及其配套试剂进行CA199水平检测。③血清AST、ALT水平变化情况:使用ACE自动生化仪、RANDOX试剂对两组患者血清AST、ALT水平进行检测。

1.4 统计学处理

2 结果

2.1 两组HLA-DRB1等位基因分布情况比较

研究组较对照组明显增高HLA-DRB1*0901等位基因分布频率(P<0.05),见表1。

表1 两组患者HLA-DRB1等位基因分布情况比较

2.2 两组HLA-DQB1等位基因分布情况比较

研究组较对照组明显降低HLA-DQB1*080X等位基因分布频率(P<0.05),见表2。

表2 两组患者HLA-DQB1等位基因分布情况比较

2.3 两组CA19-9水平比较

研究组较对照组明显升高CA19-9水平,组间差异明显(P<0.05),见表3。

表3 两组患者CA19-9水平比较

2.4 两组血清AST、ALT水平变化情况比较

研究组较对照组明显降低血清AST、ALT水平,组间差异明显(P<0.05),见表4。

表4 两组患者血清AST、ALT水平变化情况比较

3 讨论

大肠癌属于一类恶性肿瘤,发病率位居第三位,仅比肺癌及胃癌发生率低,早期症状不明显,在确诊后已发展至中晚期,情况严重下还可能发生转移,导致最佳治疗时机延误[8-9]。伴随我国逐年升高大肠癌发病率,需尽早诊断疾病,探寻安全、便捷及可靠的检测方法,尽早发现疾病,确保患者治愈率[10]。现阶段,大肠癌遗传易感性关联HLA等位基因的报道较少。相关研究[11]表明,HLA-DRB1、DQB1等位基因未关联高加索人大肠癌。新陈代谢过度活跃会在体细胞癌变过程中导致改变细胞表明糖蛋白,伴有升高肿瘤细胞表面糖类抗原,CA19-9为常见肿瘤标志物,该肿瘤标志物对单一肿瘤特异性不足,会伴有多种肿瘤标志物异常表达[12-13]。相关研究[14]表明,大肠癌中CA19-9是一种糖蛋白混合物,属于较高的肿瘤标志物表达,存在着较高的分子量,由正常人胰腺、胃、子宫内膜、结肠、胆管细胞及唾液腺上皮合成,在血清中的存在形式为黏蛋白,可经肝脏代谢低表达于组织中。CA19-9可联合其他检测方法,提升临床诊断敏感性,用于早期诊断[15-16]。血清AST、ALT水平是给予大肠癌疾病诊断的关键指标,可将肝脏疾病的具体表现反映出,ALT是于机体组织细胞中存在,特别是居中于肾脏、心肌及脑组织中,AST是于心肌组织中存在,特别位于骨骼肌、肾脏及肝脏等组织中,AST、ALT均属于非特异性细胞内功能酶,保持高水平状态时代表机体损伤肝细胞[17-18]。

本研究结果显示,研究组较对照组增高HLA-DRB1*0901等位基因分布频率,降低HLA-DQB1*080X等位基因分布频率(P<0.05),可见,HLA-DRB1*0901正关联大肠癌,HLA-DQB1*080X负关联大肠癌。HLA-DRB1、DQB1等位基因分别吻合基因库相应等位基因第2外显子碱基顺序[19-20]。本研究选用的介入阳性内参照的PCR/SSP,可预防以往无质控时给予HLA等位基因纯合子的检测不准确性,RCR产物不需酶切,可电泳判定结果,保证便捷操作。本研究结果显示,研究组较对照组明显升高CA19-9水平,降低血清AST、ALT水平(P<0.05)。可见,大肠癌患者血清CA-199表达高于健康体检者,血清AST、ALT表达低于健康体检者,可用于早期筛查直肠癌,且筛查方法便捷,无创,可在大肠癌筛查中获得广泛应用。

综上所述,HLA-DRB1*0901正关联大肠癌,HLA-DQB1*080X负关联大肠癌,联合CA-199检验的诊断价值较高,可准确判断血清AST、ALT水平,具有临床推广意义。