郑州地区表观健康人群sdLDL-C生物参考区间的建立与验证*

刘凤珍,郭凤霞,毋小玉,魏晓霞,崔发财

河南省人民医院检验科,河南郑州 450003

冠心病(CHD)是世界范围内引起人类死亡的主要原因,而动脉粥样硬化是导致CHD发生的主要危险因素[1]。小而密低密度脂蛋白胆固醇(sdLDL-C)属于低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)亚型,它与低密度脂蛋白(LDL)受体亲和力低且不易被降解代谢,在循环系统中停留时间长且易被氧化,因此更易渗入动脉血管壁堆积并介导泡沫细胞的形成[2],参与动脉粥样硬化过程。多项研究结果表明,体内高sdLDL-C水平与CHD的发病风险密切相关,且sdLDL-C检测的敏感性高于传统的LDL-C检测[3-4]。sdLDL-C检测方法众多,不同试剂厂家提供的参考区间存在差异,参考区间的不适用将会对患者的诊断和治疗造成影响。截至目前,国家卫生健康委员会已陆续更新、发布了10个部分的《临床常用生化检验项目参考区间》行业标准,但sdLDL-C参考区间尚未包含在内。为此,本研究拟采用过氧化物酶法检测郑州地区表观健康人群血清sdLDL-C活性值,并初步建立和验证适合本地区的参考区间。

1.1一般资料 随机选取2019年6月至2022年6月在本院特需中心体检健康的785例成年人为研究对象1,用于建立血清sdLDL-C活性值参考区间,其中男性18～<30岁70例,30～<40岁74例,40～<50岁64例,50～<60岁84例,≥60岁77例;女性18～<30岁87例,30～<40岁94例,40～<50岁97例,50～<60岁78例,≥60岁60例。将其按照性别和年龄(18～<30岁、30～<40岁、40～<50岁、50～<60岁和≥60岁)进行分组。另选取2022年8月在本院特需中心体检健康的100例成年人为研究对象2,用于验证新建立的血清sdLDL-C活性值参考区间。纳入标准:健康人群分布覆盖郑州市六区六县且居住1年以上,血压正常,体质量指数(BMI)18.5～<23.9 kg/cm2,血常规、尿常规、血脂和血糖均正常,胸部X线片或胸部CT、心电图及B超检查均正常。排除标准:有吸烟史、饮酒史、糖尿病史、家族遗传病史和慢性病史,既往或目前患心脑血管疾病、肾脏疾病、内分泌系统疾病、消化系统疾病、代谢和营养性疾病、风湿性疾病。本研究经本院医学伦理委员会审批通过[审批号:(2020)伦审第76号]。

1.2仪器与试剂 血清sdLDL-C活性值检测试剂盒及配套校准品和质控品均购自宁波美康生物科技股份有限公司,检测仪器为ABBOTT ARCHITECT c16000全自动生化分析仪。

1.3方法

1.3.1标本采集及检测 采集所有研究对象空腹8 h外周静脉血3 mL于含分离胶无抗凝剂的真空采血管中,2 h内离心(2 980×g,5 min)并分离血清,保存于-80 ℃超低温冰箱。样本检测前应确保检测系统处于在控状态,采用过氧化物酶法检测健康体检者血清sdLDL-C活性值。

1.3.2参考区间的建立和验证 根据美国临床实验室标准化协会(NCCLS)C28-A2文件《医学实验室参考区间的定义、建立和确认》[5]进行参考区间的建立,收集研究对象1血清sdLDL-C活性值数据,采用狄克逊(Dixon)检验法剔除离群值,对有效数据进行正态性检验并计算95%CI。根据WS/T 402-2012文件《临床实验室检验项目参考区间的制定》[6]进行参考区间验证,检测研究对象2血清sdLDL-C活性值,以新建参考区间内样本数与总样本数比值为比率值(R),R≥0.90判定参考区间验证合格。

2 结 果

2.1正态性检验 K-S法检验结果显示,郑州地区表观健康人群血清sdLDL-C活性值服从正态分布(P>0.05),进一步按照性别和年龄进行分组后,各组血清sdLDL-C活性值也均服从正态分布(P>0.05)。

2.2血清sdLDL-C活性值的性别及年龄组间比较 男性表观健康人群血清sdLDL-C活性值显著高于女性(P<0.01),提示需按照性别设置参考区间。单因素方差分析结果显示,女性各年龄组间血清sdLDL-C活性值比较,差异无统计学意义(P>0.05)。男性各年龄组间血清sdLDL-C活性值比较,差异有统计学意义(P<0.05)。男性18～<50岁各年龄组间sdLDL-C活性值比较,差异无统计学意义(P>0.05),但显著高于≥50岁各年龄组sdLDL-C活性值(P<0.05),提示男性需按照18～<50岁和≥50岁设置参考区间。见表1。

表1 不同年龄的表观健康成年人血清sdLDL-C活性值比较

2.4血清sdLDL-C活性值参考区间的验证 100例健康人群中,有98例的血清sdLDL-C活性值在新建立参考区间内,有2例超出参考区间,R=0.98>0.90,参考区间验证合格。

3 讨 论

LDL-C是临床用于预防CHD高风险人群发病的首选干预指标[7],然而近年研究报道,部分CHD患者发病前LDL-C水平未见异常,另有部分CHD高风险人群通过饮食或药物治疗降低体内LDL-C水平后,CHD事件发生风险仍未降低[8-9]。因此,单纯的LDL-C检测并不能完全反映CHD患者真实的血脂水平。sdLDL-C属于LDL-C亚型,多项研究显示sdLDL-C水平与CHD发病风险密切相关[10-12],其作为预测和评估CHD发病风险的指标比LDL-C更敏感,已被美国国家胆固醇教育计划成人治疗组列入新发现的主要心血管疾病危险因素之一。目前,越来越多的实验室已经开展了sdLDL-C检测,过氧化物酶法具有操作简便、检测时间短、易于大批量样本检测等优点,已成为常用的检测方法,然而基于该方法的各试剂厂家提供的sdLDL-C参考区间存在差异,且厂家建立参考区间时纳入的研究对象受地域限制,不具有代表性。为了更好地发挥sdLDL-C的临床应用价值,建立适合本地区的 sdLDL-C参考区间尤为重要。

本研究结果显示,血清sdLDL-C活性值在郑州地区表观健康人群中呈正态分布,男性整体高于女性,女性不同年龄段间血清sdLDL-C活性值差异无统计学意义(P>0.05),男性18～<50岁的3个年龄组间sdLDL-C活性值差异无统计学意义(P>0.05),但显著高于≥50岁各年龄组sdLDL-C活性值,提示男性需按照18～<50岁和≥50岁分段设置参考区间。根据数据分析结果,本研究初步建立了郑州地区表观健康人群血清sdLDL-C活性值参考区间,并参考WS/T 402-2012文件进行了参考区间的验证。我国目前已建立sdLDL-C活性值参考区间的地区有成都[13]、兰州[14]和呼和浩特[15],其研究结果均表明sdLDL-C活性值在人群中的分布具有性别差异,男性整体均值高于女性,这与本研究结果一致。然而sdLDL-C活性值在表观健康人群中的分布状态以及在各年龄段间的差异性表现与上述地区存在差异,这可能与地域、气候环境及生活习惯等因素有关,也可能与纳入研究的样本量有关,后续笔者将进一步扩大样本量进行验证,同时本研究结果也有待得到本地区其他医疗机构的验证。

综上所述,本研究初步建立和验证了郑州地区表观健康人群血清sdLDL-C活性值参考区间,有助于筛查心脑血管疾病高风险人群,便于临床采取有效的干预手段来降低心脑血管疾病的发生率和病死率。