外周血单个核细胞Toll样受体4和B淋巴细胞刺激因子表达水平与IgA肾病患者临床指标的关系

邓曙鹏

湖南省郴州市第三人民医院肾脏风湿免疫科,郴州市 423000

肉眼血尿或伴蛋白尿是免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)A肾病的一种常见临床表现。IgA肾病进展为终末期肾病的风险高,确诊后5年内有5%～15%的患者进展为终末期肾病,20年内有10%～50%的患者进展为终末期肾病[1-2],严重影响患者的生活质量和生命健康。当前,IgA肾病的发病机制尚不完全明确[3]。Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)在免疫反应和炎症性疾病中有重要作用,而且参与IgA肾病的发生发展[4]。B淋巴细胞刺激因子(B lymphocyte stimulator,BLyS)是肿瘤坏死因子超家族的成员,与B淋巴细胞表面受体结合后,可诱导其增殖分化并分泌Ig,后者在体液免疫中起重要作用[5-6]。BLyS的异常表达可致自身免疫性疾病[7]。本研究探究IgA肾病患者外周血单个核细胞TLR4和BLyS表达与临床指标的相关性,现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2017年5月至2022年5月我院收治的122例IgA肾病患者作为研究对象。纳入标准:(1)符合IgA肾病的诊断标准[8];(2)经肾穿刺活检确诊;(3)肾穿刺活检前均未使用糖皮质激素或免疫抑制剂;(4)临床资料完整。排除标准:(1)伴有其他继发性肾病;(2)存在各种原因引发的急性肾损伤。本研究符合《赫尔辛基宣言》,获研究对象签署的研究知情同意书,经我院医学伦理委员会审查批准。

1.2 方法

1.2.1 资料收集 收集所有患者的年龄、性别、病程(从出现肾病症状或确诊至肾穿刺活检时)、收缩压、舒张压、高血压史、肉眼血尿史、尿红细胞计数、24 h尿蛋白定量、血清白蛋白、总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白(low-density lipoprotein,LDL)、血尿酸、血肌酐、尿素氮和红细胞沉降率(erythrocyte sedimentation rate,ESR),以及外周血单个核细胞TLR4和BLyS表达水平。高血压定义为既往存在2次或以上收缩压≥140 mmHg和(或)舒张压≥90 mmHg,目前正服用降压药。肉眼血尿定义为肉眼可直接观察的血样、浓茶样或洗肉水样尿,同时排除急性泌尿系统感染、泌尿系统恶性肿瘤或结石等引发的血尿。外周血单个核细胞TLR4和BLyS表达水平经2位病理科医师独立诊断,最终诊断经所有研究人员参与讨论后确定。

1.2.2 经皮肾活检 患者保持俯卧位,在B超引导下于右肾下极经皮肾穿刺获取肾组织。石蜡包埋,切片厚度2～3 μm,常规染色;冰冻切片厚度4～5 μm,对1 mm3以下的肾组织进行预处理后制作超薄切片,并进行光学显微镜、免疫荧光和电镜检查。肾脏病理的诊断是经2位病理科医师独立诊断,如果出现意见分歧,由第三位病理科医生参与诊断,最终诊断经所有研究人员参与讨论后确定。

1.2.3 外周血单个核细胞TLR4和BLyS表达水平的检测 抽取静脉血液前告知所有研究对象禁食禁水,次日清晨由专人抽取 8 mL静脉血液,注入血肝素抗凝,采用离心机(北京海富达科技有限公司,型号PPT10-SS)离心5 min,混入适量氯化钠,应用Ficoll分离液获得单个核细胞。应用实时荧光定量PCR仪(安捷伦科技有限公司,型号SureCycler 8800)检测TLR4表达水平,应用酶标仪[美谷分子仪器(上海)有限公司,型号SpectraMax iD3]检测BLyS表达水平。TLR4试剂盒(货号:fs-E3898)购自上海抚生实业有限公司,BLyS试剂盒(货号:mlsw_E1135)购自上海酶联生物科技有限公司。

1.2.4 分组标准 根据患者外周血单个核细胞TLR4表达水平将其分为低TLR4水平组(TLR4<12.06)和高TLR4水平组(TLR4≥12.06)。比较两组患者临床指标,并分析外周血单个核细胞TLR4表达水平与IgA肾病患者临床指标的关系。根据患者外周血单个核细胞BLyS表达水平将其分为低BLyS水平组(BLyS<122.09 ng/L)和高BLyS水平组(BLyS≥122.09 ng/L)。比较两组患者临床指标,并分析外周血单个核细胞BLyS表达水平与IgA肾病患者临床指标的关系。

1.3 统计学处理 采用SPSS 20.0软件对数据进行统计分析。计量资料以(x±s)表示,两组间均数的比较采用独立样本t检验。计数资料以例数和百分数表示,比较采用χ2检验。相关性分析采用Pearson相关性分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 不同外周血单个核细胞TLR4表达水平的IgA肾病患者临床指标的比较 低TLR4水平组和高TLR4水平组的性别、收缩压、高血压史、LDL、血尿酸、血肌酐和尿素氮差异均有统计学意义(均P<0.05),见表1。

2.2 IgA肾病患者外周血单个核细胞TLR4表达水平与临床指标的相关性 IgA肾病患者外周血单个核细胞TLR4表达水平与收缩压、LDL、血尿酸和血肌酐水平均呈正相关(均P<0.05),见表2。

表2 IgA肾病患者外周血单个核细胞TLR4表达水平与临床指标的相关性

2.3 不同外周血单个核细胞BLyS表达水平的IgA肾病患者临床指标的比较 低BLyS水平组和高BLyS水平组的性别、收缩压、高血压史、LDL、血尿酸、血肌酐和尿素氮差异均有统计学意义(均P<0.05),见表3。

表3 不同外周血单个核细胞BLyS表达水平的IgA肾病患者临床指标的比较

2.4 IgA肾病患者外周血单个核细胞BLyS表达水平与临床指标的相关性 IgA肾病患者外周血单个核细胞BLyS表达水平与收缩压、LDL、血尿酸和血肌酐水平均呈正相关(均P<0.05),见表4。

表4 IgA肾病患者外周血单个核细胞BLyS表达水平与临床指标的相关性

3 讨 论

TLR如同天然免疫的眼睛,监视与识别各种不同的疾病相关分子模式,是机体抵抗感染性疾病的第一道屏障,参与机体天然免疫的调控,也是连接非特异性免疫和特异性免疫的桥梁。天然黏膜免疫异常与IgA肾病的发生和发展相关:黏膜免疫异常可能导致黏膜抗原清除障碍,使得炎症慢性化并持续分泌IgA[9]。在IgA肾病患者的外周血单个核细胞中,TLR4相对表达水平上调[10]。TLR4被激活后可导致IgA1异常糖基化,可能通过激活核因子-κB和独立的MyD88信号转导途径参与IgA肾病的发生[11-12]。IgA肾病的病理涉及B细胞活化和肾脏异常糖基化IgA1沉积:BLyS是B细胞活化的关键因子,可诱导B细胞增殖分化,分泌Ig,参与体液免疫[13],血清BLyS水平和IgA肾病患者肾小球组织病理学特征显著相关,BLyS可影响IgA1铰链区O-糖基化的过程,导致异常糖基化IgA1大量生成、堆积[14]。本研究探究IgA肾病患者外周血单个核细胞TLR4和BLyS表达与临床指标的相关性。

本研究结果显示,低TLR4水平组、低BLyS水平组的男性患者占比、合并高血压史患者占比、收缩压、LDL、血尿酸、血肌酐和尿素氮水平均低于高TLR4组、高BLyS水平组。进一步行Pearson相关性分析后,结果显示,IgA肾病患者外周血单个核细胞TLR4、BLyS表达水平与收缩压、LDL、血尿酸、血肌酐水平均呈正相关。TLR4是一种I型跨膜蛋白,广泛分布于心肌细胞、单核细胞、血管内皮细胞,可与其配体结合,促进核因子-κB的核转位,进而参与免疫炎症反应、血管内皮损伤,最终影响血压[15-16]。有研究结果显示,高度氧化糖化LDL可通过髓样分化蛋白2的介导,诱导TLR4-MyD88和TLR4-NOX4信号通路的激活[17]。TLR4是炎症反应的关键上游调控因子,可增强肾脏中的炎症信号传导,促进病情的进展,进而影响患者肾功能[18];而血尿酸和血肌酐水平是评估肾功能的重要指标。BLyS属于肿瘤坏死因子家族,BLyS的生成失调可能有助于诱导异常的单核/巨噬细胞活化,导致某些炎症性自身免疫性疾病[19],进而影响血压水平[20]、脂质代谢[21]和肾脏功能。

综上所述,外周血单个核细胞TLR4和BLyS表达与IgA肾病患者收缩压、LDL、血尿酸、血肌酐水平存在相关性。