卡瑞利珠单抗结合DSOX方案对晚期胃癌患者血清BARD1、TAP表达的影响

杨为彬 史经汉 朱硕 胡楠

(徐州市肿瘤医院,江苏 徐州 221005)

胃癌是全球高发和最常见的消化系统恶性肿瘤,我国患者可占世界50%,手术治疗是早期患者治疗的主要办法,手术治疗对晚期患者意义不大〔1〕。临床中主要治疗方法为化疗,但是其具有较大的不良反应,而且具有较差预后和耐受性,患者常进行姑息治疗,有效治疗方案较少。多西他赛+奥沙利铂+替吉奥(DSOX)化疗是临床上对该病的治疗方案之一,但单独采用该方法治疗效果不尽如人意〔2〕。恶性肿瘤中免疫逃逸是其重要机制,程序性细胞死亡受体(PD)-1,是先天免疫应答抑制剂,对T细胞活性有调控作用〔3〕。T细胞应答会伴随PD-1表达抑制增强,研究表明,PD-1抑制剂存在抗肿瘤作用,卡瑞利珠单抗便是PD-1抑制剂之一,对 T细胞有激活作用,产生抗肿瘤作用〔4〕。但是卡瑞利珠单抗用于胃癌治疗较少,乳腺癌肿瘤易感基因(BRCA)1相关环指结构域蛋白(BARD)1 是BRCA1的主要结合蛋白,BARD1 可与 p53 结合进而造成肿瘤细胞凋亡〔5〕。近年来,对BARD1 基因进行选择性剪切可产生截短BARD1 亚型过程在多种癌症中被发现,其表达与疾病进展有关。肿瘤异常蛋白(TAP)是细胞 DNA 受损的修复基因,其与肿瘤细胞的耐药性存在联系。本研究探讨卡瑞利珠单抗结合DSOX方案对胃癌患者BARD1、TAP表达的影响。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2019年1月至2021年6月在徐州市肿瘤医院就诊的晚期胃癌患者116例,按照随机数字表分为对照组和观察组各58例。男59例,女57例,年龄55～65岁,平均(61.17±6.11)岁;肿瘤直径4～8 cm,平均(6.32±0.58)cm;肿瘤部位:胃上部33例,胃中部47例,胃下部36例;TNM分期:Ⅲ期84例、Ⅳ期32例;美国东部肿瘤合作组(ECOG)评分0～2分,平均(1.43±0.33)分。纳入标准:(1)年龄19～79岁;(2)纳入符合《胃癌治疗指南》〔6〕胃癌诊断标准的患者;(3)患者无法接受手术治疗,只能接受化疗等其他非手术方法治疗;(4)患者经病理和超声胃镜确诊为胃癌,TNM分期为Ⅲ、Ⅳ期;(5)患者签订知情同意书;(6)患者临床资料完整;(7)生存时间预计≥3个月。排除标准:(1)无可测量的实体病灶者;(2)不愿意进行临床试验的患者;(3)伴有严重急慢性感染性疾病,精神疾病的患者;(4)存在合并其他恶性肿瘤者;(5)存在肝、肾、心等重要脏器功能不全患者。两组性别构成、年龄、肿瘤直径无统计学差异(P>0.05)。本研究经医院伦理委员会批准,患者知情并签署同意书。

1.2治疗方法 两组均进行DSOX方案化疗:治疗第1天静脉应用75 mg/m2多西他赛,130 mg/m2奥沙利铂,两组1～14 d口服40 mg/m2替吉奥胶囊,每2 d服用1次。进行80 d治疗。观察组加用静脉注射200 mg注射用卡瑞利珠单抗(批号201907003A,规格200 mg/支),连续注射40 d。两组化疗前后为预防恶心,静脉注射阿扎司琼并且加用碳酸氢钠注射液。进行血常规检查,1次/w,对于粒细胞减少者皮下注射重组人粒细胞集落刺激因子,低血红蛋白患者进行红细胞悬液静脉注射,血小板过低患者进行血小板静脉注射,感染患者应用敏感抗生素进行治疗。

1.3评估标准 ①治疗结束后根据靶病灶动脉期增强显影直径大小标准对患者疗效进行评价。进展(PD)为患者出现1个或以上新发病灶,或者显影直径增大>25%;部分缓解(PR)为患者显影直径缩小>35%;稳定(SD)为患者显影直径减少≤35%或增大<25%;完全缓解(CR)为患者全部淋巴结短直径减少至1 cm以内,显影消失。总有效率=(CR+PR+SD)/总例数。②肿瘤标志物水平检测,收集患者治疗前后静脉血,离心收集上清液,采用化学免疫发光法对糖类抗原(CA)125、CA199、血清癌胚抗原(CEA) 水平进行检测,试剂盒由上海酶联生物科技有限公司提供。③收集患者血液静置后离心10 min,分离血清后立即于-80 ℃下保存,提取血清RNA,取1 μg总RNA为模板,逆转录合成cDNA,进行qPCR,反应条件:95 ℃预变性10 min,随后进行40个循环的95 ℃变性15 s,60 ℃退火30 s,之后72 ℃延伸10 s,最后72 ℃延伸10 min。内参为GAPDH,采用2-ΔΔCt法计算BARD1表达水平。④血清TAP水平检测。收集患者无名指末梢血,制作两张血涂片,滴入3滴TAP试剂在涂片上;涂片干燥后,经TAP检测系统图像分析仪检测凝聚颗粒。对TAP聚合物面积进行检测,凝聚物不明显时,TAP水平为正常。

1.4随访 应用门诊和电话随访,每3个月到院随访影像学检查、肿瘤评估,末次随访日期为 2022年12月31日。

1.5统计学方法 采用SPSS18.0软件进行秩和检验或χ2检验、t检验,生存曲线分析采用 Kaplan-Meier 法。

2 结 果

2.1两组临床有效率比较 治疗后观察组临床有效率(87.90%,其中CR 31例、PR 10例、SD 10例、PD 7例)明显优于对照组(58.62%,其中CR 10例、DR 17例、SD 7例、PD 24例;χ2=12.72,P=0.000)。

2.2两组CEA、CA199、CA125表达水平比较 治疗前,两组CEA、CA199、CA125表达水平无明显差异(P>0.05);治疗后,两组上述指标较治疗前表达差异存在统计学意义,且观察组明显低于对照组(均P<0.05)。见表1。

表1 两组CEA及CA199、CA125比较

2.3两组免疫功能比较 治疗前,两组CD4+、CD8+、CD3+、CD4+/CD8+表达水平无明显差异(P>0.05);治疗后,两组上述两指标较治疗前差异存在统计学意义,且两组间差异显著(均P<0.05)。见表2。

2.4两组血清 BARD1 和TAP水平变化 治疗前,两组BARD1及TAP表达水平无明显差异(P>0.05);治疗后,两组上述指标表达较治疗前差异存在统计学意义,且观察组明显低于对照组(P<0.05)。见表2。

表2 两组CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+表达水平及血清BARD1、TAP水平比较

2.5两组临床预期生存时间比较 经随访,无失访患者,其中观察组19例死亡,对照组35例死亡。对照组中位生存时间〔(18.0±3.6)个月〕显著短于观察组〔(24.0±2.3)个月;χ2=10.076,P=0.002〕。见图1。

图1 治疗后两组预期生存时间比较

3 讨 论

DSOX化疗是目前晚期胃癌较常使用的化疗方案〔7,8〕。目前卡瑞利珠单抗在多种肿瘤中已有应用,均表明卡瑞利珠单抗对非小细胞肺癌和难治性经典霍奇金淋巴瘤均有较高缓解能力〔9〕。本研究显示,在晚期胃癌患者能够从其治疗中生存获益,DSOX化疗联合卡瑞利珠单抗对患者生存质量和治疗效果有提高作用,并延长患者生存时间。因此两种治疗方法联合使用可以明显提高临床有效率,PD-1可与T细胞表面PD-L1相结合,对T细胞激活有抑制作用,对 T细胞过度激活有抑制作用,造成自身免疫性疾病,患者免疫力出现降低,肿瘤细胞出现增殖,造成Src同源区酪氨酸磷酸酶-2募集,进而导致下游蛋白脾酪氨酸激酶磷酸化,其会抑制下游信号传导、T细胞增殖细胞因子分泌作用。卡瑞利珠单抗可特异性地阻断PD-1和PDL1的结合,从而造成T细胞激活,造成肿瘤细胞死亡。

CEA 作为一种广谱肿瘤标志物,其对黏附分子表达有促进作用,对肿瘤微环境有改变作用,在各种实体瘤中CEA均有升高,其成为较为公认的生物标志物〔10〕。CA19-9常由结肠、胆道导管细胞、胰腺合成,健康血清中表达较少,肿瘤患者血清表达增加,在恶性肿瘤转移有参与〔11〕。本研究结果表明,瑞利珠单抗结合DSOX方案对血清CEA、CA19-9水平有明显降低作用,抑制肿瘤进展〔12〕。在肿瘤发生及发展过程中,机体免疫功能在其中起重要作用,其中以T淋巴细胞介导的细胞免疫尤为重要,肿瘤患者免疫功能处于抑制状态,与正常健康群体相比,患者CD3+、CD4+T细胞减少,CD8+T细胞增多,CD4+/CD8+水平显著降低〔13,14〕。本研究发现,瑞利珠单抗结合DSOX方案能够进一步改善患者细胞免疫功能,可能与化疗后肿瘤细胞大量死亡使机体免疫抑制减轻有关,对机体免疫系统重建、肿瘤免疫监视恢复具有积极意义。

BARD1在小鼠模型肿瘤抗原筛选中首次被描述为肿瘤抗原,是一种肿瘤抑制因子,近年选择性剪接BARD1基因,多种肿瘤中均发现截短的BARD1亚型,其表达与疾病进展存在相关性〔15,16〕。TAP作为抑癌基因与癌基因突变后所产生物质钙组蛋白,在肿瘤细胞中表达水平较高〔17,18〕。当胃组织发生病理改变时,肿瘤细胞分泌大量的异常糖链糖蛋白,与钙组蛋白相结合形成TAP,因此,TAP可作为胃癌肿瘤增殖的特征〔19〕。肿瘤细胞、间质细胞、免疫细胞和细胞因子共同构成了中路的病理微环境,激活 PD-1/PD-L1 信号通路,可以抑制肿瘤微环境,抑制肿瘤细胞生长,促进其凋亡,激活 PD-1/PD-L1 信号通路还可以增强机体的抗肿瘤免疫能力,让肿瘤细胞处于缺氧状态〔20〕。可以促进色氨酸的分泌,激发T细胞反应,减少肿瘤细胞线粒体活动,减少肿瘤细胞表面主要组织相容性复合体Ⅰ分子的表达,最终使肿瘤细胞丧失抵抗细胞毒性T淋巴细胞的能力,达到治疗疾病的作用。

综上,卡瑞利珠单抗结合DSOX方案治疗晚期胃癌,对患者生存率有提高作用,对晚期胃癌治疗疗效有提高作用,并能降低血清CA125、CA19-9、CEA水平,降低胃癌患者血清肿瘤标志物水平,同时血清中和胃癌患者组织BARD1出现表达上调,提示BARD1可能与胃癌的发生发展有关,同时患者血清TAP水平与其疗效及预后有关。