2种猪繁殖与呼吸综合征抗体ELISA检测试剂盒的比较分析

王传锋 米青婕 皮志媛

摘要选取2种猪繁殖与呼吸综合征抗体ELISA检测试剂盒进行符合率、敏感性（Dse）、特异性（Dsp）、批内重复性（Re）比较分析，以期了解国产试剂盒与进口试剂盒在试验结果上的差异性。结果显示：通过对45份临床样品进行檢测发现金诺试剂盒检测敏感性（Dse）为84%，检测特异性（Dsp）为100%，2种试剂盒总符合率为91.11%。该研究结果为实验室检测猪繁殖与呼吸综合征抗体提供了试剂盒选用参考。

关键词猪繁殖与呼吸综合征；抗体检测；ELISA；Kappa检验；比较

中图分类号S 85文献标识码A

文章编号0517-6611（2023）24-0078-04

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2023.24.017

Comparative Analysis of Two Kinds of Antibody ELISA Kit for Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome

WANG Chuanfeng，MI Qingjie，PI Zhiyuan

（Yili Vocational and Technical College，Yining，Xinjiang 835000）

AbstractTwo kinds of ELISA Kit for porcine reproductive and respiratory syndrome antibody were selected to compare the coincidence rate，sensitivity （Dse），specificity （Dsp） and inbatch repeatability （Re），in order to understand the differences of experimental results between domestic and imported kits. The results showed that the detection sensitivity （Dse） and detection specificity （Dsp） of Jinnuo kit to 45 clinical samples were 84% and 100%，respectively. The total coincidence rate of the two kinds of kits was 91.11%. The study results provided references for the selection of laboratory kits for the detection of antibodies to porcine reproductive and respiratory syndrome.

Key wordsPorcine reproductive and respiratory syndrome;Antibody detection;ELISA;Kappa test;Comparison

猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的一种接触性传染病。临床表现主要以母猪出现流产、早产、死胎等现象，仔猪出现呼吸极度困难、咳嗽等症状［1］。猪繁殖与呼吸综合征的传播速度极快，特别是在发达国家猪群密集，更容易被传染［2］。

近年来，随着我国生猪存栏量的日益增加，加上交通运输业的蓬勃发展，生猪的流通日趋快捷，这都为猪繁殖与呼吸综合征的传播与流行提供了便利条件，同时也给动物疫病防控工作提出了新的挑战。猪繁殖与呼吸综合征的流行不仅会给养猪业带来巨大的经济损失，而且会对人类健康和生态环境产生潜在威胁［3］。

借助科学的动物疫病实验室检测技术，定期监测疫病是防控 PRRS的最有效措施。酶联免疫吸附测定（ELISA） 是目前应用最普遍的一种血清学实验室检测技术，被广泛应用于疫病抗体水平的检测［4］，具有灵敏性高、特异性强、重复性好、操作简便等特点。目前，市场上已开发多种检测PRRSV的商品化 ELSIA 试剂盒，但大部分都缺乏科学、规范的评价［5］。为筛选适用于实验室检测的试剂盒，该研究根据《传染病诊断方法的验证原则》［6］ 以及《出入境动物检疫诊断试剂盒质量评价规程》［7］ 的要求，对国产和进口PRRS抗体 ELISA 试剂盒进行符合率、敏感性、特异性、批内重复性比较分析，以期为ELISA试剂盒的选用提供参考。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1试剂。

1.1.1.1金标试剂盒。进口猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体检测试剂盒（IDEXX Q161）。

1.1.1.2参比试剂盒。国产猪繁殖与呼吸综合征抗体ELISA试剂盒（金诺试剂盒 20210510）。

1.1.2样品。

1.1.2.1病原血清。PRRSV血清：强阳性血清12份，弱阳性血清13份，阴性血清20份。

1.1.2.2特异性验证用血清。PRRSV病原抗体阴性且其他病原抗体阳性血清10份：PCV2 2份，PEDV 2份，PRV gE 2份，Mhp 2份，CSFV 2份。

1.1.3仪器与设备。酶标仪（深圳雷杜RT-6000）、96孔自动洗板机（山东博科BK-9622）、微量移液器（德国Eppendorf）、电热恒温培养箱（天津泰斯特DH124D）。

1.2试验方法

1.2.1符合率的测定。按照 ELISA 试剂盒的操作说明书对45份临床样品进行检测，以IDEXX试剂盒检测结果为金标准，按照《传染病诊断方法的验证原则》［6］中规定的方法对检测结果进行统计，分别计算金诺试剂盒的检测敏感性（Dse）和检测特异性（Dsp）。采用Kappa统计学方法，计算金诺试剂盒检测结果的Kappa值，从而评价检测结果的符合率。当Kappa值为0.81～1，说明2种试剂盒完全符合；当Kappa值为0.61～0.80，说明2种试剂盒检测结果高度符合；当Kappa值为0.41～0.60，说明2种试剂盒检测结果中度符合；当Kappa值为0.21～0.40，说明2种试剂盒检测结果比较符合；当0

检测敏感性（Dse）=a/（a+c）×100%

检测特异性（Dsp）=d/（b+d）×100%

Po=（a+d）/（a+b+c+d）

Pe=［（a+c）/（a+b+c+d）］×［（a+b）/（a+b+c+d）］+［（b+d）/ （a+b+c+d）］×［（c+d）/（a+b+c+d）］

Kappa=（Po-Pe）/（1-Pe）

Kappa值应大于等于0.6，Kappa值越接近1.0，符合率越高。

1.2.2敏感性检测。

将不同来源的强阳性血清2份，弱阳性血清1份，进行1×、2×、4×、8×、16×、32×、64×、128×倍比稀释后，再用不同试剂盒进行检测。每个血清、每个稀释度进行单孔检测。根据检测结果，比较2种试剂盒检测抗体的最低检测限，比较2种试剂盒的检测敏感性。

1.2.3特异性检测。

选取常见猪病各病原（PEDV、CSFV、PCV2、PRV gE、Mhp）抗体阳性血清10份，每份血清样品做单孔检测，根据检测结果，判定试剂盒是否与其他病原标准阳性血清有交叉反应。

1.2.4批内重复性的测定。选取猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体阳性血清6份、阴性血清2份，共8份样品进行检测，每个试剂盒每个样品做单孔检测，重复同一批次的3次检测。根据检测结果的S/P值，分别计算2种试剂盒S/P值的变异系数。

2结果与分析

2.1检测敏感性、特异性及符合率选择采集不同时期的血清，通过对45份临床样品进行检测，2种试剂盒PRRSV抗体检测结果见表2，金诺试剂盒与IDEXX试剂盒的比较见表3。由表2～3可知，与IDEXX试剂盒相比，金诺试剂盒检测敏感性（Dse）为84%，检测特异性（Dsp）为100%；2种试剂盒总符合率为91.11%，Po=0.911 1，Pe=0.496，Kappa =0.824，说明2种试剂盒检测完全符合。

2.2敏感性分析

根据表2检测结果，选取不同S/P值的3份阳性血清进行1×、2×、4×、8×、16×、32×、64×、128×倍比稀释。选择2种试剂盒进行检测，比较2种试剂盒的检测敏感性。结果显示：2种试剂盒的抗体检测结果与稀释度成正比，详见表4。

强阳性血清样品（血清编号532）IDEXX和金诺试剂盒的最高稀释倍数分别为64×和32×；阳性血清样品（血清编号518）IDEXX和金诺试剂盒的最高稀释倍数分别为4×和1×；弱阳性血清样品（血清编号576）IDEXX和金诺试剂盒的最高稀释倍数分别为2×和未检出；IDEXX试剂盒的检测敏感性高于金诺试剂盒（表5）。

2.3特异性分析

用2种试剂盒对PEDV、CSFV、PCV2、PRV gE、Mhp病原共10份阳性血清进行检测，每种病原各2份血清。结果显示：PRRSV抗体全部呈阴性，均无交叉反应，说明金诺试剂盒和IDEXX试剂盒特异性良好，具体见表6。

2.4批内重复性分析

用相同批次的IDEXX试剂盒和金诺试剂盒对6份猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体阳性血清和2份阴性血清（血清编号分别为811和111）进行3次重复检测。结果显示：2种试剂盒重复性较好，阴性血液样本S/P值均小于0.4。每种试剂盒进行3次重复检测，阳性血清样品S/P值整体一致（图1）。

阳性样品的IDEXX试剂盒和金诺试剂盒3次检测的S/P值变异系数平均值分别为13.05%和15.85%，说明IDEXX试剂盒批内重复性均较好，金诺试剂盒批内重复性不如IDEXX试剂盒（表7）。

3讨论

目前商品化检测试剂盒众多，但质量评估方法并不完善，只能在使用时通过主观判断或者简单的数据对比来评估试剂盒的检测效果［8］。阮周曦等［9］利用4种ELISA试剂盒开展猪繁殖与呼吸综合征抗体水平监测和免疫效果评估，结果显示4种试剂盒的Kappa值均大于0.90，但不同试剂盒的检测时长有差异，在检测工作中应根据具体情况合理选择试剂盒。

该试验检测结果表明，从敏感性来看，与金诺试剂盒相比，IDEXX试剂盒更加灵敏，金诺试剂盒检测敏感性（Dse）为84%，检测特异性（Dsp）为100%，特异性良好；总符合率为91.11%，Po=0.911 1，Pe=0.496，Kappa =0.824，说明2种试剂盒特异性高度一致，IDEXX试剂盒敏感性高于金诺试剂盒。

多年来，ELISA检测方法被广泛应用于实验室的多种检测项目［10］。能否刺激机体产生有效的免疫保护都需要进行免疫效果的评估，采取积极有效的评估方法对于检验猪场的疫苗免疫效果十分重要。实验室可从检测目的、检测成本及试剂盒操作流程简化程度等方面综合考虑，选择相应的试剂盒。该试验旨在了解2种PRRSV抗體检测试剂盒的检测效果，为从事相关检测工作的科研人员提供数据支持和理论依据，从而更好地为临床检测工作服务。

参考文献

［1］马思续，崔春晓，张留君，等.不同包被抗原检测 PRRS 抗体间接 ELISA 方法的建立［J］.中国兽医学报，2018，38（6）：1082-1087.

［2］ 佟秀英，陈国峰.猪繁殖与呼吸综合征免疫学分析［J］.中国畜牧业，2023（14）：50-51.

［3］ 吴君英，韦林.规模化猪场猪繁殖与呼吸综合征的诊断与防控［J］.北方牧业，2023（6）：39-40.

［4］ 官家明，施开创，陈汉忠，等.猪繁殖与呼吸综合征病毒检测技术研究进展［J］.动物医学进展，2013，34（8）：88-92.

［5］ 李乃果，贾松涛.不同进口蓝耳病病原抗体 ELISA 检测试剂盒比较及应用浅析［J］. 中国猪业，2019，14（5）：82-84.

［6］ OIE.Principles and methods of validation of diagnostic assays for infectious diseases［M］//World Organisation for Animal Health.Manual of diagnostic tests and vaccines for terrestrial animals.Paris：OIE，2013.

［7］ 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局.

出入境动物检疫诊断试剂盒质量评价规程：SN/T 2435—2010［S］.北京：中国标准出版社，2010.

［8］ 高登军，刘国民，陈广林，等.不同品牌试剂盒检测猪口蹄疫O型、A型抗体水平对比评估［J］.兽医导刊，2023（1）：35-37.

［9］ 阮周曦，杨俊兴，黄韫，等.4种检测猪繁殖与呼吸综合征抗体间接ELISA试剂盒的比较［J］.中国口岸科学技术，2020（6）：40-45.

［10］ 李燕红，王敏，夏晓.ELISA检测过程中影响因素及应对策略［J］.人人健康，2019（22）：250-251.