绞股蓝改善睡眠有效成分的研究

史腊腊 申世红

(西北大学化工学院,西安,710069)

失眠症是影响人民生命质量的高发病率疾病,全球失眠症患病率在15%左右。长期失眠会给人的正常生活和工作带来不良影响,甚至对生命造成危害[1]。临床常见的失眠形式有睡眠潜伏期延长、睡眠维持障碍、睡眠质量下降、睡眠时间缩短、日间残留效应等[2]。

药物是治疗失眠症的重要方法之一,中药作为药物的重要组成部分,治疗失眠历史悠久,不良反应小且效果显著[3]。已有研究表明,绞股蓝、茯苓、酸枣仁、柏子仁、灵芝、五味子、菊花、甘草、龙眼、西番莲、西红花、栀子等中药提取物具有促进睡眠的作用[4-6]。绞股蓝[GynostemmaPentaphyllum(Thunb.)Makino]是葫芦科绞股蓝属植物之一。其含有皂苷、多糖、黄酮类等化合物及铁、锌、铜、锰、硒等20多种微量元素[7],具有滋补保健、抗癌防衰、增强体质和改善睡眠等多种功能,是近年来国内植物源治疗失眠药物的研究热点[8]。徐露等[9-10]研究了绞股蓝皂苷对小鼠睡眠的影响,证明绞股蓝皂苷具有催眠、镇静作用。李景良等[11]研究了绞股蓝多糖口服液对失眠患者的睡眠影响,验证了绞股蓝多糖的睡眠改善功效。然而,目前关于绞股蓝改善睡眠的研究主要集中在生药或某一单一组分的改善睡眠功效,尚无对绞股蓝各活性组分之间药效比较的研究。

本研究以小鼠为试验对象,对绞股蓝生药水提物、绞股蓝皂苷、绞股蓝多糖进行改善睡眠功能试验,评价不同组分对小鼠睡眠的影响,探究绞股蓝改善睡眠功效的主要来源,为绞股蓝开发改善睡眠产品提供理论支持。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 动物 SPF级昆明小鼠(体质量18～22 g),雌性,由陕西省西安市西安交通大学医学部实验动物中心提供(许可证号:SCXK(陕)2020-001)。动物饲养于屏障级动物房,温度20～25 ℃,相对湿度50%～60%,12 h照明和12 h黑暗交替,允许动物自由摄食和饮水。

1.2 药物 绞股蓝水提物(提取得率为18%)、绞股蓝皂苷、绞股蓝多糖均购自陕西汉中天然谷生物科技股份有限公司。

1.3 仪器与试剂 计时器、玻璃匀浆器、ME104E/02型电子天平,梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司产品;BioTek全波长酶标仪,美国伯腾仪器有限公司产品;TGL-20台式高速离心机,山东百欧医疗科技有限公司产品。生理盐水、戊巴比妥钠,中国医药(集团)上海化学试剂公司产品;巴比妥钠,中国医药(集团)上海化学试剂公司产品;五羟色胺(5-HT)、γ-氨基丁酸(GABA)和多巴胺(DA)酶联免疫吸附测定(ELSIA)试剂盒,南京建成生物工程研究所产品。

1.4 方法

1.4.1 动物分组及给药 将70只小鼠按照体质量随机分为7个组,即6个观察组和1个空白对照组,每组10只。以灌胃的方式给予小鼠受试药物,灌胃量为10 mL/(kg·BW),1次/d,空白对照组给予等量的蒸馏水。设置绞股蓝水提物低、高剂量组,分别按50、100 mg/(kg·BW)给药;绞股蓝皂苷低、高剂量组,分别按5、10 mg/(kg·BW),给药;绞股蓝多糖低、高剂量组,分别按5、10 mg/(kg·BW)给药。试验期间动物自由摄食饮水,每天观察小鼠的活动及生长情况。灌胃30 d后,对各组小鼠进行相关指标的检测。

1.4.2 直接睡眠试验 在末次灌胃15 min后观察小鼠睡眠情况。当清醒小鼠置于背卧位时,能够立即翻正身位。如果超过60 s小鼠不能翻正,说明翻正反射消失,记为小鼠进入睡眠,从翻正反射消失到其恢复的时间为小鼠的睡眠时间。分别观察并计算各组小鼠的入睡只数及睡眠时间。

1.4.3 延长戊巴比妥钠睡眠时间试验 在末次灌胃15 min后,各组小鼠腹腔注射戊巴比妥纳45 mg/(kg·BW),分别记录各组动物的平均睡眠时间。

1.4.4 戊巴比妥钠阈下剂量催眠试验 在末次灌胃15 min后,各组小鼠腹腔注射戊巴比妥钠27 mg/(kg·BW),分别记录各组30 min内入睡动物只数。

1.4.5 巴比妥钠睡眠潜伏期试验 在末次灌胃15 min后,各组小鼠腹腔注射巴比妥钠230 mg/(kg·BW),观察受试药物能否缩短巴比妥钠睡眠潜伏期。

1.4.6 脑组织5-HT、GABA、DA含量的检测 各组小鼠连续灌胃30 d后,禁食12 h,处死小鼠,取出脑组织,用生理盐水冲洗后称其质量,用匀浆器制备10%的脑组织匀浆,4 ℃条件下8 000 r/min离心10 min后取上清液,按照试剂盒说明书采用ELISA测定各组小鼠脑组织中5-HT、GABA、DA的含量。

2 结果

2.1 直接睡眠试验 空白对照组、绞股蓝水提物、绞股蓝皂苷、绞股蓝多糖各剂量组的小鼠均未出现睡眠现象,各组均无直接睡眠效果(均P>0.05)。见表1。

表1 绞股蓝水提物、绞股蓝皂苷及绞股蓝多糖对小鼠直接睡眠试验的影响(n=10)

2.2 延长戊巴比妥钠睡眠时间试验 与空白对照组比较,绞股蓝水提物、绞股蓝皂苷、绞股蓝多糖高剂量组小鼠的戊巴比妥钠睡眠时间与空白对照组比较极显著延长(P<0.01或P<0.001);且绞股蓝水提物、绞股蓝皂苷高剂量组与绞股蓝多糖组比较,更能显著延长小鼠戊巴比妥钠睡眠时间(P<0.05),但是绞股蓝水提物组与绞股蓝皂苷高剂量组差异不显著。低剂量组中仅有绞股蓝皂苷组小鼠的戊巴比妥钠睡眠时间与空白对照组比较显著延长(P<0.05)。见表2。

表2 绞股蓝水提物、绞股蓝皂苷及绞股蓝多糖对戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠时间的影响(n=10)

2.3 戊巴比妥钠阈下剂量催眠试验 与空白对照组比较,绞股蓝水提物、绞股蓝皂苷高剂量组能显著增加戊巴比妥钠阈下催眠剂量入睡小鼠只数(P<0.001),但绞股蓝水提物与绞股蓝皂苷、绞股蓝多糖组差异不显著。绞股蓝水提物、绞股蓝皂苷低剂量组以及绞股蓝多糖高剂量组能显著增加戊巴比妥钠阈下催眠剂量入睡小鼠只数(P<0.05)。见表3。

表3 绞股蓝水提物、绞股蓝皂苷及绞股蓝多糖对巴比妥钠阈下剂量催眠作用的影响(n=10)

2.4 巴比妥钠睡眠潜伏期试验 与空白对照组比较,绞股蓝水提物、绞股蓝皂苷高剂量组显著缩短巴比妥钠诱导的小鼠睡眠潜伏期的作用(P<0.001)。与绞股蓝多糖组比较,绞股蓝水提物、绞股蓝皂苷高剂量组更能显著缩短小鼠睡眠潜伏期(P<0.05),但是绞股蓝水提物与绞股蓝皂苷高剂量组之间差异不显著。绞股蓝水提物、绞股蓝皂苷低剂量组与空白对照组比较,小鼠睡眠潜伏期显著缩短(P<0.05),但是2组组间差异不显著。见表4。

表4 绞股蓝水提物、绞股蓝皂苷及绞股蓝多糖对巴比妥钠睡眠潜伏期的影响(n=10)

2.5 绞股蓝水提物、绞股蓝皂苷、绞股蓝多糖对失眠小鼠脑组织5-HT、GABA、DA含量的影响 与空白对照组比较,绞股蓝水提物高剂量组5-HT、GABA显著升高(P<0.01),DA含量显著降低(P<0.01);绞股蓝皂苷高剂量组5-HT、GABA含量显著升高(P<0.01或P<0.001),DA含量显著降低(P<0.01);绞股蓝多糖高剂量组GABA含量显著升高(P<0.01),DA含量显著降低(P<0.05)。其中,与绞股蓝多糖组比较,绞股蓝水提物、绞股蓝皂苷高剂量组小鼠的DA含量显著降低(P<0.05),但是2组之间无显著性差异。见表5。

表5 各组小鼠脑组织中5-HT、GABA、DA的含量比较

3 讨论

本研究为探讨绞股蓝改善睡眠的功效成分,采用绞股蓝水提物、绞股蓝皂苷、绞股蓝多糖灌胃小鼠,通过直接睡眠法、延长戊巴比妥钠睡眠时间、戊巴比妥钠阈下剂量催眠试验、巴比妥钠睡眠潜伏期试验比较不同组分对小鼠睡眠的作用,并对小鼠脑组织中的5-HT、GABA、DA含量进行了测定,结果显示,绞股蓝皂苷、绞股蓝水提物在10 mg/kg以及100 mg/kg剂量下对小鼠的改善睡眠作用明显,此时小鼠脑组织的5-HT、GABA含量与空白对照组比较显著升高(P<0.05或P<0.01或P<0.001),DA水平也显著低于空白对照组(P<0.05或P<0.001)。但是绞股蓝皂苷与绞股蓝水提物组对小鼠睡眠的改善作用差异不明显。研究表明,周署[12]等人在临床上用绞股蓝总皂苷100～200 mg/(kg·d),患者连续服用1个月,对失眠、精神不安等神经官能证均有显著疗效。绞股蓝水提物中含有多糖和皂苷等成分[13-14],但绞股蓝多糖对小鼠的改善睡眠作用并不明显,这说明绞股蓝对小鼠改善睡眠作用的主要功效成分可能是绞股蓝皂苷。

据《本草纲目》记载,绞股蓝性寒、味苦,常用绞股蓝泡水饮,可治疗咽喉炎及气管炎、偏头痛及睡眠不良[15]。皂苷、多糖与黄酮类化合物是其主要活性成分[16]。绞股蓝黄酮类化合物改善睡眠功效未见报道,因此本试验未设置绞股蓝黄酮组。汤浮康[17]采用绞股蓝复方中药治疗不寐症患者93例,治愈38例,有效51例,无效4例,总有效率为95.7%,证明绞股蓝水溶液能够治疗不寐症。江砚等[18]采用整体动物实验方法,检测大鼠下丘脑中的单胺类神经递质(L-NE、DA、5-HIAA、5-HT)和小鼠海马组织中的谷氨酸、γ-氨基丁酸,对给药后动物脑神经递质进行含量测定,结果表明绞股蓝总皂苷具有明显的镇静、催眠作用。3种成分均可改善睡眠,这与本试验的结果一致。绞股蓝水提物与绞股蓝皂苷改善睡眠效果无显著性差异,这是因为绞股蓝皂苷大多溶于水[19]。且水提绞股蓝工艺简单、成本较低、无溶剂污染,日常生产中广为使用[20]。

综上所述,绞股蓝皂苷具有明显的镇静、催眠作用,是绞股蓝改善睡眠主要功效成分,其作用机制有待进一步探讨。

利益冲突声明:无。