重症急性胰腺炎患者血清Apelin-13 与自噬标志物的相关性及其临床意义

楚紫栋 李健镖 刘小军

重症急性胰腺炎（Severe acute pancreatitis，SAP）是一类病情危重、死亡率高的急腹症，深入探索SAP 的分子生物学机制不仅有助于发现特异性的病情评价标志物，也有助于发现有效的治疗靶点［1］。自噬是维持细胞生成的机制之一，但在病理条件下过度激活的自噬会加重组织损伤。已有临床研究报道，SAP 发病过程中存在细胞自噬的过度激活，血清中自噬标志物Beclin-1 含量增加与SAP 病情加重有关［2］；另有一项基础研究对SAP发病过程中细胞自噬的上游机制展开探索，结果显示Apelin 家族成员Apelin-13 在SAP 动物模型中减轻胰腺损伤、抑制细胞自噬［3］。为进一步获取Apelin-13 调控细胞自噬参与SAP 发生发展的临床证据，本研究分析了SAP 患者血清Apelin-13 与自噬标志物的相关性及临床意义。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选择2017 年8 月至2022 年8 月期间郑州大学第二附属医院收治的168 例急性胰腺炎患者作为研究对象，纳入标准：①符合指南中急性胰腺炎的诊断标准［4］；②临床资料完整；③治疗前留取血清标本。④所有患者或家属均签署知情同意书。排除标准：①入院前接受过抗感染治疗；②合并恶性肿瘤、自身免疫性疾病；③既往有胰腺手术、胰腺炎病史。根据病情严重程度将急性胰腺炎患者分为轻症急性胰腺炎（MAP）和重症急性胰腺炎SAP，分别作为MAP 组（n=92）和SAP 组（n=76）。另取体检的健康志愿者115 名作为对照组。三组间一般资料的比较差异无统计学意义（P＞0.05），有可比性。见表1。本实验经医院伦理委员会批准。

表1 三组间一般资料的比较（）Table 1 Comparison of general data among three groups（）

表1 三组间一般资料的比较（）Table 1 Comparison of general data among three groups（）

1.2 方法

1.2.1 血清指标检测

入院时采集MAP 组和SAP 组的外周静脉血3～5 mL，对照组体检时采集空腹外周静脉血3～5 mL，静置30 min 自然凝血后在离心机中以转速3 000 r/min、半径5 cm、温度4℃离心10 min，分离血清后采用酶联免疫吸附法试剂盒（上海西唐生物科技公司）检测Apelin-13、Beclin-1含量，检测仪器为Elx800 型酶标仪（美国Bio-Tek公司）。

1.2.2 SAP 病情的评价

参照指南［4］，根据SAP 患者入院后24 小时内各项指标的最差值计算急性生理和慢性健康评分Ⅱ（Acute Physiology and Chronic Health EvaluationⅡ，APACHEII）评分、急性胰腺炎严重程度床边指数评分（Acute pancreatitis severity bedside index，BISAP）、序贯器官衰竭（Sequentital organ failure assessment，SOFA）评分。APACHEⅡ、BISAP、SOFA得分越高，SAP 的病情越重。

1.2.3 SAP 预后的评价

根据SAP 患者治疗28 d 的结局评价预后，28 d死亡的患者为预后不良、存活的患者为预后良好。

1.3 统计学处理

采用IBM 公司的SPSS 软件（22.0 版本）对数据进行统计学处理，计数资料用n（%）表示、进行卡方检验，计量资料用（）表示，进行单因素方差分析或独立样本t检验；血清指标对SAP 的诊断价值、对SAP 预后的预测价值采用ROC 曲线分析。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组间血清Apelin-13、Beclin-1 含量的比较

三组间血清Apelin-13 含量比较为MAP 组＜SAP 组＜对照组，Beclin-1 含量比较为MAP 组＞SAP组＞对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 三组间血清Apelin-13、Beclin-1 含量的比较（）Table 2 Comparison of serum Apelin-13 and Beclin-1 levels among three groups（）

表2 三组间血清Apelin-13、Beclin-1 含量的比较（）Table 2 Comparison of serum Apelin-13 and Beclin-1 levels among three groups（）

注：与对照组比较，aP＜0.05；与MAP 组比较，bP＜0.05。

2.2 SAP 患者血清Apelin-13、Beclin-1 含量的相关性

SAP 组患者血清Apelin-13 含量与Beclin-1 含量具有负相关关系（r=-0.357，P＜0.05）。

2.3 血清Apelin-13、Beclin-1 含量对SAP 的诊断价值

血清Apelin-13、Beclin-1 两项血清指标均对SAP 具有诊断价值。见表3、图1。

图1 血清Apelin-13、Beclin-1 含量诊断SAP 的ROC 曲线Figure 1 ROC curve of serum Apelin-13 and Beclin-1 levels for diagnosing SAP

表3 血清Apelin-13、Beclin-1 含量诊断SAP 的效能Table 3 Efficacy of serum Apelin-13 and Beclin-1 levels in diagnosing SAP

2.4 SAP 患者血清Apelin-13、Beclin-1 含量与病情严重程度的相关性

SAP 患者的血清Apelin-13 含量与APACHEⅡ评分、BISAP 评分、SOFA 评分呈负相关，相关系数分别为-0.351、-0.374、-0.328（P＜0.05）；Beclin-1 含量与APACHEⅡ评分、BISAP 评分、SOFA 评分呈正相关，相关系数分别为0.414、0.387、0.391（P＜0.05）。

2.5 SAP 组中不同预后患者血清Apelin-13、Beclin-1 含量的比较

SAP 组中预后不良患者的血清Apelin-13 含量低于预后良好患者，血清Beclin-1 含量高于预后良好患者，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表4。

表4 SAP 组中不同预后患者血清Apelin-13、Beclin-1含量的比较（）Table 4 Comparison of serum Apelin-13 and Beclin-1 levels between patients with different prognosis in the SAP group（）

表4 SAP 组中不同预后患者血清Apelin-13、Beclin-1含量的比较（）Table 4 Comparison of serum Apelin-13 and Beclin-1 levels between patients with different prognosis in the SAP group（）

2.6 血清Apelin-13、Beclin-1 含量对SAP 患者预后的预测价值

血清Apelin-13、Beclin-1 两项血清指标均对SAP 预后具有预测价值，诊断效能见表5、图2。

图2 血清Apelin-13、Beclin-1 含量预测SAP 预后的ROC曲线Figure 2 ROC curve of serum Apelin-13 and Beclin-1 levels in predicting prognosis of SAP

表5 血清Apelin-13、Beclin-1 含量预测SAP 预后的效能Table 5 Effectiveness of serum Apelin-13 and Beclin-1 levels in predicting the prognosis of SAP

3 讨论

SAP 约占急性胰腺炎的15%左右，病情凶险、死亡率高，根据国内外的临床研究数据，SAP 的死亡率约15%～30%［5-7］。尽管近些年肠内营养支持、连续血液净化技术、生物靶向药物等SAP 治疗手段取得了明显进步，SAP 救治的成功率也有所提高［8-9］，但受限于疾病的发病机制不明确，临床上缺乏能够早期识别病情进展及预后不良的特异性标志物、也缺乏有效治疗疾病的分子靶点。

近些年随着SAP、重症肺炎、脓毒症等感染性疾病分子机制研究的深入，除了炎症反应级联放大激活的生物学特征外，细胞自噬异常也与重症感染的病情加重及多脏器损伤有关［10-13］。自噬是通过溶酶体降解受损蛋白质和细胞器并用于再循环，Beclin-1 高表达是自噬激活的特征之一，适度的自噬有利于在病理条件下维持细胞内环境稳定、促进细胞存活，而过度的自噬会加重细胞损伤。多项动物实验结果表明抑制自噬显著减轻脓毒症大鼠、胰腺炎大鼠的全身炎症反应及脏器损伤［14-16］；本研究及其他临床研究［2］结果表明SAP 患者血清中自噬标志物Beclin-1 的含量增加且与病情加重及预后不良有关。

细胞自噬的调控机制复杂，Apelin 是一组具有多样生物学活性的肽类激素，其中Apelin-13 是正常人体血清中主要的Apelin 家族成员，相关的基础研究证实Apelin-13 是自噬的上游调控因子，在胰腺炎大鼠模型中Apelin-13 对全身炎症反应及自噬的激活具有抑制作用。生理条件下血清中Apelin-13 含量丰富，一项颅脑损伤相关的临床研究证实血清Apelin-13 降低与颅脑损伤病情加重及预后不良有关［17］。本研究对胰腺炎发生发展中Apelin-13 的变化规律进行了探索，SAP 和MAP 患者的血清Apelin-13 含量均低于健康者且SAP 患者的上述变化更显著，提示Apelin-13 减少与急性胰腺炎的发生以及病情从MAP 发展至SAP 有关。

Apelin-13 是抑制细胞自噬的上游因子，本研究通过相关性分析证实SAP 患者的血清Apelin-13含量与Beclin-1 含量呈负相关，提示SAP 发病过程中Apelin-13 发挥抑制自噬的作用，Apelin-13 含量减少会削弱其抑制自噬的作用、进而导致自噬的过度激活。已有基础和临床研究报道自噬激活导致SAP 病情加重，本研究分析了自噬上游调控因子Apelin-13 与SAP 病情的关系，血清中Apelin-13 的含量与病情评分与APACHEⅡ评分、BISAP 评分、SOFA 评分呈负相关，表明SAP 患者血清Apelin-13含量降低与病情加重有关，符合Apelin-13 在胰腺炎大鼠中减轻自噬及病情的生物学作用。进一步对预后进行分析可知：预后不良的SAP 患者血清Apelin-13 含量低于预后良好的SAP 患者，血清Apelin-13 含量对SAP 患者的预后具有预测价值。

综上所述，SAP 患者血清Apelin-13 含量降低与自噬标志物Beclin-1 含量增加相关，两者能诊断SAP、评价SAP 预后。以上结果为今后深入认识Apelin-13 调控自噬在SAP 发生发展中的生物学作用提供了临床研究证据。